微生物检验第六章球菌讲稿.ppt

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1、微生物检验第六章球菌第一页，讲稿共二十一页哦脑膜炎奈瑟菌临床意义脑膜炎奈瑟菌临床意义致病物质致病物质脂多糖、荚膜、菌毛、内毒素脂多糖、荚膜、菌毛、内毒素所致疾病所致疾病普通型普通型 暴发型暴发型慢性败血症型慢性败血症型2.三种临床类型三种临床类型1.流行性脑脊髓膜炎流行性脑脊髓膜炎我国我国A群为主群为主第二页，讲稿共二十一页哦菌毛、外膜蛋白、蛋菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖、白水解酶、脂多糖、铁调节蛋白铁调节蛋白淋病淋病人类是淋病奈瑟菌的人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主唯一宿主。主要通过主要通过性接触性接触引起泌尿道和生殖系统炎症引起泌尿道和生殖系统炎症 新生儿新生儿淋菌性结膜炎淋菌性结膜炎新生

2、儿由产道感染，新生儿由产道感染，1%硝酸银滴硝酸银滴眼。眼。致病物质致病物质淋病奈瑟菌临床意义淋病奈瑟菌临床意义第三页，讲稿共二十一页哦1.1.形态染色形态染色革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌直径直径0.61.50.61.5mm形似双肾或咖啡豆样，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对凹面相对无动力，无芽胞，无动力，无芽胞，某些菌种形成荚膜某些菌种形成荚膜三、生物学特性三、生物学特性第四页，讲稿共二十一页哦2 2培养特性培养特性需在培养基中添加羊血、兔血或血清。需在培养基中添加羊血、兔血或血清。需氧生长，初次分离需需氧生长，初次分离需57%CO2和高湿度。和高湿度。最适生长温度为最适生长温度为3537，低于

3、，低于30不生长，血不生长，血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径明或半透明、直径12mm的不溶血、圆形、灰兰的不溶血、圆形、灰兰色菌落。色菌落。第五页，讲稿共二十一页哦3 3生化特性生化特性氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）。氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）。对糖分解能力、硝酸盐还原能力和对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据。同，常作为菌种间的鉴别依据。第六页，讲稿共二十一页哦4 4抵抗力抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。

4、剂敏感。对青霉素敏感对青霉素敏感但近年来由质粒介导的但近年来由质粒介导的 内酰胺酶所致的内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。第七页，讲稿共二十一页哦第八页，讲稿共二十一页哦标本采集标本采集 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本。刺液等标本。采集后立即送往实验室。采集后立即送往实验室。用血平板进行床边接种后置用血平板进行床边接种后置3535孵育。孵育。血液标本接种在血液培养瓶中置血液标本接种在血液培养瓶中置3535孵育。孵育。标本运送时需要标本运送时需要3535保温。保温。第九页，讲稿共二十一页哦标本直接检查

5、标本直接检查直接涂片检查直接涂片检查脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片。脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片。皮肤瘀点渗出液涂片。皮肤瘀点渗出液涂片。革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。期诊断。第十页，讲稿共二十一页哦分离培养鉴定分离培养鉴定 脑脊液标本：接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平脑脊液标本：接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板。板。咽拭子或鼻咽拭子：接种在选择性培养基上如改良咽拭子或鼻咽拭子：接种在选

6、择性培养基上如改良的的MTMMTM、NCYNCY等培养基。等培养基。血液标本：经增菌培养基增菌培养后，移种至巧血液标本：经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上。克力琼脂或羊血琼脂平板上。置置57%57%CO2 35CO2 35孵育，每隔孵育，每隔2424h h观察平板。观察平板。第十一页，讲稿共二十一页哦鉴定鉴定初步确定为奈瑟菌属初步确定为奈瑟菌属直径直径1212mmmm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革兰染色见阴性双球菌涂片革兰染色见阴性双球菌氧化酶试验阳性氧化酶试验阳性葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性。葡萄糖和麦芽糖发酵试

7、验阳性、其他糖类发酵阴性。用分型血清确定血清型别。用分型血清确定血清型别。平板上没有发现菌落需继续观察平板上没有发现菌落需继续观察7272h h后无菌生长可报告为阴性。后无菌生长可报告为阴性。第十二页，讲稿共二十一页哦1 1检验程序检验程序第十三页，讲稿共二十一页哦2 2标本采集标本采集 阴道和宫颈分泌物：用无菌塑料棒涤纶拭子，阴道和宫颈分泌物：用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内伸入阴道后穹隆或宫颈内1 1cmcm处处 停留停留10151015秒秒时间，蘸取。时间，蘸取。采集尿道分泌物：弃去前段脓性分泌物，留采集尿道分泌物：弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本。取后段作为标本。新生儿

8、结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。第十四页，讲稿共二十一页哦3 3标本直接检查标本直接检查标本采集后涂片、革兰染色、显微镜检查标本采集后涂片、革兰染色、显微镜检查第十五页，讲稿共二十一页哦4 4分离培养与鉴定分离培养与鉴定选择培养基如选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），），或或NYC。置于置于5%CO2气体条件下气体条件下3537孵育。孵育。每隔每隔24h观察平板。观察平板。第十六页，讲稿共二十一页哦（1 1）形态和生化鉴定）形态和生化鉴定可疑菌落可疑菌落直径直径0.51mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌

9、落。凸起的菌落。确认确认将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌氧化酶和触酶试验阳性氧化酶和触酶试验阳性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性培养需观察培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。后无菌生长可报告为阴性。第十七页，讲稿共二十一页哦（2 2）免疫学鉴定）免疫学鉴定直接荧光染色。直接荧光染色。凝集试验或免疫渗滤技术。凝集试验或免疫渗滤技术。（3 3）分子生物学鉴定）分子生物学鉴定检测靶片段的基因检测靶片段的基因隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明

10、蛋白甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、基因、菌毛菌毛DNA 探针、探针、rRNA 基因探针和基因探针和porA 假基假基因。因。基因探针杂交、核酸扩增。基因探针杂交、核酸扩增。第十八页，讲稿共二十一页哦卡他莫拉菌（卡他莫拉菌（M.catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道可存在于健康人群的上呼吸道近十年来报道近十年来报道导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎在免疫抑制和在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症的患者可导致菌血症是社区呼吸道感染的主要病原体之一。是社区呼吸道感染的主要病原体之一。第二节 卡他莫拉菌第十九页，讲稿共二十一页哦临床分离临床分离从

11、中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本痰液标本直接涂片革兰染色痰液标本直接涂片革兰染色如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为为0.51.5m革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染。革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染。第二十页，讲稿共二十一页哦培养及鉴定培养及鉴定在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好 3524h孵育后菌落直径孵育后菌落直径13mm，灰白色、光灰白色、光滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动。移动。氧化酶和触酶阳性。氧化酶和触酶阳性。不发酵葡萄糖和其它糖类产酸。不发酵葡萄糖和其它糖类产酸。第二十一页，讲稿共二十一页哦