第三章 液相色谱PPT讲稿.ppt

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1、第三章 液相色谱1第1页，共71页，编辑于2022年，星期二基本计算：基本计算：tR=tRtM2第2页，共71页，编辑于2022年，星期二色谱分离基本方程式色谱分离基本方程式R1.53第3页，共71页，编辑于2022年，星期二第三章第三章 高效液相色谱法高效液相色谱法3-3 液相色谱法的主要类型及分离原理液相色谱法的主要类型及分离原理3-6 液相色谱仪的基本结构及基本概念液相色谱仪的基本结构及基本概念3-10 毛细管电泳毛细管电泳4第4页，共71页，编辑于2022年，星期二 液相色谱仪器液相色谱仪器（high performance liquid chromatography,HPLC）液相色

2、谱仪（液相色谱仪（1）5第5页，共71页，编辑于2022年，星期二液相色谱仪（液相色谱仪（2）6第6页，共71页，编辑于2022年，星期二液相色谱仪（液相色谱仪（3）7第7页，共71页，编辑于2022年，星期二3-1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点（feature of HPLC）特点：高压、高效、高速、特点：高压、高效、高速、高灵敏度高灵敏度。是高沸点、热不稳定有机及。是高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。生化试样的高效分离分析方法。8第8页，共71页，编辑于2022年，星期二色谱法:利用物质在两相中分配系数的微小差异利用物质在两相中分配系数的微小差异,当两相作相当两

3、相作相对移动时对移动时,使被测物质在两相间进行反复多次分配使被测物质在两相间进行反复多次分配,使得原本小的差异产生大的效果使得原本小的差异产生大的效果,使物质达到分离的一种使物质达到分离的一种方法方法.HPLC:HPLC:在经典液体柱色谱的基础上在经典液体柱色谱的基础上,在色谱理论指引下，在色谱理论指引下，采用采用高压高压输液设备、输液设备、高效高效色谱柱和色谱柱和高灵敏度高灵敏度检测器，检测器，并结合计算机数控技术，具有高度自动化和智能化的一并结合计算机数控技术，具有高度自动化和智能化的一种液相色谱方法。种液相色谱方法。9第9页，共71页，编辑于2022年，星期二现代液相色谱法引用了气相色谱

4、的理论，流动相改为高压输送高压输送（最高输送压力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。液相色谱与气相色谱的比较液相色谱与气相色谱的比较:（1）应用范围不同）应用范围不同（2）液相色谱能完成难度较高的分离工作）液相色谱能完成难度较高的分离工作（3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应柱

5、外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。（4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于适合于大量制备大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。据统计大约据统计大约20%的有机物能用气相色谱分析的有机物能用气相色谱分析 7080%的有机物能用液相色谱分析的有机物能用液相色谱分析10第10页，共71页，编辑于2022年，星期二3-2 影响色谱分离的因素影响色谱分离的因素 （factors influenced separation）1.影响影响分离的因素与提高柱效的途径分离的因素与提

6、高柱效的途径 在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即：H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。11第11页，共71页，编辑于2022年，星期二1）液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质降低传质阻力是提高柱效主要途径。阻力是提高柱效主要途径。2）由速率方程，降低固定相粒度降低固定相粒度可提高柱效。3）液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质，恒温。4）改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。12第12页，共71页，编辑于2022年，星期二3-3 液相色谱主要类型与分离原理液相色谱主

7、要类型与分离原理 分配分配 色谱法色谱法 吸附吸附 色谱法色谱法 按原理分类按原理分类 离子交换色谱法离子交换色谱法 排阻排阻 色谱法色谱法 亲和亲和 色谱法色谱法13第13页，共71页，编辑于2022年，星期二一、液一、液-液分配色谱液分配色谱 （liquid-liquid partition chromatography）固定相与流动相均为液体（互不相溶）；固定相与流动相均为液体（互不相溶）；化学键合固定相化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。固固 定定 相相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；流流 动动 相相：对于亲水

8、性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定液的极性（正相正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相反相 reverse phase）。基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；14第14页，共71页，编辑于2022年，星期二 正相和反相键合色谱法正相和反相键合色谱法 正相键合正相键合色谱法色谱法固定相极性大固定相极性大 硅胶硅胶-OH(或双或双-OH)，硅胶，硅胶-CN 流动相极性小流动相极性小烃类烃类+适量极性溶剂适量极性溶剂(CHCl 3，CH 3 OH，CH 3 CN)分析对象分析对象多用于极性或中等极性化合物的分离。还可多用于极性或中等

9、极性化合物的分离。还可用于分离用于分离 异构体、极性不同的化合物以及异构体、极性不同的化合物以及不同类型的化合物。不同类型的化合物。反相键合反相键合色谱法色谱法固定相极性小固定相极性小如硅胶如硅胶-C18-C18，硅胶，硅胶-苯基；苯基；流动相极性大流动相极性大甲醇甲醇-水、乙腈水、乙腈-水、水和无机盐的缓冲水、水和无机盐的缓冲液。液。分析对象分析对象 多用于多环芳烃多用于多环芳烃(PAHs)(PAHs)等低极性化合物分离；等低极性化合物分离；改变流动相配比，也可分离极性化合物；缓改变流动相配比，也可分离极性化合物；缓冲液可用于易离解的化合物，如有机有机酸、冲液可用于易离解的化合物，如有机有机

10、酸、有机碱和酚类。有机碱和酚类。15第15页，共71页，编辑于2022年，星期二二、二、液液-固吸附色谱固吸附色谱 （liquid-solid adsorption chromatography）固固 定定 相相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是铝等，较常使用的是5 10m的硅胶吸的硅胶吸附剂。附剂。流流 动动 相相：各种不同极性的一元或多元溶：各种不同极性的一元或多元溶剂。剂。基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能

11、团的化合物和异构体有较高选择性。对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。FlowFlow流动相流动相流动相流动相活性吸附点活性吸附点活性吸附点活性吸附点固定相固定相固定相固定相16第16页，共71页，编辑于2022年，星期二三、离子交换色谱三、离子交换色谱 （ion-exchange chromatography）固固 定定 相相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；基本原理基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。换剂之间

12、亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；亲和力大，保留时间长；阳离子交换：阳离子交换：RSO3H+M+=RSO3M+H+阴离子交换：阴离子交换：RNR4OH+X-=RNR4X+OH-应应 用用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。17第17页，共71页，编辑于2022年，星期二四、离子对色谱四、离子对色谱 （ion pair chromatography）原理原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子对离子 或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水或反离子）加到

13、流动相中使其与溶质离子结合形成疏水 性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；阴离子分离阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十 六烷基三甲铵作为对离子；六烷基三甲铵作为对离子；阳离子分离阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；反相离子对色谱反相离子对色谱：非极性的疏水：非极性的疏水固定相固定相(C-18柱柱)，含有对离子，含有对离子 Y+的甲醇的甲醇-水或乙腈水或乙腈-水作为水作为流动相流动相，试样离，试样离 子子X-进入流动相后，

14、生成疏水性离子对进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后；在两相间分配。后；在两相间分配。18第18页，共71页，编辑于2022年，星期二五、离子色谱五、离子色谱 （ion chromatography）离子色谱是在离子色谱是在20世纪世纪70年代中期发展起来的一种技术，年代中期发展起来的一种技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和采用淋洗液抑制技术和电导检测器电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。，是测定混合阴离子的有效方法。在离子色谱的

15、基本结构组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就在离子色谱的基本结构组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就是是抑制器抑制器和和电导检测器电导检测器。19第19页，共71页，编辑于2022年，星期二抑制器的作用抑制器的作用废液Back Ground：Na2CO3/NaHCO3(700S)NaF,NaCl,NaNO3Na2HPO4,Na2SO4Retention timeConductivityNaFNaClNaNO3Na2HPO4Na2SO4Back Ground：Na2CO3/NaHCO3(700S)Retention timeConductivityHFHClHNO3H3PO4H2SO

16、4Retention timeBack Ground：H2CO3(15S)Conductivity20第20页，共71页，编辑于2022年，星期二六、排阻色谱六、排阻色谱 （size-exclusion chromatography）固定相：固定相：凝胶凝胶(具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分布)；原原 理理：按按分分子子大大小小分分离离。小小分分子子可可以以扩扩散散到到凝凝胶胶空空隙隙，由由其其中中通通过过，出出峰峰 最最慢慢；中中等等分分子子只只能能通通过过部部分分凝凝 胶胶空空隙隙，中中速速通通过过；而而大大分分子子被被 排排斥斥在在外外，出出峰峰最最快快；溶溶剂剂分分子子 小，故在

17、最后出峰。小，故在最后出峰。21第21页，共71页，编辑于2022年，星期二七、亲和色谱七、亲和色谱(AC)（Affinity chromatograph）原理原理：利用生物大分子和固定：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔具有一般反应性能的所谓间隔臂臂(环氧、联胺等环氧、联胺等)，再连接上配，再连接上配基基(酶、抗原等酶、抗原等)，这种固载化的，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保吸附的生物大分

18、子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。留。改变淋洗液后洗脱。22第22页，共71页，编辑于2022年，星期二3-4 液相色谱法固定相液相色谱法固定相（stationary phases of LC）1.液液-液分配及离子对色谱固定相液分配及离子对色谱固定相 （1）全多孔型担体）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用 100m的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多 见；现采用10m以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；（2）表面多孔型担体）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体）3040m的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 2m的多孔硅胶。表面积小，柱容量底；23第23页，共71页，

19、编辑于2022年，星期二（3）化学键合固定相）化学键合固定相 化学键合固定相:目前应用最广、性能最佳的固定相；a.硅氧碳键型：硅氧碳键型：SiOC b.硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：SiOSi C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；c.硅碳键型：硅碳键型：SiC d.硅氮键型：硅氮键型：SiN24第24页，共71页，编辑于2022年，星期二化学键合固定相的特点化学键合固定相的特点1）传质快传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；2）寿命长寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；3）耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；4）选择性好选择性好，可键合不

20、同官能团，提高选择性；5）有利于梯度洗脱；有利于梯度洗脱；存在着存在着双重分离机制双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率：分配为主；低覆盖率：吸附为主；25第25页，共71页，编辑于2022年，星期二2.液液-固吸附色谱法固定相固吸附色谱法固定相吸附剂种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等；吸附剂种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等；结构类型：全多孔型和薄壳型；结构类型：全多孔型和薄壳型；粒度：粒度：510 m。26第26页，共71页，编辑于2022年，星期二3.离子交换色谱离子交换色谱法固定相法固定相结构类别：结构类别：（1）薄）薄膜膜型离子交换树脂型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为

21、担体，表面 涂约1%的离子交换树脂；（2）离子交换键合固定相）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键 合型（键合离子交换基团）树脂类别：树脂类别：（1）阳离子交换树脂（强酸阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性）性、弱酸性）（2）阴离子交换树脂（强碱阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性）性、弱碱性）27第27页，共71页，编辑于2022年，星期二4.空间排阻色谱法固定相空间排阻色谱法固定相（1）软质凝胶）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构；水为流动相。适用于常压排阻分离。（2）半硬质凝胶）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶；非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶

22、剂（3）硬质凝胶）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等；化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。28第28页，共71页，编辑于2022年，星期二3-5 液相色谱法流动相液相色谱法流动相（mobile phases of LC）（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性

23、，称为性小于固定相的极性，称为正相液液色谱正相液液色谱，极性柱也称正，极性柱也称正相柱。相柱。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液反相液液色谱液色谱，非极性柱也称为反相柱。，非极性柱也称为反相柱。1.流动相特性流动相特性29第29页，共71页，编辑于2022年，星期二2.流动相类别流动相类别按流动相组成分按流动相组成分：单组分和多组分；按极性分按极性分：极性、弱极性、非极性；按使用方式分按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙 腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相

24、的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。30第30页，共71页，编辑于2022年，星期二3.流动相选择流动相选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序常用溶剂的极性顺序：水(最大)甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)31第31页，共71页，编辑于2022

25、年，星期二4.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。32第32页，共71页，编辑于2022年，星期二3-6 HPLC流程及主要部件流程及主要部件（process and main assembly of HPLC）1.流程流程 高效液相色谱仪由高效液

26、相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统统、检测系统、记录系统 等五大部分组成等五大部分组成.33第33页，共71页，编辑于2022年，星期二2.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵 主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（电电电电泳泳泳泳时时时时,阴阴阴阴离离离离子子子子在在在在负负负负极极极极最最最最后后后后流流流流出出出出,在在在在这这这这种种种种情情情情况况况况下下下下,不不不不但但但但可可可可以以以以按按按按类类类类分分分分离离离离,除除除除中中中中性性性性粒粒粒粒子子子子外外外外

27、,同同同同种种种种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。56第56页，共71页，编辑于2022年，星期二高效毛细管电泳理论基础高效毛细管电泳理论基础57第57页，共71页，编辑于2022年，星期二4 4、仪器流程与主要部件、仪器流程与主要部件 电压：电压：0 030kV30kV；分离柱不涂敷任何固定液；分离柱不涂敷任何固定液；紫外或激光诱导荧光检测器；紫外或激光诱导荧光检测器；（可检测到：（可检测到：1010-19-191010-21

28、-21 mol/L mol/L）58第58页，共71页，编辑于2022年，星期二5 5、电渗现象与电渗流、电渗现象与电渗流5.1 5.1 电渗流现象电渗流现象 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层双电层，二者之间存在电位差。当液体两端施加电压时，就当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫移动的现象叫电渗现象电渗现象。电渗现象中整体移动着的液体电渗现象中整体移动着的液体叫叫电渗流电渗流（简称（简称EOF）。）。59

29、第59页，共71页，编辑于2022年，星期二5.2 5.2 HPCE中的电渗现象与电渗流中的电渗现象与电渗流 石英毛细管柱，内充液石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成时，表面电离成-SiOSiO-,管内壁管内壁带负电荷，形成双电层。带负电荷，形成双电层。在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，故在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度电渗流电渗流。60第60页，共71页，编辑于2022年，星期二5.3 HPCE中电渗流的方向中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质：电渗

30、流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质：内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极；内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极；内表面带正电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极；内表面带正电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极；石英毛细管；带正电荷，电渗流流向阴极；石英毛细管；带正电荷，电渗流流向阴极；61第61页，共71页，编辑于2022年，星期二5.4 5.4 HPCE中电渗流的作用中电渗流的作用 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5 57 7倍；倍；各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为：+=电渗流电渗流+ef +ef

31、阳离子运动方向与电渗流阳离子运动方向与电渗流一致一致；-=电渗流电渗流-ef -ef 阴离子运动方向与电渗流阴离子运动方向与电渗流相反相反；0 0=电渗流电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致；中性粒子运动方向与电渗流一致；62第62页，共71页，编辑于2022年，星期二5 5.5 5 HPCE中电渗流的流形中电渗流的流形 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）；液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。63第63页，共71页，编辑于2022年，星期二高效毛细管电泳分离模式一、毛细管区带电泳一、毛细管

32、区带电泳(CZE)capillary zone electrophoresis二、毛细管凝胶电泳二、毛细管凝胶电泳(CZE)capillary gel electrophoresis三、胶束电动毛细管色谱三、胶束电动毛细管色谱micelle electrokinetic capillary electrophoresis四、毛细管等电聚焦四、毛细管等电聚焦(CIEF)capillary isoelectric focusing五、毛细管等速电泳五、毛细管等速电泳capillary isotachophoresis64第64页，共71页，编辑于2022年，星期二毛细管区带电泳毛细管区带电泳cap

33、illary zone electrophoresis，CZE 带电粒子的迁移速度带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。电泳和电渗流速度的矢量和。正离子正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出；中性粒子中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出 阴离子阴离子：两种效应的运动方向相反；：两种效应的运动方向相反；最基本、应用广的分离模式；最基本、应用广的分离模式；65第65页，共71页，编辑于2022年，星期二胶束电动毛细管色谱胶束电动毛细管色谱micellar electrokinetic

34、capillary chromatography，MECC 它是唯一既能分离中性溶质又同时能分离带电组分的它是唯一既能分离中性溶质又同时能分离带电组分的CECE模式。一相为快模式。一相为快速流动的缓冲液相，另一相为慢速移动的胶束相。速流动的缓冲液相，另一相为慢速移动的胶束相。66第66页，共71页，编辑于2022年，星期二高效毛细管电泳应用高效毛细管电泳应用阳离子分析阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致；4.5min内分离了24种金属离子；67第67页，共71页，编辑于2022年，星期二1 1、药物分析、药物分析 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析；尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段；采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物；68第68页，共71页，编辑于2022年，星期二2 2、氨基酸与蛋白质分析、氨基酸与蛋白质分析采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸；HPCE可取代传统的氨基酸分析仪；问题：吸附和检测；69第69页，共71页，编辑于2022年，星期二3 3、核酸分析及、核酸分析及DNADNA排序排序重要分析手段；酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离；70第70页，共71页，编辑于2022年，星期二作作 业业nP.109 3、4、12（仅CZE）71第71页，共71页，编辑于2022年，星期二