餐饮具的微生物检验技术精选PPT讲稿.ppt

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1、关于餐饮具的微生物关于餐饮具的微生物检验技术检验技术第一页，讲稿共五十页哦 饮食业食饮具消毒是控制肠道传染病发生和流行的重要环节之一，现行有效的国家标准为GB 14934-94食（饮）具消毒卫生标准。该标准适用于宾馆、饭店、餐厅、食堂等饮食企业的食（饮）具，也适用于个体摊点的食（饮）具。第二页，讲稿共五十页哦一、餐饮具消毒指标(感官指标、理化指标、细菌指标)1 感官指标1.1物理消毒（包括蒸汽、煮沸等热消毒）：食（饮）具必须表面光洁、无油渍、无水渍、无异味。1.2化学消毒：食（饮）具表面必须无泡沫、无洗消剂的味道，无不溶性附着物。第三页，讲稿共五十页哦2理化指标采用化学消毒的食（饮）具，必须用

2、洁净水清洗，消除残留的药物。用含氯洗消剂消毒的食（饮）具表面残留量，应符合表1的要求。表1理化指标项目指标游离性余氯，mg/L0.3烷基（苯）磺酸钠，mg/100cm20.1第四页，讲稿共五十页哦3 细菌指标 采用物理或化学消毒的食（饮）具均必须达到表2的要求。（发酵法与纸片法任何一法的检验结果均可作为判定依据。）表2 细菌指标项目指标大肠菌群发酵法,个/100cm23纸片法,个/50cm2不得检出致病菌不得检出第五页，讲稿共五十页哦二采样与检验方法1发酵法检测大肠菌群1.1采样方法食（饮）具抽检碗、盘、口杯，将2.0cm2.5cm（5cm2）灭菌滤纸片紧贴内面各10张（总面积50 cm2、）

3、、碟、匙、酒杯以每5件为1份，每件内面紧贴灭菌滤纸片各2张（总面积50 cm2/份）,经1min，按序取置入50 mL灭菌盐水试管中，充分振荡后，制成原液。筷：取每双的下段12 cm处约50 cm2（l2cm2cm2cm），置入50 mL 灭菌盐水试管中，充分振荡20次，制成原液。第六页，讲稿共五十页哦第七页，讲稿共五十页哦1.2操作步骤1.2.1 初发酵试验 选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL，361 培养24 h2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培

4、养至48 h2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。第八页，讲稿共五十页哦1.2.2 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 1培养48 h2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。第九页，讲稿共五十页哦1.2.3 大肠菌群最可能数（MPN）的报告 按1.2.2 确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见GB4789.3-2010附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。第十页，讲稿共五十页哦1.2.4 MPN表(GB4789.3-2010附录B)表B 大肠菌群最可能数.doc第十一页，讲稿共

5、五十页哦2纸片法检测大肠菌群食（饮）具消毒采用专用的大肠菌群快速检验纸片。2.1采样方法随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业,每次采样610件,每件贴纸片两张,每张纸片面积25cm2（5cm5cm）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内。筷子以5只为一件样品，用毛细吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹拭纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。第十二页，讲稿共五十页哦2.2检验方法将已采样的纸片置37培养1618 h，若纸片保持紫蓝色不变为大肠菌群阴性，纸片变黄并在黄

6、色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。第十三页，讲稿共五十页哦3 致病菌检验 GB 4789.4-2010 沙门氏菌检验.mht GB 4789.10-2010金黄色葡萄球菌检验.mht GB/T 4789.5-2003 志贺氏菌检验.mht GB/T 4789.11-2003溶血性链球菌检验.mht 3.1 沙门氏菌检验第十四页，讲稿共五十页哦沙 门 氏 菌 属 简 介 沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌

7、。本菌属种类繁多，抗的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现原结构复杂，现已发现原结构复杂，现已发现原结构复杂，现已发现3000300030003000多个血清型，我国已发现血清多个血清型，我国已发现血清多个血清型，我国已发现血清多个血清型，我国已发现血清型近型近型近型近200200200200个。个。个。个。形态特征：形态特征：革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏阴阴阴阴性性性性，大大大大小小小小为为为为130.40.9m130.40.9m130.40.9m130.40

8、.9m的的的的两两两两端端端端钝钝钝钝圆圆圆圆的的的的短短短短杆杆杆杆菌菌菌菌，无无无无芽芽芽芽孢孢孢孢，一一一一般般般般无无无无荚荚荚荚膜膜膜膜，除除除除鸡鸡鸡鸡沙沙沙沙门门门门氏氏氏氏菌菌菌菌和和和和雏雏雏雏沙沙沙沙门门门门氏氏氏氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。第十五页，讲稿共五十页哦伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌 沙沙门门氏氏菌菌典典型型群群落落第十六页，讲稿共五十页哦检检 样样25g(ml)25g(ml)样品样品+225mlBPW+225mlBPW1ml+TTB10ml1ml+SC10ml361

9、 361，8h-18h8h-18hBSXLD(或或HE、显色培养基、显色培养基)挑取可疑菌落挑取可疑菌落 42 1 42 1，18h24h18h24h 36 1 36 1，18h24h18h24h36 1 36 1，40h48h40h48h36 1 36 1，18h24h18h24h沙门氏菌检验程序第十七页，讲稿共五十页哦生化鉴定生化鉴定试剂盒试剂盒或全自动或全自动微生物微生物生化鉴定生化鉴定系统系统+A1A1A2A2A3A3反应反应结果结果与左侧与左侧描述描述不符不符 甘露醇甘露醇+、山梨醇、山梨醇+ONPG-ONPG-沙门氏菌，血清学试验沙门氏菌，血清学试验 非沙门氏菌非沙门氏菌 报报 告

10、告TSI，赖氨酸，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（，靛基质，尿素（pH7.2），），KCN第十八页，讲稿共五十页哦3.2.2 3.2.2 操作步骤操作步骤(1)(1)前增菌前增菌无菌操作将样品转至无菌操作将样品转至 500 mL 500 mL 锥形瓶中，于锥形瓶中，于 36 36 1 1 培养培养 8 h8 h 18h18h。(2)(2)增菌增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL1 mL，转种于，转种于 10 mL TTB 10 mL TTB 内，内，于于 42 42 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h。同时，另取。同时，另取 1 mL1 m

11、L，转种于，转种于 10 mL SC 10 mL SC 内，内，于于 36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h。(3)(3)分离培养分离培养分别用接种环取增菌液分别用接种环取增菌液 1 1 环，划线接种于一个环，划线接种于一个 BS BS 琼脂平板和一个琼脂平板和一个 XLD XLD 琼脂平板（或琼脂平板（或 HE HE 琼脂琼脂 平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于 36 36 1 1 分别培养分别培养 18 h18 h24 h 24 h（XLD XLD 琼脂平板、琼脂平板、HE HE 琼脂琼脂 平板、沙门平板、沙门氏菌属显色培养基平

12、板）氏菌属显色培养基平板）或或 40 h40 h48 h 48 h（BS BS 琼脂平板），观察各个琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表各个平板上的菌落特征见表 1 1。第十九页，讲稿共五十页哦表1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS 琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE 琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD 琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈

13、现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。第二十页，讲稿共五十页哦(4)(4)生化试验生化试验 接种三糖铁琼脂接种三糖铁琼脂 自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取 2 2 个以上典型或可个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于验培养基和营养琼脂平板，于 36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h，必要时可延长至，必要时可

14、延长至 48 h48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属羧酶试验培养基内，沙门氏菌属 的反应结果见表的反应结果见表 2 2。第二十一页，讲稿共五十页哦表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA（）（）可疑沙门氏菌属KA（）（）可疑沙门氏菌属AA（）（）可疑沙门氏菌属AA/非沙门氏菌KK/非沙门氏菌注：K：产碱，A：产酸；：阳性，：阴性；（）：多数阳性，少数阴性；/：阳性或阴性第二十二页，讲稿共五十页哦其他生化试验:接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种

15、蛋白胨水（供做靛基质试 验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑 取可疑菌落接种。于 36 1 培养 18 h24 h，必要时可延长至 48 h，按表 3 判定结果。将已挑菌 落的平板储存于 2 5 或室温至少保留 24 h，以备必要时复查。表 3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号 硫化氢（H2S）靛基质 pH7.2尿素 氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶 A1 A2 A3 /注：阳性；阴性；/阳性或阴性。注：阳性；阴性；/阳性或阴性。第二十三页，讲稿共五十页哦结果判定:反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中

16、有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）沙门氏菌或（要求符合本群生化特性）沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：表示阳性；表示阴性。注：表示阳性；表示阴性第二十四页，讲稿共五十页哦反应序号反应序号 A2A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。定结果进行判定。反应序号反应序号 A3A3：补做：补做

17、 ONPGONPG。ONPG ONPG 阴性为沙门氏菌，同阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒甲型副伤寒 沙门氏菌为赖氨酸脱羧沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。酶阴性。第二十五页，讲稿共五十页哦a）抗原的准备抗原的准备 一般采用一般采用 1.21.5琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2 3）培养培养基上再检查；如果是由于基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取凝集反应时，可挑取菌苔于菌苔于 1 mL

18、生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在抗原发育不良时，将菌株接种在0.550.65半固体琼脂平板的中央，半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.30.4半固体琼脂的小玻管半固体琼脂的小玻管1次次2 次次,自远端取菌培养后再检查。自远端取菌培养后再检查。(5)(5)血清学鉴定血清学鉴定 返回返回第二十六页，讲稿共五十页哦 b b）多价菌体抗原（）多价菌体抗原（）多价菌体抗原（）多价菌体抗原（OO）鉴定）鉴定

19、）鉴定）鉴定 在玻片上划出在玻片上划出在玻片上划出在玻片上划出2 2 个约个约个约个约 1 cm2 cm 1 cm2 cm 的区域，挑取的区域，挑取的区域，挑取的区域，挑取1 1 环待测菌，各放环待测菌，各放环待测菌，各放环待测菌，各放 1/2 1/2 环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加 1 1 滴滴滴滴多价菌体（多价菌体（多价菌体（多价菌体（OO）抗血清，在另一区域下部加入）抗血清，在另一区域下部加入）抗血清，在另一区域下部加入）抗血清，在另一

20、区域下部加入1 1 滴生理盐水，作为对滴生理盐水，作为对滴生理盐水，作为对滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合玻片倾斜摇动混合玻片倾斜摇动混合玻片倾斜摇动混合 1 min1 min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度，并对着黑暗背景进行观察，任何程度，并对着黑暗背景进行观察，任何程度，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。的凝集现象皆为阳性反应

21、。的凝集现象皆为阳性反应。的凝集现象皆为阳性反应。c c）多价鞭毛抗原（）多价鞭毛抗原（）多价鞭毛抗原（）多价鞭毛抗原（HH）鉴定）鉴定）鉴定）鉴定 同同同同b b）。）。）。）。返回返回第二十七页，讲稿共五十页哦3.2 金黄色葡萄球菌检验3.2.1 检验程序第二十八页，讲稿共五十页哦金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1。第二十九页，讲稿共五十页哦3.2.2 3.2.2 增菌和分离培养增菌和分离培养(1)(1)增菌增菌:将上述样品匀液于将上述样品匀液于 36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h。金黄色。金黄色葡萄球菌在葡萄球菌在 7.5%7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生氯化钠肉汤

22、中呈混浊生 长。长。(2)(2)分离培养分离培养:将上述培养物，分别划线接种到将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker Baird-Parker 平板和平板和血平板，血平板血平板，血平板 36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h。Baird-Parker Baird-Parker 平板平板 36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h 24 h 或或 45 h45 h48 h48 h。(3)(3)菌落特征菌落特征:金黄色葡萄球菌在金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker Baird-Parker 平板上，菌落直径为平板上，菌落直径为 2 mm2

23、mm3 mm3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。在血平板上，形成菌落较大，浊带，在其外层有一透明圈。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固血浆凝固 酶试验。酶试验。第三十页，讲稿共五十页哦3.2.3 3.2.3 鉴定鉴定 (1)(1)染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡染色镜检：金黄色葡萄球菌为革

24、兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m0.5m1m1m。(2)(2)血浆凝固酶试验：挑取、血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker Baird-Parker 平板或血平板上可疑平板或血平板上可疑菌落菌落 1 1 个或以上，分别接种到个或以上，分别接种到 5 mL BHI 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面，和营养琼脂小斜面，36 36 1 1 培养培养 18 h18 h24 h24 h。取新鲜配置兔血浆取新鲜配置兔血浆 0.5 mL0.5 mL，放入小试管中，再加入，放入小试管中，再加入 BHI BHI 培养培养物物 0.2 mL0

25、.2 mL0.3 mL0.3 mL，振荡摇匀，置，振荡摇匀，置 36 36 1 1 温箱或水浴箱内，每温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察半小时观察一次，观察 6 h6 h，如呈现凝固或凝固体积大于原体积的，如呈现凝固或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌萄球菌菌 株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌

26、落到 5 mL BHI5 mL BHI，36 36 1 1 培养培养 18 h18 h48 h48 h，重复试验。，重复试验。第三十一页，讲稿共五十页哦3.3 3.3 溶血性链球菌检验溶血性链球菌检验 3.3.1 3.3.1 检验程序检验程序 第三十二页，讲稿共五十页哦3.3.2 3.3.2 操作步骤操作步骤(1)(1)增菌培养增菌培养 将样液吸取将样液吸取5 mL5 mL，接种于，接种于50 mL50 mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种子血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接划线接种子血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经接种匹克氏肉汤，经3636

27、士士l l培养培养24 h24 h，接种血平板。，接种血平板。（2 2）形态与染色）形态与染色 血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约面光滑，有乳光，直径约0.5mm0.5mm0.75 mm0.75 mm，为圆形，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2 mm2 mm4 4 mmmm界限分明、无色透明的溶血圈。界限分明、无色透明的溶血圈。为革兰氏阳性球菌。为革兰氏阳性球菌。第三十三页，讲稿共五十页哦（3 3）生化试验）生化试验链激酶试验：吸取草酸钾血浆链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2 ml0

28、.2 ml，加，加0.8 mL0.8 mL灭菌灭菌生理盐水，混匀，再加入生理盐水，混匀，再加入18 h18 h24 h24 h、3636士士1 1培养的培养的链球菌培养物链球菌培养物0.5mL0.5mL及及0.25%0.25%氯化钙氯化钙0.25 ml0.25 ml（如氯化钙（如氯化钙已潮解，可适当加大至已潮解，可适当加大至0.3%0.3%0.35%0.35%），振荡摇匀，置），振荡摇匀，置于于3636士士1 1水浴中水浴中10 min10 min，血浆混合物自行凝固（凝固，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块重新程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块

29、重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24 h24 h后不溶解即为后不溶解即为阴性。阴性。第三十四页，讲稿共五十页哦杆菌肽敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36士1培养18 h24 h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。第三十五页，讲稿共五十页哦3.4 3.4 志贺氏菌检验志贺氏菌检验GBT 4789.5-2003 GBT 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验志贺氏菌检验.pdf.pdf（1 1）增菌）增菌 吸取检样吸取检

30、样25mL25mL，加入装有，加入装有225mLGN225mLGN增菌液的增菌液的500mL500mL广口瓶内，于广口瓶内，于3636培养培养68h68h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。（2 2）分离培养和初步生化试验）分离培养和初步生化试验 取增菌液取增菌液1 1环，划线接种于环，划线接种于HEHE琼脂平板或琼脂平板或SSSS琼脂平板琼脂平板1 1个；另取个；另取1 1环划线接种环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1 1个，于个，于3636培养培养1

31、824h1824h。志贺志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。第三十六页，讲稿共五十页哦HEHE平板照片平板照片发酵乳糖的某种肠杆菌不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖，呈蓝绿色或蓝色,可能就是志贺氏菌第三十七页，讲稿共五十页哦沙门氏菌有黑色中心,如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了。SS平板照片第三十八页，讲稿共五十页哦不发酵乳糖 发酵乳糖麦康凯平板照片菌落为粉红色，半透明的，可能为志贺氏菌。第三十九页，讲稿共五十页哦EMB平板照片平板照片菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌。第四十页，讲稿共五十页哦

32、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各糖半固体各1 1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经经3636培养培养1824h1824h，分别观察结果。，分别观察结果。2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌志贺氏菌TSI斜面仍为红色；底层产酸不产气，变黄色；不产H2S，不出现黑色。第四十一页，讲稿共五十页哦下述培养物可以弃去：下述培养物可以弃去：a.a.在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b.b.在在1824h1824h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；内发酵乳糖、

33、蔗糖的培养物；c.c.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d.d.产气的培养物；产气的培养物；e.e.有动力的培养物；有动力的培养物；f.f.产生硫化氢的培养物。产生硫化氢的培养物。凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志福氏志贺氏菌贺氏菌6 6型可产生少量气体型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和血清学分型。进一步的生化试验和血清学分型。第四十二页，讲稿共五十页哦(3)(3)进一步的生化试验进一步的生化试验 葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、赖氨

34、酸和鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶、pH7.2pH7.2尿素、尿素、KCNKCN生长、生长、水杨苷和七叶苷的分解。水杨苷和七叶苷的分解。志贺氏菌属的培养物均为阴性结果志贺氏菌属的培养物均为阴性结果(除宋内氏菌和鲍氏除宋内氏菌和鲍氏1313型为型为鸟氨酸阳性外鸟氨酸阳性外)。葡萄糖铵葡萄糖铵:阳性者斜面上有正常大小的菌落阳性者斜面上有正常大小的菌落,阴性者不生长或生阴性者不生长或生 长极微小的菌落。长极微小的菌落。西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。，阴性者不生长。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫

35、色，阴性者为黄色。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。pH7.2pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。KCNKCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。水杨苷和七叶苷：阳性者产气。水杨苷和七叶苷：阳性者产气。第四十三页，讲稿共五十页哦 生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5%乳糖发酵、甘露醇、棉子糖、甘油的发酵、靛基质试验。志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。第

36、四十四页，讲稿共五十页哦志贺氏菌四个群的生化特性生化群5%乳糖甘露醇棉子糖甘油靛基质A群：痢疾志贺氏菌-（+）-/+B群：福氏志贺氏菌-+-（+）C群：鲍氏志贺氏菌-+-（+）-/+D群：宋内氏志贺氏菌+（+）+d-注：+阳性；-阴性；-/+多数阴性，少数阳性 第四十五页，讲稿共五十页哦(4)(4)血清学分型血清学分型 挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用先用4 4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K K抗原的存在而不出现抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用

37、如果呈现凝集，则用A1A1、A2A2、B B群多价和群多价和DD群血清分别试验。群血清分别试验。如系如系B B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1 1。可先用群因子血清。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1 1、2 2、3 3分别检分别检查，并进一步用查，并进一步用11

38、5115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌凝集，可用痢疾志贺氏菌312312型多价血清及各型因子血清检查。型多价血清及各型因子血清检查。(5)(5)结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。告。第四十六页，讲稿共五十页哦三、细菌实验室配置 1.细菌检验操作室（细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台）；2.培养基制作室（培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所）；3.洗涮消毒室（洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物）。第四十七页，讲稿共五十页哦四、微生物实验室的基本仪器配备 生化培养箱，冰箱、生物显微镜、天平、超净工作台、高压灭菌器、微波炉(电炉)、PH试纸或PH计、超净工作台等。第四十八页，讲稿共五十页哦五、微生物实验室的辅助用具与物品 紫外灭菌灯、量筒、灭菌吸管、玻璃试管、培养皿（9cm）、三角瓶、酒精灯、试管架、接种环（针）、剪刀、镊子、洗耳球、烧杯、脱脂棉、Marker笔、试剂瓶等。第四十九页，讲稿共五十页哦感感谢谢大大家家观观看看第五十页，讲稿共五十页哦