第01章形态学检验技术hu精.ppt

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1、第01章形态学检验技术hu第1页，本讲稿共64页第一章第一章 形态学检验技术形态学检验技术第一节第一节 生物样品的采集、预处理和制备生物样品的采集、预处理和制备第二节第二节 感官层次的形态检验感官层次的形态检验第三节第三节 显微形态检验技术显微形态检验技术第四节第四节 超显微形态检验技术超显微形态检验技术第2页，本讲稿共64页第一节第一节 生物样品的采集、预处理和制备生物样品的采集、预处理和制备1.1样品采集的一般要求样品采集的一般要求1.2采样的最一般方法采样的最一般方法1.3样品的制备样品的制备1.4生物样品的预处理生物样品的预处理第3页，本讲稿共64页1.1样品采集的一般要求样品采集的一

2、般要求样品采集的一般要求样品采集的一般要求采集的生物样品要具有采集的生物样品要具有代表性代表性典型性典型性适时性适时性 第4页，本讲稿共64页代表性代表性指采集的对象能够代表一定范围内的整体指采集的对象能够代表一定范围内的整体或者所有的样品。这就要求对样品的分布、或者所有的样品。这就要求对样品的分布、类型、特征、地形地貌、环境、气候等因类型、特征、地形地貌、环境、气候等因素进行综合考虑，选择合适的地段作为采素进行综合考虑，选择合适的地段作为采样区，再在采样区内划分若干小区，采用样区，再在采样区内划分若干小区，采用适宜的方法布点，确定有代表性的个体或适宜的方法布点，确定有代表性的个体或样品。例如

3、在田地里采样，不要采集田埂、样品。例如在田地里采样，不要采集田埂、地边及距田埂地边地边及距田埂地边2米以内的植株。米以内的植株。第5页，本讲稿共64页典型性典型性指所采集的生物个体的部位要能充分反映通指所采集的生物个体的部位要能充分反映通过检验所要了解的情况。根据要求选取健康过检验所要了解的情况。根据要求选取健康的生物个体，分别采集个体的不同部位，例的生物个体，分别采集个体的不同部位，例如动物的血液、尿液、内脏、骨髓、肿瘤等，如动物的血液、尿液、内脏、骨髓、肿瘤等，不能将各部位样品随意混合。不能将各部位样品随意混合。第6页，本讲稿共64页适时性适时性适时性适时性指需要充分注意生物的指需要充分注

4、意生物的指需要充分注意生物的指需要充分注意生物的不同生长发育阶段不同生长发育阶段。发育阶。发育阶。发育阶。发育阶段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物段的改变，也影响着样品的性质和生理。有些生物的有效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地的有效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地的有效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地的有效成分在一昼夜间也常有变化，其他如生长地点、光照、土壤、其他环境条件等，对生物样品的点、光照、土壤、其他环境条件等，对生物样品的点、光照、土壤、其他环境条件等，对生物样品的点、

5、光照、土壤、其他环境条件等，对生物样品的特性均有一定影响。特性均有一定影响。特性均有一定影响。特性均有一定影响。同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该同时还要注意样品采取后应该及时处理的时间及时处理的时间及时处理的时间及时处理的时间。例。例如生物用药后的间隔时间；植物叶类应规定采嫩如生物用药后的间隔时间；植物叶类应规定采嫩叶或老叶，采收的时间及层次，即生长在植株的叶或老叶，采收的时间及层次，即生长在植株的不同位置，如上层、中层、下层；花类应严格规不同位置，如上层、中层、下层；花类应严格规定采收时期及部分，如蕾期、开花前期或盛花期，定采收时期及部分，如蕾期

6、、开花前期或盛花期，采收全花、花被、柱头或其他部分等。采收全花、花被、柱头或其他部分等。第7页，本讲稿共64页植物标本的采集注意事项植物标本的采集注意事项(1)(1)采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官采集的植物全株样品最好带有繁殖器官(花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等花、果或孢子囊、子实体等)，草本植物，草本植物，草本植物，草本植物特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄

7、主。特别应该注意带有叶的部分和地下部分，寄生植物应带寄主。(2)(2)如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）如果植物的基部叶与上部叶形状不同（如菊科、十字花科），叶上的附属物（毛茸、蜡被等）在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。在新老叶上也有不同，应尽量采全。(3)(3)丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习

8、性丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性丛生的草本植物，应保留其丛生的特征，不要分得太散，失去原来的习性(4)(4)雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。雌雄异株的植物（麻黄科、桑科等）应注意同时采集雌株和雄株。(5)(5)对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较多（如景天科、仙人掌科等）或有根状对于含水分较

9、多（如景天科、仙人掌科等）或有根状 地下茎植物（如百合科），地下茎植物（如百合科），地下茎植物（如百合科），地下茎植物（如百合科），有时需切开干燥或用开水将其烫死。有时需切开干燥或用开水将其烫死。有时需切开干燥或用开水将其烫死。有时需切开干燥或用开水将其烫死。(6)(6)水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成水生藻类植物采的标本，到驻地后要重新放在水里，然后用硬台纸将其托起，压成标本。标本。标本。标本。(7)(7)木本

10、植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。木本植物的树皮在鉴别上有重要的特征，采集标本时应割取，并与标本同存。(8)(8)每种植物至少采集每种植物至少采集每种植物至少采集每种植物至少采集3 3份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、份以上标本，每张标本应有野外记录。对易改变的特征如花的颜色、气味、毛茸

11、等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。气味、毛茸等应说明。每晚必须及时整理检查，补上漏记的项目。第8页，本讲稿共64页动物样品的采集动物样品的采集 动物的尿液、血液、粪便、毛发、指甲、唾液、胃液、乳液、骨骼和组动物的尿液、血液、粪便、毛发、指甲、唾液、胃液、乳液、骨骼和组织等均可作为检验样品。织等均可作为检验样品。(1)尿液：绝大部分毒物及其代谢产物主要由肾脏经膀胱、尿道随尿液排出。尿液：绝大部分毒物及其代谢产物主要由肾脏经膀胱、尿道随尿液排出。(2)血液：血液中有害物

12、质的浓度可反映近期接触污染物质的水平，并与其吸收血液：血液中有害物质的浓度可反映近期接触污染物质的水平，并与其吸收量呈正相关。量呈正相关。(3)毛发和指甲：蓄积在毛发和指甲中的污染物质残留时间较长，即使已脱离接毛发和指甲：蓄积在毛发和指甲中的污染物质残留时间较长，即使已脱离接触污染物或停止摄入污染食物，血液和尿液中污染物含量已下降，而毛发或触污染物或停止摄入污染食物，血液和尿液中污染物含量已下降，而毛发或指甲中仍容易检出。头发中的汞、砷等含量较高，样品容易采集和保存，故指甲中仍容易检出。头发中的汞、砷等含量较高，样品容易采集和保存，故在医学和环境分析中应用较广泛。在医学和环境分析中应用较广泛。

13、(4)组织和脏器：组织和脏器的部位复杂，且柔软、易破裂混合，因此取组织和脏器：组织和脏器的部位复杂，且柔软、易破裂混合，因此取样操作要细心。采集组织和脏器样品后，应放在组织捣碎机中捣碎、样操作要细心。采集组织和脏器样品后，应放在组织捣碎机中捣碎、混匀，制成浆状鲜样备用。混匀，制成浆状鲜样备用。第9页，本讲稿共64页1.2采样的最一般方法采样的最一般方法采样前应预先准备好采样工具，如刀具、剪刀、保存袋、手套、冰采样前应预先准备好采样工具，如刀具、剪刀、保存袋、手套、冰盒、标签、记录本、采集登记表等；盒、标签、记录本、采集登记表等；根据实际情况确定样品采样量：为了确保有足够数量的样品进行检测根据实

14、际情况确定样品采样量：为了确保有足够数量的样品进行检测分析，应根据检测分析项目的内容要求确定样品的采集量。一般要求分析，应根据检测分析项目的内容要求确定样品的采集量。一般要求样品经制备后，至少有样品经制备后，至少有2050g的干样品，最好备有的干样品，最好备有1kg的干样；的干样；整体样品需要在采样区内按梅花形五点或交叉间隔的取样方式整体样品需要在采样区内按梅花形五点或交叉间隔的取样方式采集采集5-10处的样品混合组成一个代表样品；处的样品混合组成一个代表样品；生物体上的某一部分作为样品，如果分布在一个部位，可以取此部分生物体上的某一部分作为样品，如果分布在一个部位，可以取此部分的全部作为样品

15、；如果分布在多处，则每处取少量样品再加以混合。的全部作为样品；如果分布在多处，则每处取少量样品再加以混合。将采好的样品装入保存袋中，可能还要放入冰盒中存放，贴好标签，并填将采好的样品装入保存袋中，可能还要放入冰盒中存放，贴好标签，并填写采样登记表。写采样登记表。平均样的获得：四分法、切成块的平均样的获得：四分法、切成块的1/4-1/8混合。混合。第10页，本讲稿共64页梅花形五点梅花形五点交叉间隔交叉间隔 第11页，本讲稿共64页1.3样品的制备样品的制备(1)(1)植物鲜样的制备植物鲜样的制备植物鲜样的制备植物鲜样的制备洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；洗涤：将样品用清水、去离子

16、水洗净，晾干或拭干；洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；洗涤：将样品用清水、去离子水洗净，晾干或拭干；切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣碎机的捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣碎机的捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣碎机的捣切碎：将晾干的鲜样切碎、混匀，称取一定量于电动高速组织捣碎机的捣碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎碎杯中，加适量蒸馏水或去离子水，开动捣碎机捣碎1-2min1-2min，制成匀浆。，制成匀浆。

17、，制成匀浆。，制成匀浆。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以不加水。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以不加水。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以不加水。对含水量大的样品，如熟透的西红柿等，捣碎时可以不加水。研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、叶子研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、叶子研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、叶子研磨：对于含纤维多或较硬的样品，如禾木科植物的根、茎杆、叶子等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在研钵中加等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在研钵中加

18、等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在研钵中加等，可用不锈钢刀或剪刀切（剪）成小片或小块，混匀后在研钵中加石英砂研磨。石英砂研磨。石英砂研磨。石英砂研磨。第12页，本讲稿共64页(2)(2)植物干样的制备植物干样的制备植物干样的制备植物干样的制备风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样品可以风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样品可以风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样品可以风干：将洗净的植物鲜样尽快放在干燥通风处风干（茎杆样品可以劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿

19、气候，可放在劈开）。如果遇到阴雨天或潮湿气候，可放在40-6040-60鼓风干燥箱鼓风干燥箱鼓风干燥箱鼓风干燥箱中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。中烘干，以免发霉腐烂，并减少化学和生物变化。磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎（或先剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎（或先剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎（或先剪碎磨碎：将风干或烘干的样品去除灰尘、杂物，用剪刀剪碎（或先剪碎再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样品如稻谷等，应先脱再烘干），再

20、用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样品如稻谷等，应先脱再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样品如稻谷等，应先脱再烘干），再用磨碎机磨碎。谷类作物的种子样品如稻谷等，应先脱壳再粉碎。壳再粉碎。壳再粉碎。壳再粉碎。过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过过筛：将粉碎好的样品过筛。一般要求通过1mm1mm筛孔即可，有的筛孔即可，有的筛孔即可，有的筛孔即可，有的分析项目要求通过分析项目要求通过分析项目要求通过分析项目要求通过0.25mm0.25mm的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻的筛孔。制备好的样品

21、贮存于磨口玻的筛孔。制备好的样品贮存于磨口玻璃广口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。璃广口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。璃广口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。璃广口瓶或聚乙烯广口瓶中备用。保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械保存：对于测定某些金属含量的样品，应注意避免受金属器械和筛子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚和筛子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚和筛子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚和筛子等污染。因此，最好用玛瑙研钵磨碎，尼龙筛过筛，聚乙烯

22、瓶保存。乙烯瓶保存。乙烯瓶保存。乙烯瓶保存。第13页，本讲稿共64页1.4生物样品的预处理生物样品的预处理(1)消化分解：使用强酸或强碱等消化分解液，消化分解：使用强酸或强碱等消化分解液，初步处理样品，使大部分蛋白等大分子物初步处理样品，使大部分蛋白等大分子物质在一定程度上降解或去除。质在一定程度上降解或去除。(2)提取、分离和浓缩提取、分离和浓缩第14页，本讲稿共64页提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提提取方法：一般将切碎的生物样品置于容器中，加入适当的提取溶剂，振

23、荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新取溶剂，振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新取溶剂，振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新取溶剂，振荡、搅拌或磨碎，浸取一定时间，滤出溶剂，再用新提取溶剂洗涤样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进提取溶剂洗涤样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进提取溶剂洗涤样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进提取溶剂洗涤样品滤残或再浸取一次，合并浸取液，供分析或进行分离、富集用。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提行分离、富集用。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提行分离、富集用。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、

24、脂肪提行分离、富集用。主要有振荡浸取法、组织捣碎提取法、脂肪提取器提取法、匀浆法等。取器提取法、匀浆法等。取器提取法、匀浆法等。取器提取法、匀浆法等。分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主分离方法：将目的组分从粗提液中分离出来有多种方法，主要有萃取法、蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。要有萃取法、蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。要有萃取法、蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。要有萃取法、蒸馏法、层析法、低温冷冻法等。低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温度不低温冷冻法：该方

25、法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温度不低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温度不低温冷冻法：该方法基于不同物质在同一溶剂中的溶解度随温度不同而不同的原理进行彼此分离的。同而不同的原理进行彼此分离的。同而不同的原理进行彼此分离的。同而不同的原理进行彼此分离的。浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可浓缩方法：生物样品的提取液经过分离净化后，待测物质浓度可能仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方能仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩

26、。常用的浓缩方能仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方能仍达不到分析方法的要求，这就需要进行浓缩。常用的浓缩方法有：蒸馏或减压蒸馏法、法有：蒸馏或减压蒸馏法、法有：蒸馏或减压蒸馏法、法有：蒸馏或减压蒸馏法、K-DK-D浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。浓缩器浓缩法、蒸发法等。第15页，本讲稿共64页第二节第二节 感官层次的形态检验感官层次的形态检验2.1感官法感官法2.2纸片法纸片法2.3试管法试管法第16页，本讲稿共64页2.1感官法感官法“看看看看”是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。是感官法最重要的手段。

27、“看看看看”就是细致的观察样品，包括样品的全貌和样就是细致的观察样品，包括样品的全貌和样就是细致的观察样品，包括样品的全貌和样就是细致的观察样品，包括样品的全貌和样品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、斑点、品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、斑点、品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、斑点、品各部位的特点，如形状、颜色、光泽、分泌物、毛、孔、表面和断面、斑点、刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。刺等。如色黄的植物样品多含有黄酮类等。“摸

28、摸摸摸”就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚就是用手触摸、揉捻、撕扯、折切等，感觉样品的粗糙程度、坚硬程度、断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果硬程度、断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果硬程度、断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果硬程度、断面特性等。如冬青科和卫矛科叶柄拉断有胶质丝。如将果实和种子放在滤纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油实和种子放在滤纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油实和种子

29、放在滤纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油实和种子放在滤纸上，用力压碎，稍干后看纸上有无油迹并估计含油的多少；检查鞣质类化合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣的多少；检查鞣质类化合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣的多少；检查鞣质类化合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣的多少；检查鞣质类化合物，可用一把无锈的铁刀切开样品，如含鞣质，小刀及材料断面很快会变成兰黑色。质，小刀及材料断面很快会变成兰黑色。质，小刀及材料断面很快会变成兰黑色。质，小刀及材料断面很快会变成兰黑色。“嗅嗅嗅嗅”就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无芳香就是用鼻子闻样品挥发出的气味，

30、如把一些样品揉碎后，嗅其有无芳香就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无芳香就是用鼻子闻样品挥发出的气味，如把一些样品揉碎后，嗅其有无芳香气味。气味。气味。气味。“尝尝尝尝”就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含生物就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含生物就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含生物就是用嘴舌来品尝，根据感觉来判断样品。如植物材料中，味苦的多含生物碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。碱、甙类；味涩的多含鞣质，味酸的含有机酸。碱、甙类；味涩的多

31、含鞣质，味酸的含有机酸。第17页，本讲稿共64页2.22.2纸片法纸片法取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。取样品抽提液滴在滤纸上，待展开，干后喷洒试液，可以检查多种成分。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。生物碱：喷碘化铋钾试液，若斑点颜色显著加深，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色

32、，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。酚：醇浸液，喷三氯化铁试液，若斑点显兰绿（黑）色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。有机酸：取水浸液，喷洒溴酚兰后，背景兰色，斑点浅黄色，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类：

33、醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。黄酮类：醇浸液，喷三氯化铭醇试液，黄色及荧光均加深，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。蒽醌类：醇浸液，喷氢氧化钾试液，斑点显红色或暗红色，为阳性反应。强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加强心甙：醇浸液，加KeddeKedde试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或浅紫色，为阳性反应。试液，斑点显紫色或

34、浅紫色，为阳性反应。内酯及香豆精类：醇浸液，加内酯及香豆精类：醇浸液，加内酯及香豆精类：醇浸液，加内酯及香豆精类：醇浸液，加3 3NaNa2 2COCO3 3，烤，烤，烤，烤1515分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显分钟，滴加安替匹林及铁氰化钾，显紫红色，为阳性反应。检查山道年（紫红色，为阳性反应。检查山道年（紫红色，为阳性反应。检查山道年（紫红色，为阳性反应。检查山道年（SantoninSantonin）可将原料直接加甲醇钠，显紫红）可将原料直接加甲醇钠，显紫红）可将原料直接加甲醇钠，显紫红）可将原料直接加甲醇钠，显紫红色为阳性反

35、应。色为阳性反应。色为阳性反应。色为阳性反应。还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，还原物质：水及醇浸液，分别喷高锰酸钾试液，背景紫红色，斑点色浅或退色，为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。第18页，本讲稿共64页2.3试管法试管法类似纸片法类似纸片法类似纸片法类似纸片法皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，为阳皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，为阳皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫

36、，为阳皂甙：水浸液置试管中，用力振摇，有持久性泡沫，为阳性反应。性反应。性反应。性反应。蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入蛋白质：水浸液，加入NaOHNaOH、CuSOCuSO4 4，显淡紫红色，显淡紫红色，显淡紫红色，显淡紫红色，为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。为阳性反应。甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸甙类、糖类：样品加水用稀酸酸化，煮沸1515分钟过滤，分钟过滤，分钟过滤，分钟过滤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，烘烤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，烘烤

37、，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，烘烤，滤液浓缩后，滴在纸片上，喷邻苯二甲酸苯胺试液，烘烤，斑点显棕红色，为阳性反应。斑点显棕红色，为阳性反应。斑点显棕红色，为阳性反应。斑点显棕红色，为阳性反应。第19页，本讲稿共64页第三节第三节 显微形态检验技术显微形态检验技术3.1显微镜的基本构造显微镜的基本构造3.2光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理3.3显微镜的性能显微镜的性能3.4显微镜的使用操作及注意事项显微镜的使用操作及注意事项3.5显微镜的分类显微镜的分类3.5微生物涂片、染色的检验技术微生物涂片、染色的检验技术3.6显微制片技术显微制片技术第20页，本讲稿共64页3.1

38、显微镜的构造显微镜的构造机械装置包括：镜机械装置包括：镜机械装置包括：镜机械装置包括：镜座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转座、镜筒、物镜转换器、载物台、推换器、载物台、推换器、载物台、推换器、载物台、推动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。微动螺旋等部件。光学系统包括：反光学系统包括：反光学系统包括：反光学系统包括：反光镜、聚光器、接光镜、聚光器、接光镜、聚光器、接光镜、聚光器、接物镜、接目镜等组物镜、接目镜等组物镜、接目镜等组物镜、接目镜等组成，光学系统使物成，光学系统使物成，光学系统使物成，光学系统使物

39、体形成物体放大像体形成物体放大像体形成物体放大像体形成物体放大像 。第21页，本讲稿共64页普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜（Huygenseyepiece），如要进行研究用时，），如要进行研究用时，一般选用性能更好的目镜，如补偿目镜一般选用性能更好的目镜，如补偿目镜（K）、平场目镜（）、平场目镜（P）、广视场目镜）、广视场目镜（WF）。照相时选用照相目镜（）。照相时选用照相目镜（NFK）。）。第22页，本讲稿共64页物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影响。物镜的性能取决于物镜的数值孔径响。物镜的性能取决于物镜的数

40、值孔径（numericalapeature简写为简写为NA），每个物），每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值镜的数值孔径都标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性能越好。孔径越大，物镜的性能越好。数值孔径又叫做镜口率，它是由物体与物镜数值孔径又叫做镜口率，它是由物体与物镜间媒质的折射率间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半与物镜孔径角的一半的的正弦值的乘积，其大小由下式决定：正弦值的乘积，其大小由下式决定：NA=nsin第23页，本讲稿共64页NA=nsin空气介质空气介质空气介质空气介质油介质油介质油介质油介质盖盖盖盖 玻玻玻玻 片片片片物物物物 镜镜镜镜第24页，本讲稿共64页根据物镜前

41、透镜与被检物体之间的介质不同，根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同，可分为：可分为：A、干燥系物镜：以空气为介质，如常用的、干燥系物镜：以空气为介质，如常用的40以下的物镜，数值孔径均小于以下的物镜，数值孔径均小于1。B、油浸系物镜：常以香柏油为介质，此物镜、油浸系物镜：常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为又叫油镜头，其放大率为90-100，数值，数值孔值大于孔值大于1。第25页，本讲稿共64页根据物镜放大率的高低，可分为：根据物镜放大率的高低，可分为：A、低倍物镜：、低倍物镜：1-6，NA值值0.04-0.15；B、中倍物镜：、中倍物镜：6-25，NA值值0.15-0.40；C、

42、高倍物镜：、高倍物镜：25-63，NA值值0.35-0.95；D、油浸物镜：、油浸物镜：90-100，NA值值1.25-1.40。第26页，本讲稿共64页根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：根据物镜像差校正的程度来分类可分为：A A、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有、消色差物镜：是最常用的物镜，外壳上标有“Ach”Ach”字样，该物镜可字样，该物镜可字样，该物镜可字样，该物镜可以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。以除

43、红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。以除红光和青光形成的色差。镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。B B、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有、复消色差物镜：物镜外壳上标有“Apo”Apo”字样，除能校正红、蓝、字样，除能校正红、蓝、字样，除能校正红、蓝、字样，除能校正红、蓝、绿三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配合绿三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配合绿三色光的色差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配合绿三色光的色

44、差外，还能校正黄色光造成的相差，通常与补偿目镜配合使用。使用。使用。使用。C C、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制、特种物镜：在上述物镜基础上，为达到某些特定观察效果而制造的物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧造的物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧造的物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧造的物镜。如带校正环物镜，带视场光阑物镜，相差物镜，荧光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工

45、作距离物镜等光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等光物镜，无应变物镜，无罩物镜，长工作距离物镜等D D、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（、目前在研究中常用的物镜还有：半复消色差物镜（FLFL），平场物），平场物），平场物），平场物镜镜镜镜(Plan)(Plan)，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（，平场复消色差物镜（Plan ApoPlan Apo）,超平场物镜（超平场物镜（超平场物镜（超平场物镜（SplanSplan，超平场复消色差物镜（超平场复消色差物镜（

46、超平场复消色差物镜（超平场复消色差物镜（Splan ApoSplan Apo）等。）等。）等。）等。第27页，本讲稿共64页3.2光学光学显微镜显微镜的成像的成像原理原理第28页，本讲稿共64页3.3显微镜的性能显微镜的性能分辨力也叫分辨本领或解像力，光学显微镜分辨分辨力也叫分辨本领或解像力，光学显微镜分辨力定义为在力定义为在25cm明视距离处能分辨清楚尽可能明视距离处能分辨清楚尽可能靠近的两点的能力，辨认两点之间的距离愈小，靠近的两点的能力，辨认两点之间的距离愈小，则分辨本领愈高，人眼的分辨力约为则分辨本领愈高，人眼的分辨力约为100m，而，而，而，而显微镜的分辨力显微镜的分辨力显微镜的分辨

47、力显微镜的分辨力R以下列公式计算：以下列公式计算：R=0.61/NA第29页，本讲稿共64页目前目前NA最大可以达到最大可以达到1.4；照明波长最短为；照明波长最短为400nm；代入公式可得；代入公式可得公式计算：公式计算：R=0.610.4/1.4=0.17最大分辨率约最大分辨率约0.2微米，约等于可见光最短波微米，约等于可见光最短波长的一半。长的一半。第30页，本讲稿共64页3.4显微镜的使用操作及注意事项显微镜的使用操作及注意事项(1)观察前的准备观察前的准备(2)低倍镜观察低倍镜观察(3)高倍镜观察高倍镜观察(4)油镜观察油镜观察第31页，本讲稿共64页3.5微生物涂片、染色的检验技术

48、微生物涂片、染色的检验技术细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。第32页，本讲稿共64页常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染

49、色，这是因为在中性、碱常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经

50、染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。美蓝、结晶紫、碱性复红等。美蓝、结晶紫、碱性复红等。美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基当细菌分解糖类产酸使培养基pHpH下降时，细菌下降时，细菌下降时，细菌下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚