细胞生物学细胞生物学研究方法精选PPT.ppt

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1、关于细胞生物学细胞生物学关于细胞生物学细胞生物学研究方法研究方法第1页，讲稿共67张，创作于星期三F显微镜技术显微镜技术第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术m(10-6m)nm(10-9m)(10-10m)肉眼分辨率肉眼分辨率肉眼分辨率肉眼分辨率:0.2mm:0.2mm光学显微镜光学显微镜光学显微镜光学显微镜:0.2m:0.2m电子显微镜电子显微镜电子显微镜电子显微镜:0.2nm:0.2nm第2页，讲稿共67张，创作于星期三显微镜技术显微镜技术1光学显微镜技术光学显微镜技术2电子显微镜技术电子显微镜技术SEM（scanningele

2、ctronmicroscope）TEM（transmitionelectronmicroscope）3扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第3页，讲稿共67张，创作于星期三一、光学显微镜技术一、光学显微镜技术F以可见光（或紫外光）为光源以可见光（或紫外光）为光源F类型类型普通复式光学显微镜普通复式光学显微镜特殊光学显微镜：相差和微分干涉显微镜、录像增差显微镜、暗视特殊光学显微镜：相差和微分干涉显微镜、录像增差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜等野显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜等多功能显微镜多功能

3、显微镜激光扫描共焦显微镜激光扫描共焦显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第4页，讲稿共67张，创作于星期三1、普通复式光学显微镜、普通复式光学显微镜F构成：构成：F性能参数：性能参数：分辨率分辨率放大率放大率F特点和局限性特点和局限性第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第5页，讲稿共67张，创作于星期三（1）普通复式光学显微镜性能参数）普通复式光学显微镜性能参数F分辨率：区分开两点间的最小距离分辨率：区分开两点间的最小距离 R=0.61/nsin(/2)NA=nsi

4、n(/2)NA(numerical aperture)NA(numerical aperture)为物镜的数值孔径值为物镜的数值孔径值F影响分辨率的因素影响分辨率的因素入射光的波长入射光的波长镜口角镜口角介质的折射率介质的折射率第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第6页，讲稿共67张，创作于星期三（2）普通复式光学显微镜特点和局限性）普通复式光学显微镜特点和局限性F特点：特点：明视场显微镜是以标本的颜色及其透射率为基础明视场显微镜是以标本的颜色及其透射率为基础的显微镜。的显微镜。一般需要对处理过的样品（固定染色）进行观察一般需要对处

5、理过的样品（固定染色）进行观察以可见光为光源（波长范围以可见光为光源（波长范围400nm-700nm400nm-700nm）F局限性局限性难以观察活的样品难以观察活的样品分辨能力有限分辨能力有限 能不能用光学显微镜观察活细胞呢？能不能用光学显微镜观察活细胞呢？能不能用光学显微镜观察活细胞呢？能不能用光学显微镜观察活细胞呢？第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第7页，讲稿共67张，创作于星期三2、活细胞观察技术、活细胞观察技术F相差显微镜相差显微镜F微分干涉显微镜微分干涉显微镜F录像增差显微镜录像增差显微镜F倒置显微镜倒置显微镜第第第

6、第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第8页，讲稿共67张，创作于星期三（1）活细胞观察技术）活细胞观察技术相差显微镜相差显微镜F原原理理：把把透透过过标标本本的的可可见见光光的的光光程程差差（相相位位差差）变变成成振振幅幅差差，从从而而提提高高了了各各种种结结构构间间的的对对比比度度，使使各各种种结结构变得清晰可见。构变得清晰可见。F特特殊殊构构造造：相相差差物物镜镜、环环形形光光阑阑、合合轴轴调调中中望望远远镜镜、绿绿色色滤光片滤光片第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第9页

7、，讲稿共67张，创作于星期三第10页，讲稿共67张，创作于星期三相差显微镜的应用相差显微镜的应用F特点：可以对无色透明的标本进行观察。适合于观察未经染色特点：可以对无色透明的标本进行观察。适合于观察未经染色的活细胞。的活细胞。第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第11页，讲稿共67张，创作于星期三（2）活细胞观察技术）活细胞观察技术微分干涉显微镜微分干涉显微镜F特点：以平面偏振光为光源，能区分样品厚度的微小差特点：以平面偏振光为光源，能区分样品厚度的微小差别，增加样品反差，有立体感。别，增加样品反差，有立体感。F应用：观察未染色标本

8、，更适于研究活细胞中较大的细胞器应用：观察未染色标本，更适于研究活细胞中较大的细胞器（3）录像增差显微镜）录像增差显微镜计算机辅助的微分干涉显微计算机辅助的微分干涉显微镜镜F降低背景噪声，提高分辨率，填补光镜与电镜之间的空白降低背景噪声，提高分辨率，填补光镜与电镜之间的空白第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第12页，讲稿共67张，创作于星期三（4）活细胞观察技术）活细胞观察技术倒置显倒置显微镜微镜F应用：通常具有相差物镜，应用：通常具有相差物镜，用来观察正在培养的活细胞用来观察正在培养的活细胞第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞

9、胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第13页，讲稿共67张，创作于星期三3、特殊光学显微镜、特殊光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜F光源：汞灯光源：汞灯短波长紫外光短波长紫外光F装置：激发滤光片、阻断滤光片、分色镜装置：激发滤光片、阻断滤光片、分色镜F荧光染料染色荧光染料染色F应用：在光镜水平对细胞中特异的蛋白质分子或核苷酸片应用：在光镜水平对细胞中特异的蛋白质分子或核苷酸片段等进行定位、定性分析。段等进行定位、定性分析。绿色荧光蛋白（绿色荧光蛋白（green fluorescent proteingreen fluorescent protein，GFP GFP）第第第第

10、一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第14页，讲稿共67张，创作于星期三3、特殊光学显微镜、特殊光学显微镜荧光显微镜荧光显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术Fluorescenceimageofepithelialcell,Fluorescenceimageofepithelialcell,Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreenDNAinblueandMicrotubulesingr

11、eenDNAinblueandMicrotubulesingreen第15页，讲稿共67张，创作于星期三4、光学显微镜、光学显微镜激光扫描共焦显微镜激光扫描共焦显微镜F用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描，排除焦平面以外用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描，排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率光的干扰，增强图像反差和提高分辨率F分辨力是普通光学显微镜的分辨力是普通光学显微镜的3 3倍。倍。F用用途途类类似似荧荧光光显显微微镜镜，可可自自动动改改变变观观察察的的焦焦平平面面,通通过过“光光学学切切片片”观观察察较较厚厚样样品品的的内内部部结结构构，并并可可通通过过三三维维重重构构

12、,形成立体图像。形成立体图像。F在研究亚细胞结构与组分方面应用广泛在研究亚细胞结构与组分方面应用广泛.第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第16页，讲稿共67张，创作于星期三4、光学显微镜、光学显微镜激光扫描共焦显微镜激光扫描共焦显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第17页，讲稿共67张，创作于星期三光学显微镜光学显微镜激光扫描共焦显微镜激光扫描共焦显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术FigureC

13、omparisonofconventionalandconfocalfluorescencemicroscopy.These two micrographs are of the same intact gastrula-stage Drosophila embryo that has been stained with a fluorescent probe for actin filaments.The conventional,unprocessed image(A)is blurred by the presence of fluorescent structures above an

14、d below the plane of focus.In the confocal image(B),this out-of-focus information is removed,which results in a crisp optical section of the cell in the embryo.第18页，讲稿共67张，创作于星期三1荧光共振能量转移技术荧光共振能量转移技术5、与荧光观察有关的技术、与荧光观察有关的技术第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术2荧光漂白恢复技术荧光漂白恢复技术 检测活体中生物大分子纳

15、检测活体中生物大分子纳检测活体中生物大分子纳检测活体中生物大分子纳米级距离和距离变化的工具。米级距离和距离变化的工具。米级距离和距离变化的工具。米级距离和距离变化的工具。GFPGFPGFPGFP突变体：突变体：突变体：突变体：CFPCFPCFPCFP青绿色、青绿色、青绿色、青绿色、YFPYFPYFPYFP黄色黄色黄色黄色检测活体细胞表面或内检测活体细胞表面或内检测活体细胞表面或内检测活体细胞表面或内部的分子运动以及在各部的分子运动以及在各部的分子运动以及在各部的分子运动以及在各种结构上分子动态变化种结构上分子动态变化种结构上分子动态变化种结构上分子动态变化率大小的技术。率大小的技术。率大小的技

16、术。率大小的技术。第19页，讲稿共67张，创作于星期三6、特殊显微镜、特殊显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜F原理：原理：通过在明场显微镜上安装暗场聚光镜，使来自聚光镜的光通过在明场显微镜上安装暗场聚光镜，使来自聚光镜的光线不直接入射到物镜内，而被标本散射的光则可以进入物镜，从而线不直接入射到物镜内，而被标本散射的光则可以进入物镜，从而达到在黑暗的背景下可看到标本的外部形态。达到在黑暗的背景下可看到标本的外部形态。F特点特点视野是暗的，物象是亮的。视野是暗的，物象是亮的。可以观察在明视场中看不见的细菌等微小标本的存在。可以观察在明视场中看不见的细菌等微小标本的存在。只能看清标本轮廓，分不清内部结构

17、只能看清标本轮廓，分不清内部结构第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第20页，讲稿共67张，创作于星期三第21页，讲稿共67张，创作于星期三7、多功能显微镜、多功能显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第22页，讲稿共67张，创作于星期三二、电子显微镜二、电子显微镜F以电子束作为光源以电子束作为光源F扫描电子显微镜利用二次反射电子成像，主要用来观察扫描电子显微镜利用二次反射电子成像，主要用来观察样品表面的形态特征。样品表面的形态特征。F透射电子显微镜利用透过的电子成像

18、，用来观察细胞内部透射电子显微镜利用透过的电子成像，用来观察细胞内部的详细结构。的详细结构。第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第23页，讲稿共67张，创作于星期三Figure Limit of resolution of the electron microscope.Electron micrograph of a thin layer of gold showing the individual files of atoms in the crystal as bright spots.The distance between

19、 adjacent files of gold atoms is about 0.2 nm(2).第24页，讲稿共67张，创作于星期三二、电子显微镜二、电子显微镜1、基本构造、基本构造F电子束照明系统：电子束照明系统：F成像系统：电磁透镜成像系统：电磁透镜F真空系统：真空系统：F记录系统：荧光屏或感光胶片记录系统：荧光屏或感光胶片第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第25页，讲稿共67张，创作于星期三第26页，讲稿共67张，创作于星期三第27页，讲稿共67张，创作于星期三第28页，讲稿共67张，创作于星期三电子显微镜能不能电子显微镜

20、能不能电子显微镜能不能电子显微镜能不能 取代光学显微镜呢？取代光学显微镜呢？取代光学显微镜呢？取代光学显微镜呢？第29页，讲稿共67张，创作于星期三二、电子显微镜二、电子显微镜2、电子显微镜的优缺点、电子显微镜的优缺点F优点：比光学显微镜分辨率高优点：比光学显微镜分辨率高F缺点：不能观察活的生物样品，而且不能观缺点：不能观察活的生物样品，而且不能观察细胞全貌。察细胞全貌。第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第30页，讲稿共67张，创作于星期三二、电子显微镜二、电子显微镜3、电子显微镜制样技术、电子显微镜制样技术F超薄切片技术（厚度超

21、薄切片技术（厚度404050nm50nm）F电镜负染色技术电镜负染色技术F冷冻断裂和冷冻蚀刻技术冷冻断裂和冷冻蚀刻技术F电镜三维重构技术电镜三维重构技术第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术超薄切片技术：固定、包埋、切片、染色染色剂：超薄切片技术：固定、包埋、切片、染色染色剂：超薄切片技术：固定、包埋、切片、染色染色剂：超薄切片技术：固定、包埋、切片、染色染色剂：重金属，成黑白图像重金属，成黑白图像重金属，成黑白图像重金属，成黑白图像冷冻蚀刻电镜技术主要用于膜断裂面的蛋白质冷冻蚀刻电镜技术主要用于膜断裂面的蛋白质冷冻蚀刻电镜技术主要用

22、于膜断裂面的蛋白质冷冻蚀刻电镜技术主要用于膜断裂面的蛋白质颗粒和膜面结构，深度蚀刻主要用于观察胞质颗粒和膜面结构，深度蚀刻主要用于观察胞质颗粒和膜面结构，深度蚀刻主要用于观察胞质颗粒和膜面结构，深度蚀刻主要用于观察胞质中的细胞骨架纤维及其结合蛋白中的细胞骨架纤维及其结合蛋白中的细胞骨架纤维及其结合蛋白中的细胞骨架纤维及其结合蛋白电镜三维重构技术适于分析电镜三维重构技术适于分析电镜三维重构技术适于分析电镜三维重构技术适于分析难以形成三维晶体的膜蛋白难以形成三维晶体的膜蛋白难以形成三维晶体的膜蛋白难以形成三维晶体的膜蛋白及病毒和蛋白质及病毒和蛋白质及病毒和蛋白质及病毒和蛋白质-核酸复合核酸复合核酸

23、复合核酸复合物等大的复合体的三维结物等大的复合体的三维结物等大的复合体的三维结物等大的复合体的三维结构构构构第31页，讲稿共67张，创作于星期三第32页，讲稿共67张，创作于星期三三、三、扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜F分辨率：横向为分辨率：横向为0.10.10.2nm0.2nm，纵向可达，纵向可达0.001nm0.001nm。F用用途途：是是探探测测微微观观世世界界物物质质表表面面形形态态的的仪仪器器，三三态态（固固态态、液液态态和和气气态态）物物质质均均可可进进行行观观察察。可可直直接接观观察察生生物物大大分分子子生物结构的原子排列，并且可避免损伤样品。生物结构的原子排列，并且可避免损伤样品

24、。F工作原理工作原理第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第33页，讲稿共67张，创作于星期三三、三、扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu25002500万倍硅晶万倍硅晶体表面体表面 DNA第34页，讲稿共67张，创作于星期三第第第第一一一一节节节节 细细细细胞胞胞胞的的的的形形形形态态态态观观观观察察察察技技技技术术术术第35页，讲稿共67张，创

25、作于星期三细胞组分的分析方法细胞组分的分析方法细胞组分的分离细胞组分的分离细胞组分的分析细胞组分的分析定量细胞化学技术定量细胞化学技术第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术第36页，讲稿共67张，创作于星期三一、细胞组分的分离一、细胞组分的分离细胞组分的获得：用低渗匀浆、超声破碎、研磨等细胞组分的获得：用低渗匀浆、超声破碎、研磨等方法获得方法获得细胞组分匀浆细胞组分匀浆。细胞组分分离细胞组分分离离心技术离心技术：离心是研究如细胞核、：离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子

26、基本手段。子基本手段。常用差速离心技术、密度梯度离心技术，或者常用差速离心技术、密度梯度离心技术，或者是二者结合。是二者结合。第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术第37页，讲稿共67张，创作于星期三一、细胞组分的分离一、细胞组分的分离第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术FF低速离心机转速低速离心机转速低速离心机转速低速离心机转速8ooor/min8ooor/min，离心，离心，离心，离心力力力力10kg10kgFF高速离心机转速为高速离心机转速为高速离心机转速为高速离心机转速为 1000

27、025000r/min1000025000r/min，离心力为，离心力为，离心力为，离心力为10-10-100100（kgkg）FF转速超过转速超过转速超过转速超过25000r/min25000r/min，离心力大于，离心力大于，离心力大于，离心力大于100K100K者称为超速离心机。者称为超速离心机。者称为超速离心机。者称为超速离心机。FF目前超速离心机的最高转速可达目前超速离心机的最高转速可达目前超速离心机的最高转速可达目前超速离心机的最高转速可达100000r/min100000r/min，离心力超过，离心力超过，离心力超过，离心力超过500Kg500Kg。第38页，讲稿共67张，创作于

28、星期三1 1、差速离心、差速离心第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术F特点：介质密度均一；速度由低向高，逐级离心。特点：介质密度均一；速度由低向高，逐级离心。F用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。F沉降顺序：核沉降顺序：核线粒体线粒体溶酶体与过氧化物酶体溶酶体与过氧化物酶体内质网与高基体内质网与高基体核蛋白体。核蛋白体。F通过差速离心可将细胞初步分离，常需进一步通过密度梯离通过差速离心可将细胞初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。心再行分离纯化。第39页，讲稿共67张，创作于星期三2 2、密度

29、梯度离心、密度梯度离心第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术F密密度度梯梯度度离离心心：用用一一定定的的介介质质在在离离心心管管内内形形成成一一连连续续或或不不连连续续的的密密度度梯梯度度，将将细细胞胞混混悬悬液液或或匀匀浆浆置置于于介介质质的的顶顶部部，通通过过离离心心力力场场的的作作用用使使细细胞胞分层、分离。分层、分离。F速速度度区区带带离离心心用用于于分分离离密密度度相相近近大大小小不不一一的的细细胞组分胞组分F等密度梯度离心等密度梯度离心用于分离不同密度的细胞组分用于分离不同密度的细胞组分用途：分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。

30、用途：分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。速度区带速度区带梯度介质最大密度小梯度介质最大密度小于样品颗粒最小密度于样品颗粒最小密度要控制好离心时间要控制好离心时间分离密度不等的颗粒分离密度不等的颗粒等密度梯度离心等密度梯度离心梯度介质最大密度大梯度介质最大密度大于样品颗粒最大密度，于样品颗粒最大密度，样品密度介于梯度密样品密度介于梯度密度最大与最小之间，度最大与最小之间，样品不能到达离心管样品不能到达离心管底部底部。第40页，讲稿共67张，创作于星期三二、细胞组分分析二、细胞组分分析细胞化学技术：细胞学和化学的结合产生了细细胞化学技术：细胞学和化学的结合产生了细胞化学胞化学,主要是研究细胞结

31、构的化学组成及化学主要是研究细胞结构的化学组成及化学分子的定位、分布及其生理功能分子的定位、分布及其生理功能,包括定性和包括定性和定量分析。定量分析。包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放射自显影示踪细胞化学技术等。射自显影示踪细胞化学技术等。第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术第41页，讲稿共67张，创作于星期三二、细胞组分分析二、细胞组分分析二、细胞组分分析二、细胞组分分析酶细胞化学技术：酶细胞化学技术：通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。的定

32、位。免疫标记技术：免疫标记技术：特异性蛋白抗原的定性、定位分析特异性蛋白抗原的定性、定位分析将免将免疫学方法与荧光标记技术、酶标记技术、金标技术等相结合用来疫学方法与荧光标记技术、酶标记技术、金标技术等相结合用来研究特异蛋白在细胞内分布的方法。（选择研究特异蛋白在细胞内分布的方法。（选择1111）原位杂交技术（原位杂交技术（In situhybridization）：特异核酸序列的定位、特异核酸序列的定位、定性分析。（选择题定性分析。（选择题12-1612-16）放射标记技术：放射标记技术：研究生物大分子在细胞内的合成动态（选择研究生物大分子在细胞内的合成动态（选择题题1717）第第第第二二二

33、二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术F原位杂交技术将待测核酸在组织、细胞或染色体上的原位杂交技术将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。位置显示出来。FSouthernSouthern印迹杂交印迹杂交是进行基因组是进行基因组DNADNA特定序列定位的通特定序列定位的通用方法。用方法。FNorthernNorthern杂交杂交用来检测样品中是否含有基因的转录产用来检测样品中是否含有基因的转录产物（物（mRNAmRNA）及其含量。）及其含量。FWestern BlotWestern Blot中文一般称为蛋白质印迹。检测蛋白质中文一般称为蛋白质印迹。检

34、测蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况。在所分析的细胞或组织中的表达情况。第42页，讲稿共67张，创作于星期三In situhybridizationforRNAlocalizationintissues.Electron-microscopicautoradiography第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术第43页，讲稿共67张，创作于星期三三、定量细胞化学技术三、定量细胞化学技术F显微分光光度技术显微分光光度技术F流式细胞仪流式细胞仪用途：对单个细胞进行快速定量分析与分用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。选的一门技术。

35、计数、分类、测定等计数、分类、测定等第第第第二二二二节节节节 细细细细胞胞胞胞组组组组分分分分分分分分析析析析技技技技术术术术第44页，讲稿共67张，创作于星期三细胞工程细胞工程应用细胞生物学和分子生物学等学科的理论和技术，按照应用细胞生物学和分子生物学等学科的理论和技术，按照人们的需要，有计划地大规模地培养生物组织和细胞，以获得生人们的需要，有计划地大规模地培养生物组织和细胞，以获得生物及其产品，或改变细胞的遗传组成以获得新的种或品种，为社物及其产品，或改变细胞的遗传组成以获得新的种或品种，为社会和人类提供需要。会和人类提供需要。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与

36、与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第45页，讲稿共67张，创作于星期三细胞培养细胞培养F概念：在体外模拟体内的生理环境，使从机体取出的细胞概念：在体外模拟体内的生理环境，使从机体取出的细胞在体外继续生长繁殖的技术在体外继续生长繁殖的技术F包括：细菌培养、动物细胞培养和植物细胞培养包括：细菌培养、动物细胞培养和植物细胞培养F在细胞培养中防止污染是决定细胞培养成败的关键。在细胞培养中防止污染是决定细胞培养成败的关键。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第46页，讲稿共67张，创作于星期三动物细胞培养术语动物细胞培养术语F原原代代培培养

37、养（primary primary cultureculture）：从从动动物物机机体体取取出出直直接接进进行行培培养养的的细细胞胞群群叫叫原原代代细细胞胞，对对原原代代细细胞胞的的培培养养称称为为原原代培养。代培养。F传传代代培培养养：适适应应在在体体外外培培养养条条件件下下持持续续传传代代培培养养的的细细胞胞称称为为传传代代细细胞胞。将将细细胞胞从从一一个个培培养养瓶瓶以以一一定定的的比比例例转转移移到到另另外外的的培培养养瓶瓶继继续续培培养养的的过过程程，即即称称为为传传代代或传代培养。或传代培养。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培

38、养养养养第47页，讲稿共67张，创作于星期三动动物物细细胞胞原原代代培培养养第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第48页，讲稿共67张，创作于星期三传代细胞的培养过程传代细胞的培养过程第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第49页，讲稿共67张，创作于星期三动物细胞的培养形式动物细胞的培养形式F单单层层细细胞胞培培养养：也也称称群群体体培培养养，将将含含有有一一定定数数量量细细胞胞的的悬悬液液置置于于培培养养瓶瓶中中，让让细细胞胞贴贴壁壁生生长长，汇汇合合后后形形成成均均匀

39、匀的的单单细细胞胞层层F克克隆隆培培养养：将将高高度度稀稀释释的的游游离离细细胞胞悬悬液液加加入入培培养养瓶瓶中中；各各个个细细胞胞贴贴壁壁后后，彼彼此此距距离离较较远远，经经过过生生长长增增殖殖每每一一个个细细胞胞形形成成一一个个细细胞胞集集落落，称称为为克克隆隆。一一个个细细胞胞克克隆隆中中的的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。所有细胞均来源于同一个祖先细胞。F悬悬浮浮培培养养：使使用用特特定定的的装装置置，使使细细胞胞处处于于悬悬浮浮状状态态进进行行增增殖殖的的培养方法。培养方法。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第50页，讲

40、稿共67张，创作于星期三单层细胞培养和克隆培养单层细胞培养和克隆培养第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第51页，讲稿共67张，创作于星期三细胞培养有关的概念细胞培养有关的概念F细细胞胞系系（cellline）：原原代代培培养养细细胞胞经经过过传传代代形形成成的的生生物物学学特性不均一的细胞群体。特性不均一的细胞群体。F有有限限细细胞胞系系（finitecellline）：指指传传代代次次数数有有限限的的体体外外培培养养细细胞胞。有有限限细细胞胞系系仍仍然然保保持持细细胞胞原原来来染染色色体体的的二二倍倍体数量和接触抑制行为。体数量

41、和接触抑制行为。F连连续续细细胞胞系系或或永永生生细细胞胞系系（infinitecellline）：培培养养过过程程中中发发生生突突变变或或转转化化的的细细胞胞或或从从肿肿瘤瘤组组织织培培养养建建立立的的细细胞胞群群，在在培培养养条条件件下下可可无无限限繁繁殖殖。染染色色体体明明显显改改变变，失失去去接接触触抑抑制，容易传代培养。制，容易传代培养。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第52页，讲稿共67张，创作于星期三F细胞克隆：细胞克隆：从一个经过鉴定的细胞系由单细胞分离培从一个经过鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单

42、细胞增殖形成的细胞群养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群.具有具有基本相同的遗传性状。基本相同的遗传性状。F细胞株细胞株:是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞.第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第53页，讲稿共67张，创作于星期三动物细胞培养的特点动物细胞培养的特点动物细胞培养的特点动物细胞培养的特点F体外培养的细胞具有体外培养的细胞具有依附生长依附生长依附生长依附生长特性和特性和接触抑制接触抑制接触抑

43、制接触抑制现象。现象。F接接触触抑抑制制:细细胞胞培培养养过过程程中中,形形成成良良好好单单层层后后,细细胞胞彼彼此此接接触触,移移动动运运动动停停止的现象止的现象.F贴壁生长细胞的基本形态：成纤维样细胞、上皮样细胞。贴壁生长细胞的基本形态：成纤维样细胞、上皮样细胞。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第54页，讲稿共67张，创作于星期三植物细胞培养植物细胞培养F植物组织培养植物组织培养F原生质体培养原生质体培养F单倍体培养单倍体培养第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第

44、55页，讲稿共67张，创作于星期三非细胞体系（非细胞体系（P72）F定义：来源于细胞，不具备完整的细胞结构，但包含了进定义：来源于细胞，不具备完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质（如供能系统和酶反应体系行正常生物学反应所需的物质（如供能系统和酶反应体系等）组成的体系即为非细胞体系。等）组成的体系即为非细胞体系。F应用：近年来，非细胞体系在研究应用：近年来，非细胞体系在研究DNA复制、复制、RNA转录、转录、蛋白质合成、高尔基体的膜泡运输机制及细胞核装配蛋白质合成、高尔基体的膜泡运输机制及细胞核装配（染色质、核膜、核骨架装配）等方面显示了重要作用。（染色质、核膜、核骨架装配）等方

45、面显示了重要作用。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第56页，讲稿共67张，创作于星期三细胞融合与细胞杂交技术细胞融合与细胞杂交技术F细胞融合细胞融合：自发或人工诱导下，两：自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂交细胞。合形成一个杂交细胞。F诱导细胞融合的方法诱导细胞融合的方法生生物物方方法法：灭灭活活的的仙仙台台病病毒毒、副副流流感感病毒和新城鸡瘟病毒病毒和新城鸡瘟病毒化学方法：聚乙二醇化学方法：聚乙二醇PEGPEG物理方法：电击和激光物理方法：电击和激光第第第第三三三三节节

46、节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第57页，讲稿共67张，创作于星期三第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养单克隆抗体技术单克隆抗体技术单克隆抗体技术单克隆抗体技术F免疫技术免疫技术F细胞融合细胞融合F细胞培养：选择性细胞细胞培养：选择性细胞培养、克隆培养培养、克隆培养第58页，讲稿共67张，创作于星期三细胞拆合与显微操作技术细胞拆合与显微操作技术F细胞拆合：细胞拆合：物理方法：机械方法或超声处理去核物理方法：机械方法或超声处理去核化学方法：松胞素处理使细胞排核，再离心得到胞质体化学方法：松

47、胞素处理使细胞排核，再离心得到胞质体和核质体。和核质体。第第第第三三三三节节节节 细细细细胞胞胞胞工工工工程程程程与与与与细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养第59页，讲稿共67张，创作于星期三本章巩固练习本章巩固练习本章巩固练习本章巩固练习一、名词解释一、名词解释1、原代培养、原代培养2、传代培养、传代培养3、克隆培养、克隆培养4、群体培养、群体培养5、接触抑制、接触抑制6、细胞株、细胞株7、细胞系、细胞系8、非细胞体系、非细胞体系二、填空二、填空1、光学显微镜的分辨率由、光学显微镜的分辨率由、和和三种因素决定，用紫外光为光源观察物体三种因素决定，用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这

48、是因为比用可见光的分辨率要高，这是因为。2、适于观察活细胞的光镜有、适于观察活细胞的光镜有、等。等。3、电子显微镜使用的是、电子显微镜使用的是透镜，而光学显微镜使用的是透镜，而光学显微镜使用的是透镜。透镜。4、荧光显微镜是以、荧光显微镜是以为光源，而电子显微镜则以为光源，而电子显微镜则以作为光源。作为光源。5、可用、可用技术来研究质膜结构的不对称性。技术来研究质膜结构的不对称性。6、细胞生物学研究中常用的光镜有、细胞生物学研究中常用的光镜有、。7、贴壁生长细胞的形态为、贴壁生长细胞的形态为、。8、超速离心的方法包括、超速离心的方法包括和和两种，其中前者适合对组分进行粗分离，而两种，其中前者适合

49、对组分进行粗分离，而后者则为较为精细的分离手段。后者则为较为精细的分离手段。第60页，讲稿共67张，创作于星期三三、选择题三、选择题1、在光学显微镜下所观察到的组织或细胞结构一般称为、在光学显微镜下所观察到的组织或细胞结构一般称为A显微结构显微结构B超微结构超微结构C亚显微结构亚显微结构D分子结构分子结构2研究细胞的超微结构一般要利用下列哪种技术研究细胞的超微结构一般要利用下列哪种技术A光学显微镜技术光学显微镜技术B电子显微镜技术电子显微镜技术CX射线衍射技术射线衍射技术D离心技术离心技术E荧光显微镜荧光显微镜3、适于观察细胞表面及断面超微结构三维图像的仪器是、适于观察细胞表面及断面超微结构三

50、维图像的仪器是A普通光学显微镜普通光学显微镜B荧光显微镜荧光显微镜C相差显微镜相差显微镜D扫描电镜扫描电镜E透射电镜透射电镜4、适于观察细胞内超微结构的显微镜是、适于观察细胞内超微结构的显微镜是A透射电镜透射电镜B扫描电镜扫描电镜C荧光显微镜荧光显微镜D倒置显微镜倒置显微镜E相差显微镜相差显微镜5、适于观察培养瓶中活细胞的显微镜是、适于观察培养瓶中活细胞的显微镜是A透射电镜透射电镜B扫描电镜扫描电镜C荧光显微镜荧光显微镜D倒置显微镜倒置显微镜E相差显微镜相差显微镜6、不能用于研究膜蛋白流动性的方法是、不能用于研究膜蛋白流动性的方法是()技术。技术。A荧光抗体免疫标记荧光抗体免疫标记B荧光能量共