分离工程第八章 优秀课件.ppt

《分离工程第八章 优秀课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分离工程第八章 优秀课件.ppt（66页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、分离工程第八章 第1页，本讲稿共66页本章主要知识点本章主要知识点w w电泳的概念电泳的概念w w电泳的基本原理电泳的基本原理w w电泳技术的分类电泳技术的分类w w常用的凝胶电泳技术有哪些？常用的凝胶电泳技术有哪些？w w电泳装置的基本组成电泳装置的基本组成w w聚丙稀酰胺凝胶电泳的一般过程聚丙稀酰胺凝胶电泳的一般过程第2页，本讲稿共66页w wSDS-PAGESDS-PAGE电泳的基本原理及过程电泳的基本原理及过程w w琼脂糖电泳的特点及其应用琼脂糖电泳的特点及其应用w w等电聚焦电泳的基本原理等电聚焦电泳的基本原理w w双相电泳的概念及其特点双相电泳的概念及其特点第3页，本讲稿共66页电

2、泳的简单原理w w蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中，它们蛋白质、核酸、多糖等常以颗粒分散在溶液中，它们的净电荷取决于介质的的净电荷取决于介质的H H+浓度或与其它大分子的浓度或与其它大分子的相互作用。相互作用。w w带电粒子在电场中的迁移方式主要依据分子带电粒子在电场中的迁移方式主要依据分子尺寸尺寸大小大小和和形状形状、分子所带电荷分子所带电荷或或分子的生物学与化分子的生物学与化学特性学特性。第4页，本讲稿共66页第5页，本讲稿共66页w电泳：是荷电溶质在电场作用下发生定向泳动的现象。w电泳分离是利用荷电溶质在电场中泳动速度的差别进行分离的方法。w20世纪初，电泳法用于蛋白质的分离，2

3、0世纪70年代，电泳多用于分析目的。第6页，本讲稿共66页w（1）自由电泳：是最早的一种电泳形式，目前已很少使用。w瑞典管内蛋白质溶液和缓和液间有清晰可见界面，然后加一电场，由于界面处存在浓度梯度因而产生折射梯度，利用适当的光学系统可以观察到界面的移动。第7页，本讲稿共66页w在电泳过程中，每个移动的界面相当于某一特定的蛋白质，通过一定计算可得其泳动度。第8页，本讲稿共66页w缺点：电泳中因通电发热等原因而引起的对流，常回使已分离的溶质重新混合，为防止对流，可将电泳在多孔介质中进行，称为区带电泳。w区带电泳：应用支持介质的电泳，它表示在一个电场的作用下，在某一支持物上能将一个样品组成彻底分离成

4、若干条区带的过程。第9页，本讲稿共66页w（2）区带电泳：在支持物上电泳时蛋白质混合物被成若干区带。w根据支持物物理性质的不同可分为4类：w滤纸电泳和薄膜电泳，粉末电泳，细丝电泳，凝胶电泳。w多孔介质称为载体，应用最普通的是以滤纸或凝胶为载体故称为纸电泳法或凝胶电泳法。第10页，本讲稿共66页第一节 凝胶电泳法w凝胶电泳的作用是基于凝胶过滤作用（分子筛作用）和电泳淌度的双重机理，所以它能获得较高的分辨率。w凝胶电泳：凝胶过滤作用（分子筛作用）电泳淌度正比于 电荷数（电荷效应）w单位电场强度下的运动速度称为离子淌度或迁移率。第11页，本讲稿共66页聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应w w在使用凝胶

5、介质的电泳中，由于电泳介质具有高粘度和在使用凝胶介质的电泳中，由于电泳介质具有高粘度和高的摩擦阻力，因此不仅可以防止对流，而且可以把扩高的摩擦阻力，因此不仅可以防止对流，而且可以把扩散减到最小。散减到最小。w w凝胶中的大分子分离取决于它的凝胶中的大分子分离取决于它的电荷电荷、尺寸尺寸和和形状形状w w凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸筛分能力（的尺寸筛分能力（Size sieving capacitySize sieving capacity），这种现象被），这种现象被称为称为分子筛效应分子筛效应（molecular sieving

6、 effectmolecular sieving effect）第12页，本讲稿共66页分子筛效应图中图中A A，B B，C C均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图分子量大小依次为分子量大小依次为MA=MBMCMA=MBMC，所带电荷量相同，所带电荷量相同Q QA A=Q=QB B=Q=QC C。ABC+-第13页，本讲稿共66页w常用的凝胶材料：聚丙烯酰胺、琼脂糖凝胶。w聚丙烯酰胺（丙烯酰胺）单体是神经毒素，可积累。w凝胶电泳使用的凝胶种类和浓度根据分离料液中溶质的相对分子质量而异。第14页，本讲稿共66页w聚丙烯酰胺含量 适用的分子量范围w7

7、.5%凝胶 10kD1000kDw3.5%凝胶 1000kD5000kDw琼脂糖或琼脂糖 与聚丙烯酰胺混合物 5000kDw孔径从小到大。第15页，本讲稿共66页垂直电泳槽及灌胶模具垂直电泳槽及灌胶模具第16页，本讲稿共66页电泳的一般过程第17页，本讲稿共66页第18页，本讲稿共66页聚丙酰胺电泳第19页，本讲稿共66页凝胶电泳与凝胶过滤的区别w在凝胶电泳中，样品混合物中各分子的运动速度是小分子大于大分子物质，这种凝胶过滤中的情况恰好相反，这是因为在凝胶电泳中，系统里没有空隙体积，只有充满整体凝胶的网状骨架，因此在其内部大分子物质不及小分子物质容易移动。第20页，本讲稿共66页常规聚丙烯酰胺

8、凝胶电泳原理：原理：w w由于聚丙烯酰胺凝胶电泳（由于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEPAGE）是多孔介质，不仅能）是多孔介质，不仅能防止对流，把扩散减少到最低；而且其孔径大小与生物防止对流，把扩散减少到最低；而且其孔径大小与生物大分子具有相似的数量级，大分子具有相似的数量级，能主动参与生物分子的分离，能主动参与生物分子的分离，具有分子筛效应具有分子筛效应。w w因此，在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质分离时，在电因此，在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质分离时，在电泳过程中泳过程中不仅取决于蛋白质的电荷密度，还取决于蛋白质的不仅取决于蛋白质的电荷密度，还取决于蛋白质的尺寸和形状。尺寸和形状。w w

9、PAGEPAGE可以用圆盘电泳、垂直电泳或水平电泳可以用圆盘电泳、垂直电泳或水平电泳第21页，本讲稿共66页电泳前的准备工作w缓冲系统的选择：保证蛋白质的溶解性能、稳定性以及生物保证蛋白质的溶解性能、稳定性以及生物活性的保持；活性的保持；电泳时间和分辨率：从理论上讲电泳时间和分辨率：从理论上讲PAGEPAGE可可以在任何以在任何pHpH进行，但实际上过酸或过碱的进行，但实际上过酸或过碱的条件下将发生某种水解（脱酰胺）。因此，条件下将发生某种水解（脱酰胺）。因此，pHpH应限制在应限制在310310之间。之间。第22页，本讲稿共66页缓冲系统的选择原则w是两种标准的对立权衡 如果缓冲液的如果缓冲

10、液的pHpH选择在远离样品中各种蛋白的选择在远离样品中各种蛋白的等电点，蛋白质分子所带电荷的密度大，电泳等电点，蛋白质分子所带电荷的密度大，电泳时间短，区带细而窄；时间短，区带细而窄；如果缓冲如果缓冲pHpH选择在靠近被分离样品的一种或几选择在靠近被分离样品的一种或几种蛋白质的等电点，则蛋白质分子之间的电荷种蛋白质的等电点，则蛋白质分子之间的电荷密度差别大，分辨率就高；密度差别大，分辨率就高；因此，常常选择因此，常常选择pH 8.09.5pH 8.09.5的缓冲，常用的缓冲液有的缓冲，常用的缓冲液有Tris-Tris-甘氨酸（甘氨酸（pH 8.39.5pH 8.39.5），），Tris-Tri

11、s-硼酸硼酸(pH 8.39.3)(pH 8.39.3)和和Tris-Tris-醋酸（醋酸（pH 7.28.5pH 7.28.5）第23页，本讲稿共66页离子强度的选择w w离子强度不宜过高，此时电导率低，产热少，电泳离子强度不宜过高，此时电导率低，产热少，电泳速度快；但也不可过低，必须具有一定的缓冲能力，速度快；但也不可过低，必须具有一定的缓冲能力，过低的离子强度容易导致蛋白质絮凝。过低的离子强度容易导致蛋白质絮凝。w w一般选择缓冲液的离子强度为一般选择缓冲液的离子强度为0.010.1 mol/L0.010.1 mol/L之间之间第24页，本讲稿共66页凝胶浓度的选择w w由于由于PAGE

12、PAGE电泳分离不仅取决于蛋白质的电荷密度，而且取电泳分离不仅取决于蛋白质的电荷密度，而且取决于分子的大小、形状。因此，与凝胶的分子筛效应（即凝决于分子的大小、形状。因此，与凝胶的分子筛效应（即凝胶的孔径与电泳的分辨率、电泳速度）密切相关。胶的孔径与电泳的分辨率、电泳速度）密切相关。w w根据凝胶孔径与被分离分子的大小和形状，可以将凝胶分为：根据凝胶孔径与被分离分子的大小和形状，可以将凝胶分为：非排阻性凝胶（非排阻性凝胶（unrestrictive gelunrestrictive gel）:浓度浓度0.7 0.7 1.0%1.0%的琼脂糖凝胶；的琼脂糖凝胶；排阻性凝胶（排阻性凝胶（restr

13、ictive gelrestrictive gel）：浓度大于：浓度大于1%1%的的琼脂糖凝胶和常规琼脂糖凝胶和常规PAGEPAGE第25页，本讲稿共66页w凝胶浓度太大，孔径小于样品分子尺寸，电泳时蛋白质分子不能进入凝胶，样品仍留在加样位置；w凝胶浓度太小，孔径太大，样品中各种蛋白质分子均随缓冲液推进，不能得到很好的分离；第26页，本讲稿共66页凝胶浓度凝胶浓度(C=2.6%)(C=2.6%)分子量范围分子量范围(kDa)(kDa)凝胶浓度凝胶浓度(C=5%)(C=5%)分子量范围分子量范围(kDa)(kDa)5 530200302005 56070060700101015100151001

14、0102228022280151510501050151510200102002020215215202051505150凝胶浓度与分子量测定的关系凝胶浓度与分子量测定的关系第27页，本讲稿共66页PAGE的具体操作过程w w制胶：确定凝胶配方（凝胶、引发剂、增速剂的浓度和缓冲制胶：确定凝胶配方（凝胶、引发剂、增速剂的浓度和缓冲液），使用灌胶模具灌胶；液），使用灌胶模具灌胶；w w样品准备：选择合适的样品缓冲液、确定合适的样品样品准备：选择合适的样品缓冲液、确定合适的样品浓度（浓度（12mg/L12mg/L，考染），加样（溴酚蓝）；，考染），加样（溴酚蓝）；w w电泳：电泳：4646小时，待小

15、时，待溴酚蓝溴酚蓝前沿到达阳极底部；前沿到达阳极底部；w w检测：紫外扫描或染色（考马斯亮蓝检测：紫外扫描或染色（考马斯亮蓝R-250R-250、银染色、银染色灵敏灵敏度比考染高度比考染高100100倍、荧光探针）；倍、荧光探针）；w w照相、凝胶干燥：照相、凝胶干燥：w w定量测定：定量测定：第28页，本讲稿共66页w凝胶电泳：装柱操作，铺板操作。w近来聚丙烯酰胺凝胶电泳法有了两个新进展：wA、不连续凝胶电泳。wB、十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳。第29页，本讲稿共66页w1、不连续凝胶电泳：w不连续凝胶由两层组成，上层为浓缩层（丙烯酰胺23%），下层为分离层（丙烯酰胺525%）

16、。第30页，本讲稿共66页第31页，本讲稿共66页w聚丙烯酰胺凝胶电泳：以聚丙烯酰胺为支持物，制成凝胶柱。w凝胶柱由二节凝胶组成（小节浓缩胶，大节分离胶）。这二节胶孔径大小，缓冲液离子成分和离子强度值，电场强度都是不同的。第32页，本讲稿共66页w样品先被压缩一个薄层，然后进行电泳。w一般经过三个效应，浓缩效应，分子筛效应，电荷效应，使样品分离效果好，分辨率高。第33页，本讲稿共66页w2、十二烷基硫酸钠（SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳w一种加阴离子去污剂SDS的聚丙烯酰胺凝胶电泳。w主要用途：w分离蛋白质和测定它的相对分子量。第34页，本讲稿共66页SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳w w十二烷基磺酸钠

17、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳w w主要用于测定蛋白质主要用于测定蛋白质亚基分子量亚基分子量以及未知蛋白质以及未知蛋白质分子量的测定；分子量的测定；w w特点：设备简单、操作简便、测定快速、重复性高、特点：设备简单、操作简便、测定快速、重复性高、样品无需纯化。样品无需纯化。第35页，本讲稿共66页w基本原理：wSDS能以一定比例与蛋白质结合，并使蛋白质带有大量的负电荷，（大大超过原来所带电荷），从而使天然蛋白质分子之间电荷差别下降乃至消除。同时蛋白质的结构也在 SDS作用下变的松散（蛋白质变成多肽），形状趋于一致，排除了电泳过程中电荷的影响，使SDS聚丙烯酰胺电泳时，蛋白

18、质迁移率的差异仅是相对分子质量的函数。第36页，本讲稿共66页SDS-PAGE 的原理w w蛋白质分子的解聚蛋白质分子的解聚 SDSSDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能剂，能断裂分子内和分子间的氢键断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，强还原剂，如二硫苏糖醇、如二硫苏糖醇、-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。的二硫键断裂。因此，在样品和凝胶中加入因此，在样品和凝胶中加入SDSSDS和还原剂后，蛋白和还原剂后，蛋

19、白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与酸侧链与SDSSDS结合后，形成带负电的蛋白质结合后，形成带负电的蛋白质-SDS-SDS胶胶束，束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异除了不同分子间的电荷差异；同时，；同时，蛋白质蛋白质-SDS-SDS聚聚合体的形状也基本相同合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。分子形状对迁移率的影响。第37页，本讲稿共66页蛋白质样品用SDSSDS处理后亚基的解聚和分子形状的改变第38页，

20、本讲稿共66页未知蛋白质分子量的测定w基于上述SDS-PAGE的原理介绍，我们可以利用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测定；以不同分子量的标准蛋白进行以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGESDS-PAGE电泳电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行正曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGESDS-PAGE电泳，测定迁移率，从标准曲线得电泳，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量；到相应的分子量；第39页，本讲稿共66页wLgM =A -KRmwM相对分子量wA常数wK斜率wRm迁移率w由

21、于蛋白质结合SDS的量与蛋白质种类、pH、I、缓冲液组成有关。一般都必须用已知相对分子量蛋白质作为指示蛋白质、与被测样品在同一条件下进行电泳，给出LgM Rm曲线，求出样品Rm值对应的LgM，计算出被测样品相对分子量。第40页，本讲稿共66页第二节 等电点聚焦w等电点聚焦（IEF)：利用蛋白质和氨基酸等两性电解质具有等电点，在等电点的pH下呈电中性，不发生泳动的特点进行电泳分离。w在电泳设备中首先调配连续的pH梯度，然后使蛋白质在电场作用下泳动到各自等电点的 pH区域形成具有不同等电点的蛋白质区带。第41页，本讲稿共66页w等电聚焦原理示意图第42页，本讲稿共66页w装置:第43页，本讲稿共6

22、6页w特点：w优点：消除分子扩散引起的分离度下降。w缺点：1、载体两性电解质对产品产生污染；2、pH梯度的稳定性不高；3、操作过程中发生凝胶脱水起皱现象。第44页，本讲稿共66页载体两性电解质pH梯度等电聚焦w w等电聚焦（等电聚焦（isoelectrofocusingisoelectrofocusing）,IEF,IEF利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性的定的、连续的、线性的pHpH梯度中进行蛋白质的分离和分梯度中进行蛋白质的分离和分析。析。w w利用等电聚焦技术分离、分析的对象仅限于蛋白质和利用等电聚焦技术

23、分离、分析的对象仅限于蛋白质和两性分子。两性分子。w w根据建立根据建立pHpH梯度的原理不同，梯度有分为载体两性电解梯度的原理不同，梯度有分为载体两性电解质梯度（质梯度（Carrier ampholytes pH gradientCarrier ampholytes pH gradient）和固相梯）和固相梯度。度。第45页，本讲稿共66页工作原理w w蛋白质的等电点蛋白质的等电点蛋白质最主要的特性是它的带电行为，它们在不蛋白质最主要的特性是它的带电行为，它们在不同的同的pHpH环境中带不同数量的正电或负电，只是在环境中带不同数量的正电或负电，只是在某一某一pHpH时，蛋白质的净电荷为时，蛋

24、白质的净电荷为0 0，此，此pHpH即为该蛋白即为该蛋白的等电点（的等电点（isoelectric point pIisoelectric point pI）。）。w w蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成和构象，蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成和构象，是一个物理化学常数。是一个物理化学常数。w w可以可以利用等电点差异来进行蛋白质的分离、分析利用等电点差异来进行蛋白质的分离、分析 第46页，本讲稿共66页载体两性电解质pH梯度等电聚焦原理w w载体两性电解质载体两性电解质pHpH梯度等电聚焦是在支持介质中梯度等电聚焦是在支持介质中加入加入载体两性电解质载体两性电解质，通以直流电后在两极之间，

25、通以直流电后在两极之间形成稳定、连续和线性的形成稳定、连续和线性的pHpH梯度梯度，当带电的蛋白质，当带电的蛋白质分子进入该体系时，便会产生移动，并分子进入该体系时，便会产生移动，并聚集于相聚集于相当于其等电点的位置当于其等电点的位置。第47页，本讲稿共66页等电聚焦分离示意图第48页，本讲稿共66页常规PAGE和等电聚焦电泳的区别第49页，本讲稿共66页载体两性电解质和pH梯度的形成w w等电聚焦技术的关键在于等电聚焦技术的关键在于pHpH梯度的建立梯度的建立w w载体两性电解质的概念：载体两性电解质的概念：作为载体两性电解质应该具有以下特点：作为载体两性电解质应该具有以下特点：应该是两性的

26、，使它们在分离柱中也能达到一应该是两性的，使它们在分离柱中也能达到一个平衡位置；个平衡位置；应该可以作为应该可以作为“载体载体”，两性电解质不能用于，两性电解质不能用于等电聚焦，只有载体两性电解质，即具有好的等电聚焦，只有载体两性电解质，即具有好的导电性和好的缓冲能力的化合物才能用于等电导电性和好的缓冲能力的化合物才能用于等电聚焦。聚焦。第50页，本讲稿共66页用于等电聚焦的主要载体两性电解质w wAmpholineAmpholine(瑞典瑞典LKBLKB公司公司)由许多脂肪族的多氨基多羧基的异构体和同系物组由许多脂肪族的多氨基多羧基的异构体和同系物组成，它们具有连续改变的氨基与羧基比成，它们

27、具有连续改变的氨基与羧基比w wServalyte Servalyte(德国德国Serva Serva 公司公司)产品产品BiolyteBiolytew wPharmalytePharmalyte(瑞典瑞典Pharmacia Pharmacia 公司公司)产品分为九种产品分为九种pHpH范围范围第51页，本讲稿共66页pH梯度的形成w w在没有电场时，载体两性电解质的在没有电场时，载体两性电解质的pHpH值大约是值大约是该该溶液溶液pHpH范围的平均值范围的平均值，所有载体两性电解质分子，所有载体两性电解质分子都荷电。都荷电。w w当引入电场时，当引入电场时，载体两性电解质分子将向阴极或阳载体

28、两性电解质分子将向阴极或阳极迁移，带有最低等电点的分子（荷最多负电）极迁移，带有最低等电点的分子（荷最多负电）将最快地向阳极移动；当它达到净电荷为将最快地向阳极移动；当它达到净电荷为0 0的位置的位置时才停止，这个位置靠近阳极，由于它具有高的缓冲时才停止，这个位置靠近阳极，由于它具有高的缓冲能力，使环境溶液的能力，使环境溶液的pHpH等于分子本身的等于分子本身的pIpI。第52页，本讲稿共66页w w其次，其次，一些低一些低pIpI的载体两性电解质（荷其次多的负的载体两性电解质（荷其次多的负电）也向阳极移动，直到它的净电荷减少到电）也向阳极移动，直到它的净电荷减少到0 0才停才停止。同样的，其

29、周围环境溶液止。同样的，其周围环境溶液pHpH值也等于它本值也等于它本身的身的pIpI。依次类推，所有的载体两性电解质分子用增。依次类推，所有的载体两性电解质分子用增加加pIpI级数的方法将分别在阳极、阴极之间到达它级数的方法将分别在阳极、阴极之间到达它们自己的位置，从而给出一个们自己的位置，从而给出一个pHpH梯度。梯度。第53页，本讲稿共66页载体两性电解质在电场中形成pH梯度的模式图第54页，本讲稿共66页水平等电聚焦电泳w w制胶：溶液配制（丙烯酰胺、制胶：溶液配制（丙烯酰胺、N N，N-N-甲叉双丙烯酰甲叉双丙烯酰胺、载体两性电解质等），灌胶；胺、载体两性电解质等），灌胶；w w电泳

30、：加样可在凝胶上的任何位置，浓度一般为电泳：加样可在凝胶上的任何位置，浓度一般为0.52mg/ml0.52mg/ml；w w固定：固定：w w染色：染色：w w脱色：脱色：第55页，本讲稿共66页第56页，本讲稿共66页等电聚焦的主要应用w w同工酶分离、分析同工酶分离、分析w wpI pI 测定测定实际应用当中，等电聚焦的操作过程要复杂得多，实际应用当中，等电聚焦的操作过程要复杂得多，具体内容可参考具体内容可参考蛋白质电泳实验技术蛋白质电泳实验技术，作者：，作者：郭尧君，科学出版社。郭尧君，科学出版社。第57页，本讲稿共66页双相电泳w w第一相第一相 等电聚焦w w第二相第二相 SDSPA

31、GE目的：为了获得更详细的组分信息目的：为了获得更详细的组分信息目前已经广泛应用于蛋白质组研究中目前已经广泛应用于蛋白质组研究中第58页，本讲稿共66页第59页，本讲稿共66页第60页，本讲稿共66页思考题w1、氨基酸的等电点（pI)是指。w2、用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同。w3、测定别构酶的相对分子量可以用十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。w4、某蛋白质在pH 6时向阳极移动，则其等电点小于6。第61页，本讲稿共66页w 选择题w1、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（）wA、在一定pH条件下所带静电荷不同wB、分子大小不同wC、分子极性不同wD

32、、溶解度不同wE、以上说法都不对第62页，本讲稿共66页w2、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这技术属于（）wA、吸附层析wB、离子交换层析wC、分配层析wD、亲和层析wE、凝胶过滤第63页，本讲稿共66页w 回答题w1、凝胶过滤法和SDS-聚丙烯凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小的基础之上，而且两种方法均采用交联的多聚物作为支持介质，为什么在凝胶过滤时，相对分子质量小的蛋白质有较长的保留时间，而SDS-聚丙烯凝胶电泳时，它又跑的最快？第64页，本讲稿共66页本章作业w w电泳的基本原理电泳的基本原理w w电泳技术的分类电泳技术的分类w w常用的凝胶电泳技术有哪些？常用的凝胶电泳技术有哪些？w w聚丙稀酰胺凝胶电泳与聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDS-PAGESDS-PAGE的异同的异同w w琼脂糖电泳的特点及其应用琼脂糖电泳的特点及其应用w w等电聚焦电泳的基本原理等电聚焦电泳的基本原理w w双相电泳的概念及其特点双相电泳的概念及其特点第65页，本讲稿共66页本课程的课堂讲授内容到此全部结束本课程的课堂讲授内容到此全部结束谢谢大家！谢谢大家！谢谢大家！谢谢大家！第66页，本讲稿共66页