微生物的实验室培养好用讲稿.ppt

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1、微生物的实验室培养好用第一页，讲稿共五十九页哦课题课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养第二页，讲稿共五十九页哦第三页，讲稿共五十九页哦课程标准课程标准进行微生物的分离和培养。行微生物的分离和培养。课标解读课标解读1.知知道培养基的基道培养基的基础础知知识识，进进行无菌技行无菌技术术的操作。的操作。2.进进行微生物培养。行微生物培养。第四页，讲稿共五十九页哦1培养基培养基(1)培培养基概念养基概念按按照照微微生生物物对对 的的不不同同需需求求，配配制制出出供供其其 的的营营养基养基质质。培养基的成分及无菌操作技术培养基的成分及无菌操作技术 营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖第五页，讲稿共五十

2、九页哦(2)培养基种培养基种类类包括包括 培养基和培养基和 培养基等。培养基等。(3)培养基的化学成分培养基的化学成分一一般般都都含含有有 、和和 四四类类营营养养成成分分。还还需需要要满满足微生物生足微生物生长对长对 、及及 等的要求。等的要求。固体固体液体液体水水碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐pH特殊营养物质特殊营养物质氧气氧气第六页，讲稿共五十九页哦2无菌技术无菌技术(1)无无菌菌技技术术围围绕绕着着如如何何避避免免杂杂菌菌的的污污染染展展开开，主主要要包包括括以以下下四四个方面个方面对实验对实验操作的操作的 、操作者的、操作者的 ，进进行清行清洁洁和和 ；将用于微生物培养的器皿、将用于微

3、生物培养的器皿、和和 等等进进行行；为为避免周避免周围环围环境中微生物的境中微生物的污污染，染，实验实验操作操作应应在在 附附近近进进行；行；实实验验操操作作时时应应避避免免已已经经灭灭菌菌处处理理的的材材料料用用具具与与 相相接触。接触。空间空间衣着和手衣着和手消毒消毒接种用具接种用具培养基培养基灭菌灭菌酒精灯火焰酒精灯火焰周围的物品周围的物品第七页，讲稿共五十九页哦(2)消毒和消毒和灭灭菌菌消消毒毒：消消毒毒是是指指使使用用 方方法法仅仅杀杀死死物物体体表表面面或或内内部部一一部部分分 的的微微生生物物，(包包括括；不不包包括括)芽芽孢孢和和孢孢子，常用的方法有子，常用的方法有 消毒法、消

4、毒法、消毒法、消毒法、消消毒法。毒法。灭灭菌：菌：灭灭菌是指使用菌是指使用 杀杀死物体内外死物体内外 ，(包包括括，不不包包括括)芽芽孢孢和和孢孢子子，常常用用的的方方法法有有 灭灭菌菌、灭灭菌和菌和 灭灭菌。菌。较为温和的物理或化学较为温和的物理或化学对人体有害对人体有害不包括不包括煮沸煮沸巴氏巴氏化学药剂化学药剂强烈的理化因素强烈的理化因素所有的所有的微生物微生物包括包括灼烧灼烧高压蒸汽高压蒸汽干热干热第八页，讲稿共五十九页哦思思维维激激活活1 用用酒酒精精擦擦拭拭实实验验者者手手臂臂属属消消毒毒还还是是灭灭菌菌？70%与与95%的酒精，哪一种效果更好？的酒精，哪一种效果更好？为为什么？什

5、么？提提示示酒酒精精擦擦拭拭属属化化学学消消毒毒，酒酒精精消消毒毒时时，70%的的酒酒精精杀杀菌菌效效果果最最好好。原原因因是是：浓浓度度过过高高，使使菌菌体体表表面面蛋蛋白白质质凝凝固固成成一一层层保保护护膜膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。第九页，讲稿共五十九页哦1碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳营营养要素养要素来源来源功能功能碳源碳源无机碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含碳无机物构成构成细细胞物胞物质质和一和一些代些代谢产谢产物；物；有机碳既是碳源又有机碳既是碳源又

6、是能源是能源有机碳源有机碳源糖糖类类、脂、脂质质、蛋白、蛋白质质、有、有机酸、石油、花生粉机酸、石油、花生粉饼饼等等第十页，讲稿共五十九页哦氮源氮源无机氮源无机氮源无机氮：无机氮：NH3、铵盐铵盐、硝、硝酸酸盐盐、N2等等将无机氮合成含氨的将无机氮合成含氨的代代谢产谢产物物有机氮源有机氮源牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨胨、核酸、尿素、氨基酸核酸、尿素、氨基酸合成蛋白合成蛋白质质、核酸及、核酸及含氮的代含氮的代谢产谢产物物生生长长因子因子维维生素、氨基酸、碱基生素、氨基酸、碱基酶酶和核酸的和核酸的组组成成成成分；分；参与代参与代谢过谢过程程中的中的酶酶促反促反应应第十一页，讲稿共五十九页哦2.培养基

7、类型划分培养基类型划分划分划分标标准准培养基种培养基种类类特点特点用途用途物理物理性性质质液体培养基液体培养基不加凝固不加凝固剂剂工工业业生生产产半固体培养基半固体培养基加凝固加凝固剂剂，如，如琼琼脂脂观观察微生物的运察微生物的运动动、分、分类鉴类鉴定定固体培养基固体培养基微生物分离、微生物分离、鉴鉴定、活定、活菌菌计计数、保藏菌种数、保藏菌种化学化学成分成分天然培养基天然培养基含化学成分不明含化学成分不明确的天然物确的天然物质质工工业业生生产产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分已知用化学成分已知的化学物的化学物质质配成配成)分分类类、鉴鉴定定第十二页，讲稿共五十九页

8、哦用用途途选择选择培培养基养基培养基中加入某种化培养基中加入某种化学物学物质质，以抑制不需，以抑制不需要的微生物的生要的微生物的生长长，促促进进所需要的微生物所需要的微生物的生的生长长培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物(如如培养酵母菌和霉菌，可在培养培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入葡萄球菌，可在培养基中加入高高浓浓度食度食盐盐)鉴别鉴别培培养基养基根据微生物的代根据微生物的代谢谢特特点，在培养基中加入点，在培养基中加入某种指示某种指示剂剂或化学或化学药药品品鉴别鉴别不同种不同种类类的微生物，如可的微生物，如可用伊

9、用伊红红美美蓝蓝培养基培养基鉴别饮鉴别饮用用水或乳制品中是否有大水或乳制品中是否有大肠肠杆菌杆菌(若有，菌落呈若有，菌落呈现现黑黑色，并色，并带带有金属光有金属光泽泽)第十三页，讲稿共五十九页哦3.无菌技术无菌技术(1)消消毒和毒和灭灭菌的区菌的区别别条件条件结结果果常用的方法常用的方法消毒消毒较为较为温和温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀仅杀死物体表面或内死物体表面或内部一部分部一部分对对人体有害人体有害的微生物的微生物(不包括芽不包括芽孢孢和和孢孢子子)煮沸消毒法、巴氏消煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外毒法、紫外线线或化学或化学药药物消毒法物消毒法灭灭菌菌强强烈的理烈的理化因素化因素杀杀

10、死物体内外所有的死物体内外所有的微生物，包括芽微生物，包括芽孢孢和和孢孢子子灼灼烧灭烧灭菌、干菌、干热灭热灭菌、菌、高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌菌第十四页，讲稿共五十九页哦(2)无菌技无菌技术术主要操作要求主要操作要求实实验验前前应应对对操操作作空空间间、操操作作人人员员消消毒毒，对对所所用用器器具具和和培培养养基基灭灭菌。菌。实实验验进进行行时时需需在在酒酒精精灯灯火火焰焰周周围围无无菌菌区区操操作作，另另外外要要避避免免已已灭灭菌菌处处理材料再次理材料再次污污染。染。第十五页，讲稿共五十九页哦特特别别提提示示(1)微微生生物物最最常常用用的的碳碳源源是是糖糖类类，尤尤其其是是葡葡萄萄糖糖；最最常

11、常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对对异异养养微微生生物物来来说说，含含C、H、O、N的的有有机机物物既既是是碳碳源源，又又是是氮源、能源。氮源、能源。(3)大大凡凡对对生生长长因因子子不不能能合合成成或或合合成成能能力力有有限限的的微微生生物物，其其培培养养基基中中均均需需额额外外添添加加生生长长因因子子，而而许许多多微微生生物物能能自自行行合合成成生生长长因因子子，其培养基中不需再添加。其培养基中不需再添加。第十六页，讲稿共五十九页哦【巩固巩固1】下下列培养基配方中能作列培养基配方中能作为选择为选择培养基、培养基、鉴别鉴别培养基的依培养基的依次是次是()。原料原料

12、蛋白蛋白胨胨/g10101010乳糖乳糖/g5555蔗糖蔗糖/g5555KH2PO4/g2222伊伊红红/g0.4美美蓝蓝/g0.065琼琼脂脂/g1020NaCl/g20蒸蒸馏馏水水/mL 1 000 1 000 1 000 1 000第十七页，讲稿共五十九页哦A.B C D解解析析高高浓浓度度的的食食盐盐可可以以抑抑制制多多种种细细菌菌的的生生长长，但但不不影影响响金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌的的生生长长，从从而而可可以以将将金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌分分离离出出来来，有有高高浓浓度度食食盐盐的的培培养养基基为为选选择择培培养养基基。在在培培养养基基中中加加入入伊伊红红和和美美蓝蓝，可可

13、以以用用来来鉴鉴别别饮饮用用水水和和乳乳制制品品中中是是否否存存在在大大肠肠杆杆菌菌，有有伊伊红红和和美美蓝蓝的培养基为鉴别培养基。的培养基为鉴别培养基。答案答案D第十八页，讲稿共五十九页哦1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)制制备备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨固体培养基的步固体培养基的步骤骤：称量称量 倒平板。倒平板。(2)倒平板的倒平板的过过程：程：在火焰旁右手拿在火焰旁右手拿锥锥形瓶，左手形瓶，左手 。右手拿右手拿锥锥形瓶，使形瓶，使锥锥形瓶的瓶口迅速通形瓶的瓶口迅速通过过 。左左手手将将培培养养皿皿打打开开一一条条缝缝隙隙，右右手手将将培培养养基基倒倒入入培培养养皿

14、皿，左左手立刻手立刻 。待待平平板板冷冷却却凝凝固固后后，将将平平板板 放放置置，使使皿皿盖盖在在下下、皿皿底在上。底在上。培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术 计算计算溶化溶化灭菌灭菌拔出棉塞拔出棉塞火焰火焰盖上皿盖盖上皿盖倒过来倒过来第十九页，讲稿共五十九页哦2纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(1)微微生物接种的最常用方法是生物接种的最常用方法是 和和 。(2)平板划平板划线线法：通法：通过过 在在琼琼脂固体培养基表面脂固体培养基表面 的的操作，将聚集的菌种操作，将聚集的菌种 。(3)稀稀释释涂涂布布平平板板法法：将将菌菌液液进进行行一一系系列列的的 ，然然后后将将不不

15、同同稀稀释释度度的的菌菌液液分分别别 ，进进行行培培养。当稀养。当稀释释倍数足倍数足够够高高时时，即可，即可获获得得 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种环接种环连续连续划线划线逐步稀释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面梯度稀释梯度稀释涂布到琼脂固体培养基的表面涂布到琼脂固体培养基的表面单个细菌形成的菌落单个细菌形成的菌落第二十页，讲稿共五十九页哦3菌种的保存菌种的保存为了了保保持持菌菌种种的的纯纯净净，需需对对菌菌种种进进行行保保藏藏。对对于于频频繁繁使使用用的的菌菌种种，我我们们可可以以采采用用 法法；对对于于需需要要长长期期保保存存的的菌菌种种，可可以采用以采

16、用 法。法。临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏第二十一页，讲稿共五十九页哦思思维维激激活活2 除除平平板板划划线线法法与与稀稀释释涂涂布布平平板板法法外外，还还有有哪哪些些接接种种方方法？微生物接种技法？微生物接种技术术中最核心的内容是什么？中最核心的内容是什么？提提示示微微生生物物接接种种方方法法还还有有斜斜面面接接种种及及穿穿刺刺接接种种等等方方法法，所所有有微微生生物物接接种种方方法法中中最最核核心心的的内内容容是是“防防止止杂杂菌菌污污染染，保保证证培培养养物物的的纯纯度度”。第二十二页，讲稿共五十九页哦1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算算：依依据据牛牛肉肉膏膏蛋

17、蛋白白胨胨培培养养基基配配方方比比例例，计计算算配配制制100 mL的培养基的培养基时时，各种成分的用量，各种成分的用量 称称量量：牛牛肉肉膏膏比比较较黏黏稠稠，可可用用称称量量纸纸称称取取，牛牛肉肉膏膏和和蛋蛋白白胨胨都都易吸潮，称取易吸潮，称取时动时动作要迅速，称后要及作要迅速，称后要及时时盖上瓶盖盖上瓶盖第二十三页，讲稿共五十九页哦第二十四页，讲稿共五十九页哦2微生物分离与纯化技术微生物分离与纯化技术(1)原理原理微微生生物物的的分分离离与与纯纯化化就就是是将将待待检检测测微微生生物物样样品品通通过过划划线线或或涂涂布布接接种种在在固固体体培培养养基基上上，样样品品中中的的每每一一个个细

18、细胞胞或或孢孢子子都都可可以以生生长长繁繁殖殖形形成成单单个个菌菌落落。将将单单个个菌菌落落接接种种到到斜斜面面培培养养基基上上，经经培培养养后，即可得到一个微生物的后，即可得到一个微生物的纯纯种。种。第二十五页，讲稿共五十九页哦(2)方法步方法步骤骤微生物的分离包括微生物的分离包括样样品稀品稀释释、划、划线线或涂布及培养三个步或涂布及培养三个步骤骤梯度稀梯度稀释释操作操作(如如图图1)图图1微生物分离操作流程图微生物分离操作流程图第二十六页，讲稿共五十九页哦a将分将分别别盛有盛有9 mL水的水的6支支试试管管灭灭菌，并按菌，并按101106的的顺顺序序编编号。号。b用用移移液液管管吸吸取取1

19、 mL已已培培养养的的菌菌悬悬液液，注注入入第第二二支支试试管管中中。用用手手指指轻压轻压移液管上的橡皮移液管上的橡皮头头，吹吸三次，使菌，吹吸三次，使菌悬悬液与水充分混匀。液与水充分混匀。c从从101倍倍稀稀释释的的试试管管中中吸吸取取1 mL稀稀释释液液，注注入入102倍倍稀稀释释的的试试管管中，重复第中，重复第2步的操作。以此步的操作。以此类类推，直到完成最后一支推，直到完成最后一支试试管的稀管的稀释释。注注意意：移移液液管管需需要要经经过过灭灭菌菌。操操作作时时，试试管管口口和和移移液液管管应应在在离离火火焰焰12 cm处处。第二十七页，讲稿共五十九页哦划划线线或涂布或涂布平平板板划划

20、线线分分离离法法：在在近近火火焰焰处处，左左手手拿拿皿皿底底，右右手手拿拿接接种种环环，挑挑取取大大肠肠杆杆菌菌培培养养液液在在平平板板上上划划线线，常常用用的的划划线线方方法法有有平平行行划划线线和和连连续续划划线线两两种种。平平行行划划线线时时，每每转转一一个个角角度度烧烧一一次次接接种种环环。划划线线完完毕毕后，盖上培养皿盖，做好后，盖上培养皿盖，做好标记标记。图图2划线示意图划线示意图第二十八页，讲稿共五十九页哦涂布分离法：取涂布分离法：取3个平板，底面分个平板，底面分别别用用记记号笔写上号笔写上104、105和和106三种稀三种稀释释度，然后用无菌吸管分度，然后用无菌吸管分别别吸取相

21、吸取相应应稀稀释释度的稀度的稀释释液各液各0.1 mL，放入已，放入已标记标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻轻轻地涂布均匀，室温下静置地涂布均匀，室温下静置510 min，使菌，使菌悬悬液吸附液吸附进进培养基培养基(图图3)。培养培养将将划划线线或或涂涂布布接接种种的的平平板板倒倒置置于于培培养养箱箱或或温温室室中中37 培培养养1624 h，即可，即可长长出出单单菌落菌落(图图4)第二十九页，讲稿共五十九页哦图图3涂布法示意图图涂布法示意图图4斜面接种法斜面接种法第三十页，讲稿共五十九页哦(3)结结果分析果分析确确认认培养基制培养基制备备是否

22、合格是否合格为为确确认认培培养养基基制制备备是是否否合合格格，需需设设置置对对照照实实验验，即即接接种种后后的的培培养养基基和和一一个个未未接接种种的的培培养养基基都都放放入入37 恒恒温温箱箱中中，培培养养12 h和和24 h，观观察察现现象象并并记记录录如如果果未未接接种种的的培培养养基基在在恒恒温温箱箱中中保保温温12 d后后无无菌菌落落生生长长，说说明明培培养养基基的的制制备备是是成成功功的的，否否则则实实验验失失败败需需要要重新制重新制备备。第三十一页，讲稿共五十九页哦接种操作成功的接种操作成功的标标准准如如果果培培养养基基上上生生长长的的菌菌落落的的颜颜色色、形形状状、大大小小基基

23、本本一一致致，并并符符合合该该菌菌菌菌落落的的特特点点，则则说说明明接接种种操操作作是是符符合合要要求求的的；如如果果培培养养基基上上出出现现了了其其他他菌菌落落，则则说说明明接接种种过过程程中中无无菌菌操操作作还还未未达达到到要要求求，实实验验失失败败，需要分析原因，再次制，需要分析原因，再次制备备。第三十二页，讲稿共五十九页哦特别提醒特别提醒(1)进行划线时最后一区和第一区不可接触。进行划线时最后一区和第一区不可接触。(2)平板划线各次灼烧接种环的目的。平板划线各次灼烧接种环的目的。平平板板划划线线操操作作第第一一次次划划线线及及每每次次划划线线之之前前都都需需灼灼烧烧灭灭菌菌，划划线线操

24、操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。(3)灼灼烧烧接接种种环环之之后后，要要冷冷却却后后才才能能伸伸入入菌菌液液，以以免免温温度度太太高高杀杀死死菌种。菌种。第一次灼烧第一次灼烧每次划线之前灼烧每次划线之前灼烧划线结束划线结束目的目的避免接种环避免接种环上可能存在上可能存在的微生物污的微生物污染培养物染培养物灼烧杀死上次划线结束灼烧杀死上次划线结束后接种环上残留的菌后接种环上残留的菌种，使每种，使每 次划线的菌种次划线的菌种来自上次划线末端来自上次划线末端划线结束后杀死接划线结束后杀死接种环上残留的菌种，种环上残留的菌种，避免细菌污染环境避免细菌污

25、染环境和感染操作者和感染操作者第三十三页，讲稿共五十九页哦【巩固巩固2】下下列有关平板划列有关平板划线线操作的叙述不正确的是操作的叙述不正确的是()。A第第一一步步灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了避避免免接接种种环环上上可可能能存存在在的的微微生生物物污污染培养物染培养物B每每次次划划线线前前，灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了杀杀死死上上次次划划线线结结束束后后，接接种种环环上残留的菌种上残留的菌种C在第二区域内划在第二区域内划线时线时，接种，接种环环上的菌种直接来源于菌液上的菌种直接来源于菌液D划划线线结结束束后后，灼灼烧烧接接种种环环，能能及及时时杀杀死死接接种种环环上上残残留留的的菌菌种

26、，避免种，避免细细菌菌污污染染环环境和感染操作者境和感染操作者第三十四页，讲稿共五十九页哦解解析析平平板板划划线线操操作作中中，接接种种环环取取菌菌种种前前灼灼烧烧的的目目的的是是避避免免接接种种环环上上可可能能存存在在的的微微生生物物污污染染培培养养物物，以以后后每每次次划划线线前前灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了杀杀死死上上次次划划线线后后残残留留的的菌菌种种。划划线线结结束束仍仍需需灼灼烧烧接接种种环环，是是为为了了能能及及时时杀杀死死接接种种环环上上残残留留的的菌菌种种，避避免免细细菌菌污污染染环环境境和和感感染染操操作作者者。从从第第二二次次划划线线开开始始，每每次次划划线线时时接接

27、种种环环上上的的菌菌种种直直接接来源于上次划线的末端。来源于上次划线的末端。答案答案C第三十五页，讲稿共五十九页哦【例例1】氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污污染染环环境。某研究小境。某研究小组组依照下列依照下列实验实验方案方案(图图1)筛选筛选出能高效降解出能高效降解氯氯苯的微生物苯的微生物SP1菌。培养基配方如表菌。培养基配方如表1。微生物的营养与培养基类型微生物的营养与培养基类型 图图1第三十六页，讲稿共五十九页哦表表1培养基的培养基的组组成成第三十七页，讲稿共五十九页哦(1)配配制制号号固固体体培培养养基基时时，除除添添加加

28、号号液液体体培培养养基基成成分分外外，还还应应添加添加1%的的_。(2)培养基配制培养基配制时时，灭灭菌与菌与调调pH的先后的先后顺顺序是序是_。(3)从从用用途途上上来来说说，号号培培养养基基和和号号培培养养基基分分别别属属于于_培培养养基基和和_培培养养基基。在在号号培培养养基基中中，为为SP1菌菌提提供供氮氮源源的的成成分分是是_。(4)在在营营养养缺缺乏乏或或环环境境恶恶劣劣时时，SP1的的菌菌体体变变成成一一个个圆圆形形的的休休眠眠体体，这这种休眠体被称种休眠体被称为为_。第三十八页，讲稿共五十九页哦(5)将将SP1菌菌接接种种在在含含不不同同浓浓度度氯氯苯苯的的号号培培养养液液中中

29、培培养养，得得到到生生长长曲曲线线(如如图图2)。从从图图2可可知知，SP1菌菌在在_培培养养条条件件下下最最早早停停止止生生长长，其原因是，其原因是_。图图2第三十九页，讲稿共五十九页哦思维导图：思维导图：第四十页，讲稿共五十九页哦深度剖析深度剖析本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程，意在考查考生的图表信息转换与分析能力。过程，意在考查考生的图表信息转换与分析能力。(1)固体培养基固体培养基中需加入琼脂作为凝固剂。中需加入琼脂作为凝固剂。(2)先配制培养基后灭菌，调先配制培养基后灭菌，调pH属于培属于培养基的配制过程，故先调养基的配

30、制过程，故先调pH后灭菌。后灭菌。(3)从用途上看，从用途上看，号培养基号培养基为通用培养基为通用培养基(基本培养基基本培养基)；号培养基是选择培养基，以氯苯为号培养基是选择培养基，以氯苯为唯一的碳源，其中为唯一的碳源，其中为SP1菌提供氮源的成分是硝酸铵。菌提供氮源的成分是硝酸铵。(4)芽孢是芽孢是在细胞质内高度浓缩脱水形成的抗逆性很强的球形或椭圆形的休在细胞质内高度浓缩脱水形成的抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。眠体。(5)由图示可知由图示可知SP1菌在菌在20 mg/L氯苯培养条件下最早停止生氯苯培养条件下最早停止生长，长，20 mg/L氯苯可提供的碳源较少，碳源最早耗尽，影响菌体的氯苯

31、可提供的碳源较少，碳源最早耗尽，影响菌体的生长繁殖。生长繁殖。第四十一页，讲稿共五十九页哦答答案案(1)琼脂脂(2)先先调调pH，后后灭灭菌菌(3)通通用用选选择择硝硝酸酸铵铵(4)芽芽孢孢(5)20 mg/L氯氯苯碳源最早耗尽苯碳源最早耗尽误误区区警警示示(1)琼琼脂脂是是最最常常用用的的凝凝固固剂剂，但但固固体体培培养养基基未未必必均均加加琼琼脂，如棉子壳培养基也属固体培养基。脂，如棉子壳培养基也属固体培养基。(2)牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨等等天天然然物物质质既既可可提提供供碳碳源源，也也可可提提供供氮氮源源及及生生长因子。长因子。第四十二页，讲稿共五十九页哦【例例2】培培养养基基、培培

32、养养皿皿、接接种种环环、实实验验操操作作者者的的双双手手、空空气气、牛牛奶所采用的奶所采用的灭灭菌、消毒方法依次是菌、消毒方法依次是()。化化学学消消毒毒灼灼烧烧灭灭菌菌干干热热灭灭菌菌紫紫外外线线灭灭菌菌高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌菌巴氏消毒法巴氏消毒法A BC D无菌操作技术无菌操作技术 思维导图：思维导图：第四十三页，讲稿共五十九页哦深深度度剖剖析析培培养养基基用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌；培培养养皿皿能能耐耐高高温温，需需用用干干热热灭灭菌菌；接接种种环环可可用用灼灼烧烧灭灭菌菌达达到到迅迅速速彻彻底底的的灭灭菌菌效效果果；实实验验操操作作者者的的双双手手可可用用化化学学药药剂剂进进行行消消

33、毒毒，如如用用酒酒精精擦擦拭拭双双手手；空空气气可可用用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案答案A第四十四页，讲稿共五十九页哦思维深化思维深化几种常用灭菌方法比较几种常用灭菌方法比较(见下表见下表)方法方法灭菌操作灭菌操作适用对象适用对象灼烧灼烧灭菌灭菌在酒精灯火焰的充分燃烧层在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧灼烧对接种环、接种针或其他金属对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌瓶口灭菌干热干热灭菌灭菌在干热灭菌箱内，在干热灭菌箱内，160170 条件下，加热条件下，加热12 h耐高

34、温且需保持干燥的物品，耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等如玻璃器皿和金属用具等高压高压蒸汽蒸汽灭菌灭菌在高压蒸汽灭菌锅内，在高压蒸汽灭菌锅内，121，100 kPa，灭菌，灭菌1530 min培养基、发酵设备等培养基、发酵设备等紫外紫外线灭线灭菌菌30 W照射照射30 min小型接种室、接种箱等小型接种室、接种箱等第四十五页，讲稿共五十九页哦【例例3】如如图图是是微微生生物物平平板板划划线线示示意意图图，划划线线的的顺顺序序为为12345。下下列操作方法正确的是列操作方法正确的是()。A操作前要将接种操作前要将接种环环放在火焰放在火焰边边灼灼烧灭烧灭菌菌B划划线线操作操作须须在火

35、焰上在火焰上进进行行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12345区域中划区域中划线线前后都要前后都要对对接种接种环灭环灭菌菌微生物纯化培养微生物纯化培养 第四十六页，讲稿共五十九页哦深深度度剖剖析析本本题题考考查查平平板板划划线线的的操操作作方方法法。在在每每次次划划线线前前后后都都要要对对接接种种环环进进行行灭灭菌菌，接接种种环环的的灭灭菌菌方方法法应应是是在在火火焰焰上上灼灼烧烧，接接种种时时划划线线操操作作是是在在火火焰焰边边进进行行。在在5个个区区域域中中，只只要要有有单单个个活活细细菌菌，通过培养即可获得所需菌落。通过培养即可获得所需菌落。答案答案D第四十

36、七页，讲稿共五十九页哦归归纳纳提提升升(1)倒倒平平板板时时不不要要将将培培养养基基溅溅在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间间，否否则则此培养基不能用来培养微生物。此培养基不能用来培养微生物。(2)平平板板倒倒置置原原因因：平平板板皿皿盖盖上上会会凝凝结结水水珠珠，培培养养基基表表面面的的温温度度也也较较高高，平平板板倒倒置置后后，既既可可使使培培养养基基表表面面的的水水分分更更好好地地挥挥发发，又又可可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)两种纯化方法的比较两种纯化方法的比较第四十八页，讲稿共五十九页哦项目项目优点优点缺点缺点适用范围适用范围平板划平板划

37、线法线法可以观察菌落特征，可以观察菌落特征，对混合菌进行分离对混合菌进行分离不能计数不能计数适用于好氧菌适用于好氧菌稀释涂稀释涂布平板布平板法法可以计数，可以观察可以计数，可以观察菌落特征菌落特征吸收量较少，较吸收量较少，较麻烦，平板不干麻烦，平板不干燥效果不好，容燥效果不好，容易蔓延易蔓延适用于厌氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌和兼性厌氧菌第四十九页，讲稿共五十九页哦单击此处进入单击此处进入 随堂达标检测随堂达标检测第五十页，讲稿共五十九页哦旁栏思考题旁栏思考题1无无菌菌技技术术除除了了用用来来防防止止实实验验室室的的培培养养物物被被其其他他外外来来微微生生物物污污染外，染外，还还有什么目的？有

38、什么目的？解解析析许许多多微微生生物物对对人人类类是是有有害害的的，因因此此实实验验室室中中无无菌菌技技术术还能有效避免操作者自身被微生物感染。还能有效避免操作者自身被微生物感染。答案答案无无菌技菌技术还术还能有效避免操作者自身被微生物感染。能有效避免操作者自身被微生物感染。第五十一页，讲稿共五十九页哦2请请你你判判断断以以下下材材料料或或用用具具是是否否需需要要消消毒毒或或灭灭菌菌。如如果果需需要要，请选择请选择合适的方法。合适的方法。(1)培养培养细细菌用的培养基与培养皿。菌用的培养基与培养皿。(2)玻璃玻璃试试管、管、烧烧瓶和吸管。瓶和吸管。(3)实验实验操作者的双手。操作者的双手。解解

39、析析消消毒毒和和灭灭菌菌是是无无菌菌技技术术的的两两项项基基本本技技术术，实实践践中中需需要要根根据据无无菌菌操操作作的的对对象象合合理理地地选选择择使使用用。原原则则是是既既要要考考虑虑使使用用的的效效果，又要考虑无菌操作对象的承受能力。果，又要考虑无菌操作对象的承受能力。答案答案(1)、(2)需需要要灭灭菌；菌；(3)需要消毒。需要消毒。第五十二页，讲稿共五十九页哦倒平板操作讨论题倒平板操作讨论题1培培养养基基灭灭菌菌后后，需需要要冷冷却却到到50 左左右右时时，才才能能用用来来倒倒平平板。你用什么板。你用什么办办法来估法来估计计培养基的温度？培养基的温度？答答案案可可以以用用手手触触摸摸

40、盛盛有有培培养养基基的的锥锥形形瓶瓶，感感觉觉锥锥形形瓶瓶的的温温度下降到度下降到刚刚刚刚不不烫烫手手时时，就可以，就可以进进行倒平板了。行倒平板了。2为为什么需要使什么需要使锥锥形瓶的瓶口通形瓶的瓶口通过过火焰？火焰？答案答案通通过过灼灼烧灭烧灭菌，防止瓶口的微生物菌，防止瓶口的微生物污污染培养基。染培养基。第五十三页，讲稿共五十九页哦3平板冷凝后，平板冷凝后，为为什么要将平板倒置？什么要将平板倒置？答答案案平平板板冷冷凝凝后后，皿皿盖盖上上会会凝凝结结水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的湿湿度度也也比比较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可以以使使培培养养基基表表面面的的水

41、水分分更更好地好地挥发挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污污染。染。4在在倒倒平平板板的的过过程程中中，如如果果不不小小心心将将培培养养基基溅溅在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间间的部位，的部位，这这个平板个平板还还能用来培养微生物能用来培养微生物吗吗？为为什么？什么？答答案案空空气气中中的的微微生生物物可可能能在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间间的的培培养养基基上上滋滋生，因此最好不要用生，因此最好不要用这这个平板培养微生物。个平板培养微生物。第五十四页，讲稿共五十九页哦平板划线操作讨论题平板划线操作讨论题1为什什么么在在操操作作的的第第一一步步以以

42、及及每每次次划划线线之之前前都都要要灼灼烧烧接接种种环环？在划？在划线线操作操作结结束束时时，仍然需要灼，仍然需要灼烧烧接种接种环吗环吗？为为什么？什么？答答案案操操作作的的第第一一步步灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了避避免免接接种种环环上上可可能能存存在在的的微微生生物物污污染染培培养养物物；每每次次划划线线前前灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了杀杀死死上上次次划划线线结结束束后后，接接种种环环上上残残留留的的菌菌种种，使使下下一一次次划划线线时时，接接种种环环上上的的菌菌种种直直接接来来源源于于上上次次划划线线的的末末端端，从从而而通通过过划划线线次次数数的的增增加加，使使每每次次划划线线时

43、时菌菌种种的的数数目目逐逐渐渐减减少少，以以便便得得到到单单个个菌菌落落。划划线线结结束束后后灼灼烧烧接接种种环环，能能及及时时杀杀死死接接种种环环上上残残留留的的菌菌种种，避避免免细细菌菌污污染染环环境和感染操作者。境和感染操作者。第五十五页，讲稿共五十九页哦2在灼在灼烧烧接种接种环环之后，之后，为为什么要等其冷却后再什么要等其冷却后再进进行划行划线线？答案答案以免接种以免接种环环温度太高，温度太高，杀杀死菌种。死菌种。3在在做做第第二二次次以以及及其其后后的的划划线线操操作作时时，为为什什么么总总是是从从上上一一次次划划线线的末端开始划的末端开始划线线？答答案案划划线线后后，线线条条末末端

44、端细细菌菌的的数数目目比比线线条条起起始始处处要要少少，每每次次从从上上一一次次划划线线的的末末端端开开始始，能能使使细细菌菌的的数数目目随随着着划划线线次次数数的的增增加而逐步减少，最加而逐步减少，最终终能得到由能得到由单单个个细细菌繁殖而来的菌落。菌繁殖而来的菌落。第五十六页，讲稿共五十九页哦涂布平板操作讨论题涂布平板操作讨论题涂涂布布平平板板的的所所有有操操作作都都应应在在火火焰焰附附近近进进行行。结结合合平平板板划划线线与与系系列稀列稀释释的无菌操作要求，想一想，第的无菌操作要求，想一想，第2步步应应如何如何进进行无菌操作？行无菌操作？答答案案应应从从操操作作的的各各个个细细节节保保证

45、证“无无菌菌”。例例如如，酒酒精精灯灯与与培培养养皿皿的的距距离离要要合合适适、吸吸管管头头不不要要接接触触任任何何其其他他物物体体、吸吸管管要要在在酒酒精精灯火焰周灯火焰周围围；等等。；等等。第五十七页，讲稿共五十九页哦练习练习1提提示示可可以以通通过过保保持持干干燥燥、真真空空的的条条件件，以以及及冷冷藏藏等等方方法法来阻止微生物的生长。来阻止微生物的生长。解解析析可可以以从从微微生生物物生生长长需需要要哪哪些些条条件件的的角角度度来来思思考考。例例如如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度等。微生物的生长需要水、空气、适宜的温度等。第五十八页，讲稿共五十九页哦2提示提示相同点：三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养。相同点：三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养。不不同同点点：无无土土栽栽培培技技术术的的操操作作并并不不需需要要保保证证无无菌菌的的条条件件，而而其其他他两种技术都要求严格的无菌条件。两种技术都要求严格的无菌条件。解解析析可可以以从从这这三三种种培培养养技技术术的的原原理理、操操作作步步骤骤等等方方面面分分别别进进行行总结归纳。总结归纳。第五十九页，讲稿共五十九页哦