植物组织培养的一般技术课件.ppt
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1、关于植物组织培养的一般技术第1页,此课件共36页哦植物组织培养的一般技术植物组织培养的一般技术v操作技术操作技术v培养基的成分及作用培养基的成分及作用 v培养基的种类与选择培养基的种类与选择 v培养基的配制方法培养基的配制方法第2页,此课件共36页哦操作技术操作技术v洗涤洗涤 v灭菌灭菌v无菌操作无菌操作 v培养容器封口物的种类及制作培养容器封口物的种类及制作第3页,此课件共36页哦灭菌灭菌 v有菌的范畴有菌的范畴:凡是暴露在(未经处理的)空气中的物体,曾经:凡是暴露在(未经处理的)空气中的物体,曾经接触过自然水源的物体,至少它的表面,毫无例外都是有菌接触过自然水源的物体,至少它的表面,毫无例
2、外都是有菌的。它的内部在未经证实之前,也应该作为有菌物体来看待。的。它的内部在未经证实之前,也应该作为有菌物体来看待。v无菌的范畴无菌的范畴:经过高温灼烧或蒸煮过后的物体,经其他物理或者化学:经过高温灼烧或蒸煮过后的物体,经其他物理或者化学灭菌方法处理过后的物体,是无菌的。高层大气、岩石的内部,健康灭菌方法处理过后的物体,是无菌的。高层大气、岩石的内部,健康的动物和植物不与内外部表面接触的组织内部很可能是无菌的。强酸的动物和植物不与内外部表面接触的组织内部很可能是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等表面和内部是无菌的。强碱、化学灭菌剂等表面和内部是无菌的。无菌的世界远远小于有菌的世界!无菌的世界远远
3、小于有菌的世界!第4页,此课件共36页哦灭菌灭菌v培养基的灭菌培养基的灭菌v不耐热的物质将采用过滤灭菌不耐热的物质将采用过滤灭菌v玻璃器皿及耐热用具等可采用玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌干热灭菌v用于无菌操作的器械采用用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌灼烧灭菌v布制品采用布制品采用高压灭菌高压灭菌v其他其他v植物材料的表面灭菌植物材料的表面灭菌第5页,此课件共36页哦培养基的成分及作用培养基的成分及作用v在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分:在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分:大量元素大量元素 微量元素微量元素 铁盐铁盐 有机成分有机成分 琼脂琼脂 糖糖 植物激素植物激素 PH
4、PH 其它成分其它成分 第6页,此课件共36页哦大量元素大量元素v植物所需要的元素,其浓度大于植物所需要的元素,其浓度大于0.50.5毫摩尔毫摩尔/升应该属于大量元素升应该属于大量元素v大量元素包括大量元素包括C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S等九种元素,他们等九种元素,他们占植物干重的百分之几十到万分之几占植物干重的百分之几十到万分之几v生理作用:生理作用:1 1)参与肌体构造;)参与肌体构造;2 2)构成一些特殊的生理活性物质;)构成一些特殊的生理活性物质;3 3)电化学方面的作用)电化学方面的作用:维持离子浓度平衡,胶体稳定,电荷平维持离子浓度平衡
5、,胶体稳定,电荷平衡;衡;4 4)发育方面起的作用:影响植物组织形态发生、器官形成。)发育方面起的作用:影响植物组织形态发生、器官形成。第7页,此课件共36页哦微量元素微量元素v植物所需要的元素,其浓度小于植物所需要的元素,其浓度小于0.50.5毫摩尔毫摩尔/升应该属于微升应该属于微量元素。量元素。v 微量元素包括微量元素包括FeFe、CuCu、MoMo、ZnZn、NaNa、MnMn、CoCoB B和和I I等,通常等,通常培养基中添加培养基中添加1010-7-71010-5-5就可满足需要就可满足需要v生理作用生理作用:酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能等方面:酶的催化、细胞分化和维持细胞
6、完整机能等方面 第8页,此课件共36页哦多年的研究结果:多年的研究结果:CuCu有促进离体根生长的作用;有促进离体根生长的作用;MoMo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素,也是固是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素,也是固氮酶的组成部分,还有防止叶绿素受破坏的作用;氮酶的组成部分,还有防止叶绿素受破坏的作用;MgMg、ZnZn、NaNa是酶的组成成份,也有防止叶绿素破坏的是酶的组成成份,也有防止叶绿素破坏的作用;作用;MnMn与植物的呼吸作用和光合作用有关;与植物的呼吸作用和光合作用有关;B B与糖的运输、蛋白质的合成有关。与糖的运输、蛋白质的合成有关。第9页,此课件共36页哦 当缺乏某种元
7、素时,往往会表现一些当缺乏某种元素时,往往会表现一些缺素症:缺素症:缺缺N N:某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩,导管不能形:某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩,导管不能形成;成;缺缺N N、P P、K K:细胞变得肥肿而形成层组织减少;:细胞变得肥肿而形成层组织减少;缺缺S S:产生非常明显的黄萎病;缺:产生非常明显的黄萎病;缺FeFe:细胞分裂停止;:细胞分裂停止;缺缺B B:细胞分裂和细胞生长延缓;:细胞分裂和细胞生长延缓;缺缺MnMn或或MoMo:生长受影响。:生长受影响。第10页,此课件共36页哦铁盐铁盐v采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结
8、合成螯合铁配置而成成v作用作用:促进细胞的分裂与生长;影响叶绿体的结构组成:促进细胞的分裂与生长;影响叶绿体的结构组成与叶绿素的形成。与叶绿素的形成。第11页,此课件共36页哦有机成分有机成分v维生素类维生素类:植物组织培养中经常使用维:植物组织培养中经常使用维C C、维、维B1B1(盐酸硫胺素)、(盐酸硫胺素)、维维B6B6(盐酸吡哆素)、维(盐酸吡哆素)、维H H(生物素)、叶酸和烟酸等,一般使用(生物素)、叶酸和烟酸等,一般使用的浓度为的浓度为0.110mg/l0.110mg/lv肌醇肌醇:本身没有促进生长的作用,但有助于活性物质的发挥,并参:本身没有促进生长的作用,但有助于活性物质的发
9、挥,并参与糖代谢,能使培养组织快速生长,对胚状体和芽的形成有良好的与糖代谢,能使培养组织快速生长,对胚状体和芽的形成有良好的影响影响v氨基酸氨基酸:甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解:甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白酪蛋白、水解乳蛋白v有机添加物有机添加物:椰乳、香蕉等:椰乳、香蕉等 第12页,此课件共36页哦琼脂琼脂v一种从海藻中提取出来的凝固剂,一般使用浓度为一种从海藻中提取出来的凝固剂,一般使用浓度为0.6%1%0.6%1%。以前使用琼脂条,现在使用琼脂粉,以色。以前使用琼脂条,现在使用琼脂粉,以色白、洁净的为好。白、洁净的为好。第13页,
10、此课件共36页哦糖糖v糖的作用糖的作用:a.a.作为作为C C源,为细胞提供合成新化合物的碳骨架;源,为细胞提供合成新化合物的碳骨架;b.b.为为细胞的呼吸代谢提供底物与能源;细胞的呼吸代谢提供底物与能源;c.c.维持一定的渗透势。维持一定的渗透势。v使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖,一般的使用浓度为使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖,一般的使用浓度为2%4%2%4%。v一般来说,以蔗糖做糖原时,离体的双子叶植物的根生长得最好,一般来说,以蔗糖做糖原时,离体的双子叶植物的根生长得最好,而以葡萄糖为而以葡萄糖为C C源时,单子叶植物的根生长得最好。源时,单子叶植物的根生长得最好。v为了节省成本,一般选用食用白
11、糖。为了节省成本,一般选用食用白糖。第14页,此课件共36页哦植物激素植物激素v生长素类生长素类v细胞分裂素类细胞分裂素类v其它植物激素其它植物激素赤霉素(赤霉素(GAGA3 3)脱落酸(脱落酸(ABAABA)多效唑(多效唑(PPPP333333)第15页,此课件共36页哦生长素类生长素类v主要作用主要作用:诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根,:诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根,更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和不定芽的产生。更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和不定芽的产生。v常用的生长素类物质常用的生长素类物质:2 2,4 4D D(2 2,4
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