实验四细菌质粒接合转移.ppt

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1、关于实验四细菌质粒的接合转移第一张，PPT共十五页，创作于2022年6月一：目的要求一：目的要求了解在自然条件下微生物遗传信息传递的了解在自然条件下微生物遗传信息传递的方式；方式；掌握细菌质粒转移的原理和流程。掌握细菌质粒转移的原理和流程。第二张，PPT共十五页，创作于2022年6月二：基本原理二：基本原理在质粒转移过程中，供体菌与受体菌细在质粒转移过程中，供体菌与受体菌细胞通过结合作用紧密接触，质粒从供体胞通过结合作用紧密接触，质粒从供体细胞向受体转移，同时进行质粒复制，细胞向受体转移，同时进行质粒复制，这就是结合转移的过程。按能否自主转这就是结合转移的过程。按能否自主转移，将天然存在的质粒

2、分为两大类。移，将天然存在的质粒分为两大类。第三张，PPT共十五页，创作于2022年6月第四张，PPT共十五页，创作于2022年6月1转移型质粒转移型质粒：多为低拷贝的大质粒，含有完整的转：多为低拷贝的大质粒，含有完整的转移操纵子基因（移操纵子基因（tra）和转移起始位点。能在同种或亲缘关）和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如：系近的菌体细胞间进行转移。例如：大肠杆菌：大肠杆菌：F因子、因子、R1、R100、R6K、RP4 天蓝色链霉菌：致育性因子天蓝色链霉菌：致育性因子pSCP1、pSCP22非转移型质粒非转移型质粒：多为高拷贝的小质粒，如大肠杆菌的：多为高拷贝的小

3、质粒，如大肠杆菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少转移基因（等。由于缺少转移基因（tra），不能），不能自主转移，但由于含有与自主转移，但由于含有与F质粒类似的质粒类似的bom（或（或nic）位）位点或诱动基因点或诱动基因mob（mobilization），因而能被带有），因而能被带有tra基因的转移性质粒诱动而发生转移基因的转移性质粒诱动而发生转移。第五张，PPT共十五页，创作于2022年6月第六张，PPT共十五页，创作于2022年6月第七张，PPT共十五页，创作于2022年6月转移子的筛选转移子的筛选筛选培养基为：筛选培养基为：基本培养基基本培养基+抗生素抗生素；供体和辅助大肠杆菌均

4、营养缺陷型，不能供体和辅助大肠杆菌均营养缺陷型，不能在基本培养基上生长；在基本培养基上生长；未转化成功的受体菌不能在有抗生素的平未转化成功的受体菌不能在有抗生素的平板上生长。板上生长。第八张，PPT共十五页，创作于2022年6月三：实验菌株三：实验菌株供体菌：供体菌：E.coli DH5(pTR102)(TcR)，含有，含有 mob基因基因；受体菌受体菌:紫云英根瘤菌紫云英根瘤菌(TcS)；辅助菌辅助菌:E.coli MM294(pPK2073)（SpeR），），含有含有tra基因。基因。第九张，PPT共十五页，创作于2022年6月四：实验内容四：实验内容 准备准备将受体、供体、辅助菌分别培养

5、到对数期：将受体、供体、辅助菌分别培养到对数期：供体菌：供体菌：E.coli DH5(pTR102)(TcR)，LB+Tc 20g/ml，37震荡培养震荡培养1夜；夜；受体菌受体菌:Sinorhizobium fredii(TcS)，TY,28震荡培养震荡培养2天；天；辅助菌辅助菌:E.coli MM294(pPK2073)（SpeR），），LB+Spe 50 g/ml 37震荡培养震荡培养1夜夜第十张，PPT共十五页，创作于2022年6月用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各 0.4ml，吸受，吸受体菌体菌0.6ml，都加入同一，都加入同一eppdorf管内（每

6、个同学做管内（每个同学做1管），放入离心机内，管），放入离心机内，10000转转/min 离心离心1分钟。分钟。倒上清，向沉淀加倒上清，向沉淀加 1ml 的的 TY液体，用液体，用 tip上下抽吸，上下抽吸，洗涤菌体，再洗涤菌体，再10000转转/min离心离心1分钟，倒上清，留分钟，倒上清，留100l左右用于悬浮菌体。左右用于悬浮菌体。倒倒TY平板，然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好平板，然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的的TY平板上（平板上（每每2个同学个同学1片，片，2-3片片/平板平板）。用）。用200l的的 tip 抽吸抽吸eppdorf管内沉淀的菌体，打散成浓管内沉淀的菌体，打散

7、成浓菌液，将之加到滤纸片中央（切勿倾斜平板，以免菌液，将之加到滤纸片中央（切勿倾斜平板，以免菌液流出滤纸片以外）菌液流出滤纸片以外）,吹干。吹干。28培养培养2天。天。操作步骤（第一天）操作步骤（第一天）第十一张，PPT共十五页，创作于2022年6月倒倒SM平板平板将基本培养基（将基本培养基（SM）溶化，加千分之一的）溶化，加千分之一的维生素混合液，然后加相应量的四环素维生素混合液，然后加相应量的四环素（15U/ml），每），每2人人1皿。皿。另准备另准备1瓶基本培养基，不加抗生素，用于瓶基本培养基，不加抗生素，用于对照。对照。将倒好的平板用报纸包好后放入将倒好的平板用报纸包好后放入4冰箱，冰

8、箱，备用。（备用。（注：四环素在强光下易分解注：四环素在强光下易分解）第十二张，PPT共十五页，创作于2022年6月向灭菌青霉素瓶中加向灭菌青霉素瓶中加3ml无菌水，将已培养无菌水，将已培养的的TY平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中，平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中，在震荡混匀器上洗菌体，充分打散在震荡混匀器上洗菌体，充分打散。向向1ml的的ep管加管加 0.9mL无菌水，取无菌水，取0.1ml菌菌液，混匀。液，混匀。吸取吸取 200L涂皿。涂皿。少数同学另取稀释液，涂少数同学另取稀释液，涂1板不加板不加Tc的的SM做对照做对照。平板放平板放28 培养培养4-6天后看结果。天后看结果。操作步骤（第三天）操作步骤（第三天）第十三张，PPT共十五页，创作于2022年6月五：实验报告内容五：实验报告内容转移频率转移频率=SM+Tc平板的单菌落数平板的单菌落数/纯纯SM平板的单平板的单菌落数菌落数 SM+Tc平板的单菌落数为：平板的单菌落数为：纯纯SM平板的单菌落数为：平板的单菌落数为：第十四张，PPT共十五页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看第十五张，PPT共十五页，创作于2022年6月