实验常用试剂、缓冲液的配制方法知识讲解.doc

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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。实验常用试剂、缓冲液的配制方法-实验常用试剂、缓冲液的配制方法-1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1，

2、溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5MTris-HCl组份浓度1.5MTris-HCl（pH8.8）配制量1L配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、10TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MT

3、ris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。4、3M醋酸钠组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）配制量100mL配置方法1.称取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。3.加入去离子水将溶液定容至100mL。4.高温高压灭菌后，室温保存。5、PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配

4、置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵配制量100mL配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用0.22m滤膜过滤除菌。4.密封瓶口

5、于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥

6、皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤。加入等体积的0.1MTris-H

7、Cl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。9、10（W/V）SDS组份浓度10（W/V）SDS配制量100mL配置方法1

8、.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。3.将溶液定容至100mL后，室温保存。10、2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100mL配置方法1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、2.5NHCl组份浓度2.5NHCl配制量100mL配置方法1.在78.4mL的去离子水中加

9、入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。2.室温保存。12、5MNaCl组份浓度5MNaCl配制量1L配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose组份浓度20（W/V）Glucose配制量100mL配置方法1.称取20gGlucose置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.高温高压灭菌后，4保存。14、SolutionI组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0）

10、，10mMEDTA，50mMGlucose（质粒提取用）配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HCl（pH8.0）25mL0.5MEDTA（pH8.0）20mL20Glucose（1.11M）45mLdH2O910mL2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。15、SolutionII组份浓度250mMNaOH，1（W/V）SDS（质粒提取用）配制量500mL配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。10SDS50mL2NNaOH50mL2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。3.室温保存

11、。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、SolutionIII组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH（质粒提取用）配制量500mL配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500mL。4.高温高压灭菌后，4保存。17、0.5MEDTA组份浓度0.5MEDTA(pH8.0)配制量1L配置方法1.称取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。注

12、意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。18、1MDTT组份浓度1MDTT配制量20mL配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22m滤器过滤除菌。3.适量分成小份后，-20保存。19、10mMATP组份浓度10mMATP配制量20mL配置方法1.称取121mgNa2ATP3H2O，加入到50mL塑料离心管内。2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。3.适量分成小份，-20保存。分子生物学实验常用

13、培养基的配制方法1、Ampicillin组份浓度100mg/mlAmpicillin（100mg/ml）配制量50mL配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22m滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。2、IPTG组份浓度24mg/mLIPTG（24mg/mL）配制量50mL配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22m滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。3、X-Gal组份浓度20mg/mL

14、X-Gal（20mg/mL）配制量50mL配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。3.小份分装（1mL/份）后，-20保存。4、LB培养基组份浓度1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）YeastExtract，1（W/V）NaCl配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.高温高压灭菌后，4保存。5、LB/Amp培养基组份浓度1

15、（W/V）Tryptone0.5（W/V）YeastExtract1（W/V）NaCl0.1mg/mLAmpicillin配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.加去离子水将培养基定容至1L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。7.4保存。6、TB培养基组份浓度1.2（W/V）Tryptone2.4（W/V）YeastExtract0.4（V/V）Gly

16、cerol17mMKH2PO472mMK2HPO4配制量1L配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6.4保存。7、TB/Apm培养基组份浓度1.2（W/V）Tryptone2.4（W/V）YeastExtract0.4（V/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2H

17、PO40.1mg/mLAmpicillin配制量1L配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。6.均匀混合

18、后4保存。8、SOB培养基组份浓度2（W/V）Tryptone0.5（W/V）YeastExtract0.05（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2配制量1L配置方法1.配制250mMKCl溶液。在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。2.配制2MMgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gNaCl0.5g4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。6.滴加5NNaOH溶液

19、（约0.2mL），调节pH值至7.0。7.加入去离子水将培养基定容至1L。8.高温高压灭菌后，4保存。9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。9、SOC培养基组份浓度2（W/V）Tryptone0.5（W/V）YeastExtract0.05（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖配制量100mL配置方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m滤膜过滤除菌。2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。3.4保存。10、2YT培养基组份浓度1.6（W/V）Tryptone，1

20、（W/V）YeastExtract，0.5（W/V）NaCl配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone16gYeastExtract10gNaCl5g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。4.加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4保存。11、bbroth培养基组份浓度2（W/V）Tryptone，0.5（W/V）YeastExtract，0.5（W/V）MgSO47H2O配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gMgSO47H2O5g2.加入约800m

21、L的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。4.加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4保存。12、NZCYM培养基组份浓度0.5（W/V）YeastExtract0.1（W/V）CasaminoAcid1（W/V）NZ胺0.5（W/V）NaCl0.2（W/V）MgSO47H2O配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。YeastExtract5gCasaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO47H2O2g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4保存。13、NZYM培养基组份浓度0.5（W/V）YeastExtract1（W/V）NZ胺0.5（W/V）NaCl0.2（W/V）MgSO47H2O配置方法NZYM培养基除不含Casam