第九章化学发光免疫技术课件.ppt

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1、第九章化学发光免疫技术第1页，此课件共43页哦教学目的要求教学目的要求：1、掌握化学发光、化学发光酶免疫分析及、掌握化学发光、化学发光酶免疫分析及化学发光的临床应用化学发光的临床应用2、熟练掌握电化学发光免疫分析、熟练掌握电化学发光免疫分析3、了解化学发光效率、化学发光剂、发光、了解化学发光效率、化学发光剂、发光剂的标记技术（自学）、直接化学发光免剂的标记技术（自学）、直接化学发光免疫分析疫分析第2页，此课件共43页哦发光免疫分析发光免疫分析:是将是将发光分析发光分析和和免免疫反应疫反应相结合而建相结合而建立起来的一种新的立起来的一种新的检测微量抗原或抗检测微量抗原或抗体的新型标记免疫体的新型

2、标记免疫分析技术。分析技术。全自动化学发光分析仪全自动化学发光分析仪第3页，此课件共43页哦第一节概述第一节概述一、发光的分类一、发光的分类是指一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光。根据形成激发态分子的能量来源不同，可将发光分为三种：光照发光、生物发光和化学发光。第4页，此课件共43页哦（一）光照发光（一）光照发光是指发光剂经是指发光剂经短波长入射光照短波长入射光照后进后进入激发态，回至基态时发出较长入激发态，回至基态时发出较长的可见光。的可见光。第5页，此课件共43页哦（二）生物发光（二）生物发光典型例子为荧火虫发光。典型例子为荧火虫发光。荧火虫发光素荧火虫

3、发光素 光光ATP、O2、M2+荧光素酶第6页，此课件共43页哦（三）化学发光（三）化学发光是指常温下经化学反应所产生的是指常温下经化学反应所产生的发射光。发射光。化学发光是一个多步骤的过程。化学发光是一个多步骤的过程。第7页，此课件共43页哦二、化学发光产生的条件二、化学发光产生的条件1、反应必须提供足够的能量（170-300KJ/mol）2、这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发，并且有足够的光量子产生。第8页，此课件共43页哦直接化学发光：间接化学发光：第9页，此课件共43页哦三、化学发光效率三、化学发光效率第10页，此课件共43页哦四、化学发光免疫技术的分类四、化学发光免疫技

4、术的分类1、直接化学发光免疫分析2、化学发光酶免疫分析3、电化学发光免疫分析4、鲁米诺氧途径免疫分析常用化学发光剂：常用化学发光剂：（1）吖啶酯类）吖啶酯类 直接标记发光剂直接标记发光剂（2）三联吡啶钌）三联吡啶钌 电化学发光剂电化学发光剂（3）酶促反应发光剂：鲁米诺）酶促反应发光剂：鲁米诺 AMPPD(金刚烷金刚烷)第11页，此课件共43页哦（一）固相分离（一）固相分离板式或管式板式或管式（二）过滤分离（二）过滤分离过滤杯（膜）过滤杯（膜）（三）珠式分离（三）珠式分离与丙烯酰胺小珠子与丙烯酰胺小珠子（四）顺磁珠性颗粒分离（四）顺磁珠性颗粒分离顺磁性颗粒顺磁性颗粒五、化学发光免疫的非均相分离方

5、式五、化学发光免疫的非均相分离方式第12页，此课件共43页哦一、化学发光剂一、化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，以发射光子的形式释放能量的化合物，称为称为化学发光剂或发光底物。化学发光剂或发光底物。第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术第13页，此课件共43页哦第14页，此课件共43页哦第15页，此课件共43页哦第16页，此课件共43页哦第17页，此课件共43页哦第18页，此课件共43页哦第19页，此课件共43页哦鲁米诺鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙

6、的特性，它被氧化时能发出蓝光。化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼。刑侦学应用：刑侦学应用：在检验血痕时，鲁米诺与血红蛋白发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。第20页，此课件共43页哦第21页，此课件共43页哦第22页，此课件共43页哦二、发光剂的标记技术（自学）第23页，此课件共43页哦第三节第三节 化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析一、直接化学发光免疫分析第24页，此课件共43页哦第25页，此课件共43页哦二、化学发光酶免疫分析二、化学发光酶免疫分析发光酶免疫分析发光酶免疫分析(LEIA):是用参与催化某一发是用参与催

7、化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应结束后，加入底物，通过酶催化底物发光反应，发出的光在特定仪器上进行测定。应，发出的光在特定仪器上进行测定。第26页，此课件共43页哦HRP标记的标记的LEIA（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析（一）辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析第27页，此课件共43页哦（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析（二）碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析ALP标记的标记的LEIA第28页，此课件共43页哦第29页，此课件共43页哦三、电化学发光免疫分析三、电化学发光免疫分析电化学发

8、光免疫分析（电化学发光免疫分析（ECLIA）：）：是电化学发光和免疫测定相结合的产是电化学发光和免疫测定相结合的产物。物。第30页，此课件共43页哦第31页，此课件共43页哦第四节化学发光免疫测定的临第四节化学发光免疫测定的临床应用床应用化学发光免疫技术因标记物为非放化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质，且易于实现自动化，具射性物质，且易于实现自动化，具有快速、简便、灵敏、特异等特点，有快速、简便、灵敏、特异等特点，已广泛应用于各种激素、肿瘤标志已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物、药物及其化微量生物活性物质物、药物及其化微量生物活性物质测定。测定。第32页，此课件共43页哦临床应用特点：1、灵

9、敏度高，特异性强、灵敏度高，特异性强可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测，保证了各种激素、病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定。第33页，此课件共43页哦2、线性范围宽、线性范围宽可满足103-106数量级的绝对定量检测需要。保证了临床应用中的简便性，避免了试验中的稀释误差。第34页，此课件共43页哦3、标记物稳定，试剂有效期长、标记物稳定，试剂有效期长有效期可长达一年第35页，此课件共43页哦4、自动化程度高，检测菜单齐全、自动化程度高，检测菜单齐全第36页，此课件共43页哦 Thyroid 甲状腺T3 三碘甲状腺原氨酸T4 四碘甲状腺原氨酸FT3 游离三碘甲状腺原氨酸FT4 游离四碘甲

10、状腺原氨酸RT3 反三碘甲状腺原氨酸TRAB 促甲状腺受体抗体TGA 甲状腺球蛋白抗体TMA 甲状腺微粒体抗体TG 甲状腺球蛋白TSH(3rd Gen)促甲状腺激素(第三代超敏)第37页，此课件共43页哦 Fertility 生育 FSH 促卵泡激素 LH 黄体生成素 PRL 催乳素 E2，Estradiol 雌二醇 PRG 孕酮 TEST 睾酮 F-TEST 游离睾酮 HCG/-HCG 绒毛膜促性腺激素 B-HCG 绒毛膜促性腺激素B亚单位 FE3 游离雌三醇 PAPP-A 妊娠相关血浆蛋白 DHEA-S 脱氢表雄酮第38页，此课件共43页哦 Cardiac 心血管及心肌标志物类Tropon

11、inI 肌钙蛋白IMyoglobinI 肌红蛋白CK-MB 肌酸激酶同工酶A I 血管紧张素IA II 血管紧张素IIAldosterone 醛固酮脑自然肽N端前体蛋白第39页，此课件共43页哦Tumor Makers 肿瘤标志物AFP 甲胎蛋白CEA 癌胚抗原Ferritin 铁蛋白 TPA 组织多肽抗原PAP 前列腺酸性磷酸酶PSA 前列腺特异性抗原F-PSA 游离前列腺特异性抗原CA125 糖类抗原125第40页，此课件共43页哦 Prenatal Screening 产前筛查AFP 甲胎蛋白Free-B-HCG 游离绒毛膜促性腺激素B亚单位PAPP-A 妊娠相关蛋白第41页，此课件共43页哦 Kidney Function肾功能2-MG 2微球蛋白H-ALB 人尿微量白蛋白第42页，此课件共43页哦 Glycometabolism 糖代谢C-Peptide C-肽Insulin 胰岛素Pro Insulin 胰岛素原IAA 抗人胰岛素抗体GAD 65 谷氨酸脱羧酶抗体IGF-1 胰岛素样生长因子-I第43页，此课件共43页哦