动物细胞融合单克隆抗体PPT课件.ppt
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1、关于动物细胞融合单克隆抗体第一张,PPT共三十九页,创作于2022年6月abcde植物细胞杂交技术植物细胞杂交技术第二张,PPT共三十九页,创作于2022年6月人人-鼠鼠(想像图想像图)材料材料1:1970年,有两位科学家做了一个人年,有两位科学家做了一个人鼠细胞鼠细胞融合的实验,以证明细胞膜的流动性。那么,如何实融合的实验,以证明细胞膜的流动性。那么,如何实现人现人鼠细胞的融合,动物细胞融合后还有什么用途鼠细胞的融合,动物细胞融合后还有什么用途呢?呢?第三张,PPT共三十九页,创作于2022年6月A A细细胞胞B B细细胞胞人工诱导人工诱导1 1、动物、动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细
2、胞杂交细胞动物细胞融合(也称细胞杂交):动物细胞融合(也称细胞杂交):是指是指两个或多个细胞融合两个或多个细胞融合形成一形成一个个单核单核细胞的过程。细胞的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合如:如:B B淋巴细胞淋巴细胞如:骨髓瘤细胞如:骨髓瘤细胞第四张,PPT共三十九页,创作于2022年6月细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分融合后的细胞进行有丝分裂,形成完整的杂交细胞裂,形成完整的杂交细胞3 3、诱导的手段?、诱导的手段?融合后细胞的类型?融合后细胞的类型?ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点?有什么特点?三种
3、三种AAAA、ABAB、BBBB(A A、B B)含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质2 2、原理?、原理?第五张,PPT共三十九页,创作于2022年6月4 4、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性病毒表面含有的糖蛋白和病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞排布,细胞膜打开,细胞发生融合。发生融合。灭活是指用物理或化学手灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感
4、染段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏这些病能力,但并不破坏这些病原体的抗原结构。原体的抗原结构。第六张,PPT共三十九页,创作于2022年6月比较项比较项目目细胞融合的细胞融合的原理原理细胞融合前细胞融合前的处理方法的处理方法诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁后诱细胞壁后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和,获得和,获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合用用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植
5、物细胞杂交手细胞杂交手段外,段外,还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂种获得杂种细胞、细胞、制备制备单克隆抗单克隆抗体体5 5、比较动、植物体细胞杂交技术比较动、植物体细胞杂交技术细胞膜的细胞膜的流动性流动性植物细胞植物细胞的全能性的全能性细胞膜的细胞膜的流动性流动性第七张,PPT共三十九页,创作于2022年6月1、能使动物细胞融合的、能使动物细胞融合的特有特有的诱导因子是的诱导因子是A.离心离心B.灭活的病毒灭活的病毒C.电刺激电刺激D.振动振动2、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增
6、殖能无限增殖C.可形成新个体可形成新个体D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁3、动物细胞融合的作用中最重要的是(、动物细胞融合的作用中最重要的是()A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体C.培育新物种培育新物种D.生产杂种细胞生产杂种细胞B BA AB B第八张,PPT共三十九页,创作于2022年6月第二课时2.2.2 2.2.2 动物细胞融合动物细胞融合与单克隆抗体与单克隆抗体第九张,PPT共三十九页,创作于2022年6月复习回顾:复习回顾:动动物细胞融合物细胞融合(也称动物细(也称动物细胞杂交技术)胞杂交技术)(1 1)融合前处理)融合前处理(2 2)原理:)
7、原理:(3)诱导融合方法)诱导融合方法(4 4)意义:)意义:第十张,PPT共三十九页,创作于2022年6月植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项比较项目目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理融合前融合前处理处理诱导融诱导融合方法合方法主要用途主要用途获得获得植物新品种植物新品种细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞全能性植物细胞全能性酶解法(酶解法(纤维素酶和果纤维素酶和果胶酶胶酶)去除细胞壁)去除细胞壁胰蛋白酶或胶原蛋胰蛋白酶或胶原蛋白酶白酶使细胞分散使细胞分散离心、振荡、电刺离心、振荡、电刺激、聚乙二醇
8、激、聚乙二醇离心、振荡、电刺离心、振荡、电刺激、聚乙二醇激、聚乙二醇灭活的病毒灭活的病毒制备制备单克隆抗体单克隆抗体第十一张,PPT共三十九页,创作于2022年6月二、单克隆抗体二、单克隆抗体第十二张,PPT共三十九页,创作于2022年6月强调:强调:效应效应B淋巴细胞是淋巴细胞是能够产生抗体的能够产生抗体的B淋巴细淋巴细胞,下文将其简称为胞,下文将其简称为B淋淋巴细胞巴细胞能够与抗原发生特异性结能够与抗原发生特异性结合的合的免疫球蛋白免疫球蛋白。B B淋巴细胞淋巴细胞效应效应B B细胞细胞记忆记忆B B细胞细胞增殖增殖分化分化复习回顾复习回顾抗体抗体第十三张,PPT共三十九页,创作于2022
9、年6月抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点:该法制备抗体的缺点:产量低、纯度低,且抗产量低、纯度低,且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。如何解决这个问题呢?如何解决这个问题呢?单克隆抗体!单克隆抗体!同时有其它抗同时有其它抗原和抗体的存原和抗体的存在在第十四张,PPT共三十九页,创作于2022年6月 人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的内的B B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个体,但是
10、每个(效应)(效应)B B细胞只分泌一种化学性质细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用单个必须用单个B B细胞进行无性繁殖,即克隆。细胞进行无性繁殖,即克隆。1、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单个单个B细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的的抗体抗体单克隆抗体单克隆抗体第十五张,PPT共三十九页,创作于2022年6月提示提示1 1:一种效应一种效应B细胞只能产生一种抗体细胞只能产生一种抗体对(效应)对(效应)B B细胞进行细胞培养细胞进行细胞培养可行吗?正常情况下,可行吗?正
11、常情况下,细胞分裂次数是?细胞分裂次数是?提示提示2 2:我们所学的哪种细胞是可以:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖无限增殖的的?问题:问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个方案。方案。2、单克隆抗体的制备原理单克隆抗体的制备原理第十六张,PPT共三十九页,创作于2022年6月一个(效应)一个(效应)B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培动物细胞培养技术养技术设计方案:设计方案:动物细胞融动物细胞融合技术合技术单克隆抗单克隆抗体体 既能产生特异性抗体,既能
12、产生特异性抗体,又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验实验原理:实验原理:第十七张,PPT共三十九页,创作于2022年6月为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白?为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白?融合后会有多少种细胞类型?(考虑融合后会有多少种细胞类型?(考虑2 2个之内)个之内)杂交瘤细胞是如何筛选出来的?有何特点?杂交瘤细胞是如何筛选出来的?有何特点?是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体?是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体?如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体?如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体?学习任务:学习
13、任务:1、带着下列问题阅读课本、带着下列问题阅读课本53-54页第二自然段页第二自然段2、用文字和箭头整理出制备单克隆抗体的过程、用文字和箭头整理出制备单克隆抗体的过程3 3、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第十八张,PPT共三十九页,创作于2022年6月BB BB、B B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 (B B、瘤)、瘤)(一选)(一选)选选择培养基择培养基:只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相获得产生相应抗体的效应抗体的效应应B B细胞细胞(二选):选能(二选):选能产生所需产生所需专一抗专一抗体的杂交瘤细体的杂交瘤细胞胞体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细
14、胞特点:杂交瘤细胞特点:既能产生特异性抗既能产生特异性抗体,又能大量增殖。体,又能大量增殖。第十九张,PPT共三十九页,创作于2022年6月已免疫过的小鼠已免疫过的小鼠检检测后测后提取提取效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞BBBB细胞、细胞、B B瘤细胞瘤细胞、瘤瘤细胞、瘤瘤细胞、B B细胞、瘤细胞细胞、瘤细胞细胞融合细胞融合HATHAT培养基培养基杂交瘤细胞杂交瘤细胞(B瘤细胞)瘤细胞)克隆、检测克隆、检测杂交瘤细胞杂交瘤细胞小鼠腹水小鼠腹水体外培养液体外培养液注入注入提取单克隆抗体提取单克隆抗体产生所需抗体产生所需抗体多种多种第二十张,PPT共三十九页,创作于2022年6月4、单抗
15、制备过程分哪几步?、单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是?接起来。顺序是?第二十一张,PPT共三十九页,创作于2022年6月诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点:单克隆抗体最主要的优点:特异性强,灵敏度特异性强,灵敏度高高,化学性质单一,并能,化学性质单一,并能大量制备大量制备。4、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用第二十二张,PPT共三十九页,创作于2022年6月“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆
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