消毒与灭菌 (2)讲稿.ppt

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1、关于消毒与灭菌(2)第一页，讲稿共八十页哦基本概念灭菌指杀灭物体表面和内部的一切微生物，包括细菌的芽孢和真菌的孢子。消毒指杀灭物体中的病原微生物，它只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及芽孢、孢子并不严格要求杀死。用来消毒的化学药品称消毒剂。第二页，讲稿共八十页哦 防腐指抑制物品中微生物繁殖的方法。用来防腐的化学药品称防腐剂，它与消毒剂无严格的界限，同种化学药品高浓度时为消毒剂，低浓度时为防腐剂。无菌是指没有活微生物的状态。防止微生物进入动物机体或其他物体的操作技术称无菌操作。第三页，讲稿共八十页哦杀菌-即灭菌。抑菌-即防腐。抗菌-包括防腐和杀菌。第四页，讲稿共八十页哦第一节物理性灭菌

2、、消毒及抑菌方法 第五页，讲稿共八十页哦一、热力消毒、灭菌法 第六页，讲稿共八十页哦高温杀菌的机理高温对微生物有明显的致死作用，高温可直接破坏菌体蛋白、核酸及酶系统，导致菌体死亡。高温灭菌干热灭菌湿热灭菌第七页，讲稿共八十页哦（一）干热灭菌法1、火焰灭菌法 用火直接烧死物体中的微生物，是一种最彻底的灭菌法。烧灼 接种环、试管口、瓶口等焚烧 动物尸体、污染废弃物等第八页，讲稿共八十页哦 酒精灯（左）酒精灯（左）电子火焰灭菌器（右）电子火焰灭菌器（右）第九页，讲稿共八十页哦 火焰灭菌转盘（左）火焰灭菌转盘（左）无火焰高温灭菌器（右）无火焰高温灭菌器（右）第十页，讲稿共八十页哦 灭菌操作灭菌操作第十

3、一页，讲稿共八十页哦2、热空气灭菌法 又称干烤灭菌，是在干烤箱中用热空气灭菌。该法以辐射传导热，穿透性差，需用较高温度及较长时间。主要用于玻璃器皿、瓷器、金属器械等的灭菌。通常用160170维持2h，能杀死一切微生物及芽孢。第十二页，讲稿共八十页哦第十三页，讲稿共八十页哦第十四页，讲稿共八十页哦（二）湿热灭菌（消毒）法包括以下5种煮沸 高压蒸汽灭菌法巴氏消毒法间歇灭菌法流通蒸汽灭菌法第十五页，讲稿共八十页哦1、煮沸 煮沸151520min20min可杀死细菌的繁殖体、真菌和病毒，但杀不死芽孢。此法常用于刀剪、注射器、针头及橡胶制品的消毒。第十六页，讲稿共八十页哦 煮沸消毒盒煮沸消毒盒 煮沸消毒

4、器煮沸消毒器第十七页，讲稿共八十页哦2、高压蒸汽灭菌法 即利用高压蒸汽灭菌器（高压锅）灭菌，是应用最广、最有效的灭菌法。用15磅的压力（温度为121.3）维持1520min，可杀死一切微生物及芽孢。一切耐高温的物品均可用此法灭菌。第十八页，讲稿共八十页哦 高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器第十九页，讲稿共八十页哦第二十页，讲稿共八十页哦3、巴氏消毒法 用于液态食品的一种消毒法，常用于牛奶、啤酒、果酒、葡萄酒和一些饮料。特点:利用尽可能的低温和短的时间，最大限度的杀死食品中的病原菌和一般 杂菌，同时最大限度地保持食品的营养成分和风味不发生改变第二十一页，讲稿共八十页哦巴氏消毒的三种方法：低温维持法62

5、65维持30min 高温瞬时法7172保持15s 超高温法132保持12s第二十二页，讲稿共八十页哦 巴氏消毒装置巴氏消毒装置第二十三页，讲稿共八十页哦二、辐射灭菌法 第二十四页，讲稿共八十页哦（一）非电离辐射 包括：紫外线日光可见光红外线微波第二十五页，讲稿共八十页哦1、紫外线 波长200300nm的紫外线具有杀菌作用，其中253265nm段杀菌力最强。杀菌机理：主要破坏菌体细胞DNA的构型，使DNA分子中间形成胸腺嘧啶二聚体，干扰DNA的复制，造成菌体的死亡，此外，紫外线也能破坏菌体蛋白和酶。第二十六页，讲稿共八十页哦缺点：穿透力差，普通玻璃、尘埃等均可阻挡紫外线，所以，紫外线只适合空间及

6、物体表面的消毒，如无菌室、手术室等空间、墙壁及实验台表面的消毒。第二十七页，讲稿共八十页哦（二）电离辐射 包括放射性同位素的射线（、射线）、X射线等。小计量可诱发微生物变易，大计量具有抑菌及杀菌作用。在实际工作中主要是用X、射线，用于消毒、食品保鲜和微生物育种等方面。第二十八页，讲稿共八十页哦三、超声波第二十九页，讲稿共八十页哦杀菌机理超声波几乎对所有的微生物都有杀灭作用，主要是以机械作用和氧化作用破坏菌体细胞壁、细胞膜，使内容物逸出。用途l可用超声波裂解菌体细胞，研究菌体的构造、化学组成、核酸、抗原、酶等。也可用超声波从组织中提取病毒。第三十页，讲稿共八十页哦四、滤过除菌第三十一页，讲稿共八

7、十页哦滤过除菌是通过机械阻留作用除去液体及气体中的细菌，所用装置叫滤器。滤器上含有很多微细小孔，可使液体及气体通过，细菌等大于孔径的物体不能通过，借以获得无菌液体及气体。第三十二页，讲稿共八十页哦用途主要用于不耐高温的物体，如血清、毒素、抗毒素、酶、抗生素、维生素、氨基酸及特殊培养基等的除菌。滤器不能除去病毒、霉形体和L型细菌。第三十三页，讲稿共八十页哦滤器的种类与型号滤器的种类很多，每种又有许多不同的型号，型号的区别主要是滤膜孔径大小不同。除菌滤器孔径通常为0.20.22m。实验室常用滤器耐酸玻璃滤器蔡氏滤器微孔滤膜第三十四页，讲稿共八十页哦 玻璃耐酸滤器玻璃耐酸滤器第三十五页，讲稿共八十页

8、哦五、低温抑菌法 第三十六页，讲稿共八十页哦低温抑菌的机理大多数微生物对低温抵抗力很强，在低温条件下微生物的代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但仍可长时间保持生命。低温在微生物学工作中的用途主要用于保存微生物，如：04保存细菌-20以下保存病毒 第三十七页，讲稿共八十页哦低温保存微生物注意事项有少数细菌和病毒对低温特别敏感，如淋球菌、巴氏杆菌在4保存比室温保存死亡更快，疱疹病毒在-20保存比4死亡更快。反复冻融容易引起微生物死亡。冷冻保存细菌时，温度必须迅速降低，以免菌体内的水分形成结晶冰而损伤细胞膜。第三十八页，讲稿共八十页哦冷冻真空干燥法（冻干法）保存微生物及生物制品最好的方法方法：先

9、将要保存的菌种加上保护剂（如甘油、蔗糖、脱脂乳、血清、二甲基亚枫等），装到安瓿中，在冻干机中迅速冷冻、抽真空、干燥、封口。这样保存的菌种经多年不失去活性。第三十九页，讲稿共八十页哦第二节化学消毒灭菌法第四十页，讲稿共八十页哦一、化学消毒剂及防腐剂 消毒剂用于杀灭病原微生物的化学药物。防腐剂也称抑菌剂，是用于抑制微生物生长繁殖的化学药物。二者统称消毒防腐剂 第四十一页，讲稿共八十页哦化学消毒防腐剂的种类：根据对菌体的作用分为：使菌体蛋白变性或凝固的，如酚类（高浓度）、醇类、重金属盐类（高浓度）、酸碱类、醛类损伤胞浆膜的，如酚类（低浓度）、表面活性剂、醇类等脂溶剂干扰细菌酶系统和代谢的，如某些氧化

10、剂、重金属盐类（低浓度）改变核酸功能的，如染料、烷化剂等 第四十二页，讲稿共八十页哦使用方法化学消毒剂与防腐剂不仅可杀死病原菌，同时对动物的组织细胞也有损害作用，所以它只能外用，用于体表、环境及物体的消毒。浸泡擦拭气体熏蒸喷雾及喷洒等第四十三页，讲稿共八十页哦选药原则在实际工作中应根据用途与消毒剂的特点来选择药品、使用方法和浓度。最理想的消毒剂应是杀菌力强、价格低、无腐蚀性、能长期保存、对动物无毒性或毒性较小、无残留或对环境无污染的化学药品。第四十四页，讲稿共八十页哦二、影响消毒剂作用的因素 1、消毒剂的性质2、消毒剂的浓度3、作用时间与其他环境条件4、微生物的种类第四十五页，讲稿共八十页哦三

11、、化学治疗剂 用于消除动物体内病原微生物或其他寄生物的化学药品称化学治疗剂（chemo-therapeutic agent）。如磺胺类药物、呋喃类药物和其他抗代谢药物。这些药物的作用有较强的选择性，主要作用于病原微生物，而对机体毒副作用较小，主要用于临床治疗。第四十六页，讲稿共八十页哦第三节生物因素对微生物的作用第四十七页，讲稿共八十页哦一、抗生素、细菌素和植物杀菌素的杀菌作用 第四十八页，讲稿共八十页哦（一）抗生素（antibiotics）是某些微生物在代谢过程中产生的一类能杀死或抑制另一些微生物的化学物质。其主要来源于放线菌和霉菌，细菌产生的仅有多粘菌素、杆菌肽等少数几种。目前发现的抗生素

12、有2500多种，但临床常用的仅几十种。分为广谱抗生素和窄谱抗生素。抗生素可用于治疗细菌感染和抑菌。第四十九页，讲稿共八十页哦（二）细菌素（bacteriocin）是某些细菌产生的一类具有杀菌作用的蛋白质，只能作用于同种细菌不同的菌株或与它有亲缘关系的其他细菌。例如：大肠菌素 作用大肠杆菌其他菌株和与它有亲缘关系的志贺氏菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌等。细菌素目前只用于细菌的分型和流行病学调查，对治疗疾病意义不大。第五十页，讲稿共八十页哦（三）植物杀菌素（phytocide）是某些植物中存在的杀菌物质，如黄连、板蓝根等都含有杀菌物质。第五十一页，讲稿共八十页哦二、噬菌体 第五十二页，讲稿共八十页哦噬菌

13、体（bacteriophage,phage）是寄生于细菌、放线菌、霉形体、螺旋体、真菌等其他微生物的一类病毒。在自然界分布及广，凡是有上述微生物的地方，都有相应种类的噬菌体。第五十三页，讲稿共八十页哦1、噬菌体的形态结构 噬菌体有四种外形，即蝌蚪形、球形、丝状和柠檬形。典型的噬菌体呈蝌蚪形，由头部和尾部组成。头部由核酸和蛋白质衣壳构成，呈20面体对称；尾部主要含蛋白质，呈螺旋形，分尾领、尾鞘、尾髓、尾板、尾刺和尾丝几部分，尾部有的能收缩，有的不能收缩。第五十四页，讲稿共八十页哦第五十五页，讲稿共八十页哦2、噬菌体的增殖 噬菌体只能在活的敏感菌细胞内增殖，并将菌体细胞裂解。其寄生生活有严格的菌种

14、及菌型的特异性，即一种噬菌体只能寄生及裂解一种和它相应的细菌，或仅作用于该种细菌的某一型。噬菌体的增殖分4个阶段 吸附侵入生物合成成熟和释放第五十六页，讲稿共八十页哦吸 附第五十七页，讲稿共八十页哦侵 入第五十八页，讲稿共八十页哦生物合成（复制和成熟）第五十九页，讲稿共八十页哦释 放第六十页，讲稿共八十页哦噬菌体生长迹象的观察：噬菌体可使混浊的细菌液体培养物变清朗，在固体培养基上可形成噬菌斑。一个噬菌斑由一个噬菌体繁殖而成，不同噬菌体产生的噬菌斑大小、形态、边缘和透明度均不同，所以，噬菌斑可用于噬菌体的鉴定、纯种分离和计数。第六十一页，讲稿共八十页哦3、噬菌体与寄主的关系 有些噬菌体在菌体细胞

15、增殖后，迅速导致菌体裂解，此种噬菌体称毒性噬菌体或烈性噬菌体。第六十二页，讲稿共八十页哦烈性噬菌体的溶解周期烈性噬菌体的溶解周期第六十三页，讲稿共八十页哦有些噬菌体感染细菌后，并不马上裂解细菌，而是将其基因整合到细菌的基因组中，与细菌的DNA一道复制，并随细菌的分裂而传给后代，此种噬菌体叫温和噬菌体，整合到细菌DNA上的噬菌体基因叫前噬菌体，带有前噬菌体的细菌叫溶原性细菌。温和噬菌体可能会在某个世代自发地从菌体DNA上脱离并复制，引起菌体裂解而释放出噬菌体。第六十四页，讲稿共八十页哦温和噬菌体的增殖温和噬菌体的增殖第六十五页，讲稿共八十页哦噬菌体的应用 由于噬菌体感染具有菌种或菌型的特异性，故

16、可用噬菌体进行细菌的鉴定和分型、检测未知细菌、进行流行病学调查。此外，噬菌体也是分子生物学及基因工程研究的工具。第六十六页，讲稿共八十页哦第四节微生物实验室的生物安全第六十七页，讲稿共八十页哦一、生物安全的概念和一般要求第六十八页，讲稿共八十页哦（一）生物安全 是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康可能产生的潜在的有害影响。而兽医微生物实验室的生物安全是指在转移、检查和处理病料、污染材料等过程中，避免污染环境及对人员造成危害。第六十九页，讲稿共八十页哦 微生物实验室的生物安全有三层含义是指防止病原微生物等及其他有害生物或物质传入实验室（防止实验室污染）是指防止病原微生物等传出实验室（防

17、止散播传染）是指实验室人员的自身安全防护（防止自身感染）第七十页，讲稿共八十页哦（二）实验室生物安全的一般要求 安全要点主要包括：1、生物安全的潜在危险在于处理临床样本，样本的气溶胶往往最容易污染实验室并造成人员感染。所有送检样本都应视为有传染性并做相应处理。不允许用嘴吸取液体，应采用相应器械第七十一页，讲稿共八十页哦2、涉及有害物质的实验室人员应具备防范生物危害的知识，人员的数量及流动应控制。实验室人员必须穿戴全套防护服，甚至面罩、防护眼镜等。这些用品用后应做灭菌处理。要有良好的卫生习惯，尤其要注意洗手。实验室内不允许吃、喝、涂抹化妆品及装隐形眼镜。实验室工作人员必须接种有关疫苗。第七十二页

18、，讲稿共八十页哦3、对所有污染材料及水，包括样本、试验器材、动物等必须规定明确的消毒程序，并予实施。推荐使用含氯5.25%的消毒剂或其他消毒剂。4、最主要的防护并非设施，而是工作人员本身，造成事故的最常见原因主要是由于工作人员缺乏有关知识、训练和粗心大意。第七十三页，讲稿共八十页哦5、只有经培训的人员才能处理动物，操作时动物应予麻醉或镇静，避免伤害人及动物。6、实验室中处理的微生物提取物，特别是DNA，亦可造成污染，必须注意。第七十四页，讲稿共八十页哦二、兽医微生物实验室 的生物安全分类第七十五页，讲稿共八十页哦目前国际公认的微生物实验室分为生物安全（biosafety level,BSL）1

19、至4级。即：BSL-1实验室 俗称 P1实验室BSL-4实验室 P2实验室BSL-4实验室 P3实验室BSL-4实验室 P4实验室 其中BSL-1最低，BSL-4最高。第七十六页，讲稿共八十页哦三、动物病原微生物的分类 第七十七页，讲稿共八十页哦（一）世界动物卫生组织的分类根据病原微生物的传染性、感染人和（或）动物的危害程度，世界动物卫生组织（OIE）将动物病原分为14类。即：1类动物病原 2类动物病原 3类动物病原 4类动物病原 其中1类病原微生物危害最小，4类最大。第七十八页，讲稿共八十页哦（二）我国农业部的分类 我国农业部2005年颁布了动物病原微生物分类名录，其中一类病原微生物危害最大，依此类推，四类最小。第七十九页，讲稿共八十页哦感感谢谢大大家家观观看看第八十页，讲稿共八十页哦