高中生物选修三动物细胞融合和单克隆抗体精选文档.ppt

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1、高中生物选修三动物细胞融合和单克隆抗体本讲稿第一页，共二十五页 回忆已学知识，你是否已经见到过动物细胞融合的实例？人人人人-鼠鼠鼠鼠(想像图想像图想像图想像图)本讲稿第二页，共二十五页2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体 本讲稿第三页，共二十五页鼠细胞鼠细胞人细胞人细胞人工诱导人工诱导一、动物一、动物细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞动物细胞融合（技术）：是指（在一动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）定的条件下）两个或多个细胞两个或多个细胞融合形融合形成成一个细胞一个细胞的过程。的过程。1、概念：、概念：、概念：、概念：本讲稿第四页，共二十五页2 2、诱导融合的因素

2、、诱导融合的因素化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇(PEG)(PEG)诱导融合诱导融合.物理法：物理法：电激电激融合融合生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导诱导融合融合.病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞 为什么为什么灭活的病毒灭活的病毒能作诱导剂能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性但保留融合活性但保留融合活性本讲稿第五页，共二十五页获得杂种植株获得杂种植株物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化学（聚

3、乙二醇）化学（聚乙二醇）直接诱直接诱导细胞融合导细胞融合去壁去壁原生质体原生质体融合融合诱诱导新壁导新壁杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性结果结果诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较获得杂交细胞获得杂交细胞小结小结本讲稿第六页，共二十五页3 3、动物、动物细胞融合技术的细胞融合技术的意义意义和和应用应用本讲稿第七页，共二十五页问题问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？二、单克隆抗体的制备二、单克

4、隆抗体的制备本讲稿第八页，共二十五页抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法：从从血血清清中中分分离离抗抗体体 该法制备抗体的特点该法制备抗体的特点：产量低、纯度低产量低、纯度低，且抗体，且抗体的的特异性差特异性差。多多种种浆浆细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 本讲稿第九页，共二十五页提示：提示：每一个效应每一个效应B B淋巴细胞只分泌一种淋巴细胞只分泌一种化学性质单化学性质单一，特异性强的抗体一，特异性强的抗体。如果利用单个效应如果利用单个效应B B淋巴细胞进行无性繁殖（克淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产

5、生出化化学性质单一学性质单一、特异性强特异性强的抗体的抗体单克隆抗体单克隆抗体。问题：问题：怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？本讲稿第十页，共二十五页材料：材料：效应效应B细胞在体内只能由细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖、分淋巴细胞增殖、分化而来化而来,不再进行分裂不再进行分裂,在体外培养的条件下，也在体外培养的条件下，也很难分裂很难分裂。思考：用什么方法才能让思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既淋巴细胞在体外培养时既能能产生抗体产生抗体又能又能无限增殖无限增殖?本讲稿第十一页，共二十五页杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术

6、动物细胞融合技术动物细胞融合技术单单克克隆隆抗抗体体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞骨髓骨髓瘤细胞瘤细胞能无限增殖能无限增殖+一个一个浆细胞只分泌浆细胞只分泌一种一种特异性抗体特异性抗体设计方案：设计方案：米米米米尔尔尔尔斯斯斯斯坦坦坦坦科科科科勒勒勒勒本讲稿第十二页，共二十五页读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B

7、 B细胞只分泌一种化学细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单单:单个细胞单个细胞 克隆克隆:无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质单一特异化学性质单一特异性强性强的抗体的抗体本讲稿第十三页，共二十五页单克隆抗体的制备问题思考问题思考Q1Q2细胞两两融合后，有胞两两融合后，有哪些哪些类型？型？B-B;B-瘤瘤;瘤瘤-瘤瘤哪种是需要的哪种是需要的类型，型，要要筛选吗

8、？本讲稿第十四页，共二十五页细胞合成细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途径能被氨基途径能被氨基嘌呤阻断。嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分的合成途径，但一般不分裂增殖。裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有鼠骨髓瘤细胞中只有D D途径，没有途径，没有S S途径，可是能不途径，可是能不断分裂增殖。断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？小资料：小资料：本讲稿第十五页，共二十五页单克隆抗体的制备问题思考问题思考Question经过选择培养基培养基筛选的的杂交瘤交瘤细胞群胞群进行克隆是否

9、就得行克隆是否就得到到产生生纯度高度高的抗的抗体？体？还需怎么需怎么办？本讲稿第十六页，共二十五页有限稀释法稀释多次稀释稀释 对能产生特异性抗体的单个杂交瘤细胞进行克隆，即单细胞克隆。由它产生的抗体，即单克隆抗体。将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。多孔细胞培养板多孔细胞培养板本讲稿第十七页，共二十五页单克隆抗体杂交杂交杂交杂交 细胞细胞细胞细胞灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒等手段等手段等手段等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经经经经免疫免疫免疫免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤细胞杂交瘤细胞第第一一次筛选次筛

10、选用特定的用特定的选择培养基选择培养基第第二二次筛选次筛选能产生专一抗体的杂交瘤细胞能产生专一抗体的杂交瘤细胞体外体外体外体外培养培养培养培养注射到小鼠注射到小鼠注射到小鼠注射到小鼠腹腔腹腔腹腔腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体4.单抗制备过程中应用了那些技术？动物细胞融合、动物细胞培养1.此过程中至少进行了几次筛选？目的相同吗？3.单克隆抗体的优点？特异性强，灵敏度高，可大量制备。2.最终从哪儿提取单克隆抗体？本讲稿第十八页，共二十五页（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（如同位素标记单（如同位素标记单克隆

11、抗体，可诊断克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形肿瘤、心血管畸形等）等）三、单克隆抗体的应用三、单克隆抗体的应用本讲稿第十九页，共二十五页（2）治疗疾病和运载药物）治疗疾病和运载药物生物导弹生物导弹 =单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体 +药物（治疗肿瘤）药物（治疗肿瘤）(“(“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”单抗导向，单抗导向，单抗导向，单抗导向，药物药物药物药物为弹头为弹头为弹头为弹头)单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用疗效高、副作用小疗效高、副作用小本讲稿第二十页，共二十五页1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂

12、交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C.操作步骤基本相同操作步骤基本相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D本讲

13、稿第二十一页，共二十五页3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心

14、离心B本讲稿第二十二页，共二十五页5.5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱导融合后，淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是的细胞是 （）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A.B.A.B.C.C.D.D.C C6.“6.“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细

15、胞C.C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D本讲稿第二十三页，共二十五页单克隆抗体的制备本讲稿第二十四页，共二十五页有梦想，才会有创造！已成功的动物细胞融合实例有很多，如人已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、人兔、人鸡、鼠鸡、鼠兔、鸡兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌菌鸡鸡、人、人胡萝卜胡萝卜 等细胞的融合。等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。和单克隆抗体的最新信息。生物种间杂交生物种间杂交想像图想像图本讲稿第二十五页，共二十五页