动物细胞工程的主要技术优秀课件.ppt

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1、动物细胞工程的主要技动物细胞工程的主要技术术第1页，本讲稿共13页动动物物细细胞胞工工程程概念概念常用常用技术技术应用细胞学的方法，按照人们的需要应用细胞学的方法，按照人们的需要和预定的设计，有目的、有计划地保和预定的设计，有目的、有计划地保存、改变动物细胞和创造新的动物细存、改变动物细胞和创造新的动物细胞，进而培育成新的物种或者品种的胞，进而培育成新的物种或者品种的一门科学技术。一门科学技术。动物细胞培养（基础）动物细胞培养（基础）动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体动物体细胞克隆技术动物体细胞克隆技术第2页，本讲稿共13页一动物细胞培养一动物细胞培养1.1.动物细胞培养条件动物细胞

2、培养条件（1 1）营养成分：培养液的主要成分有葡萄糖、氨基酸、无）营养成分：培养液的主要成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。机盐、维生素和动物血清等。（2 2）气体环境）气体环境O O ：细胞呼吸消耗：细胞呼吸消耗COCO:调节调节pHpH值值（3 3）温度和）温度和pHpH：哺乳动物细胞培养环境温度控制在：哺乳动物细胞培养环境温度控制在36.536.537.537.5，Ph7.2Ph7.27.47.4。第3页，本讲稿共13页动物细胞的培养过程 幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养养单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物

3、细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础剪碎组织剪碎组织的目的？的目的？胰蛋白酶处胰蛋白酶处理的目的？理的目的？第4页，本讲稿共13页动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官组织、器官组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液细胞悬浮液细胞悬浮液1010代细胞代细胞代细胞代细胞50505050代细胞代细胞代细胞代细胞传代培养传代培养传代培养传代培养无限传代无限传代无限传代无限传代单个细胞单个细胞单个细胞单个细胞加培养液加培养液加培养液加培养液原代培养原代培养原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋

4、白酶胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎剪碎剪碎细细胞株胞株胞株胞株细胞系细胞系细胞系细胞系遗传物质遗传物质遗传物质遗传物质未改变未改变未改变未改变遗传物质遗传物质遗传物质遗传物质已改变已改变已改变已改变2.2.动物细胞培动物细胞培养过程养过程第5页，本讲稿共13页有关概念n n原代培养原代培养：经过滤：经过滤、离心后将动物再接种到离心后将动物再接种到无菌的培养液中，在适宜的条件下进行静止无菌的培养液中，在适宜的条件下进行静止或慢速转动培养，这个过程成为传代培养。或慢速转动培养，这个过程成为传代培养。n n传代培养传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个

5、或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。第6页，本讲稿共13页有关概念有关概念有关概念有关概念细胞株：细胞株：传代培养的细胞一般传至传代培养的细胞一般传至1010代左右细胞生代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40504050代，代，这种传代细胞为细胞株。这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞生长停代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下

6、可以无限制传代，这种传代细胞为细在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。胞系。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别：细胞株传代在细胞株传代在40504050代内，代内，遗传物质没有改变；细胞系无限传代下去，遗传物质改遗传物质没有改变；细胞系无限传代下去，遗传物质改变。变。第7页，本讲稿共13页有关概念细胞贴壁：细胞贴壁：细胞贴壁：细胞贴壁：培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁

7、生长。这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁生长。这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁生长。这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁生长。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。止分裂增殖的现象。止分裂增殖的现象。止分裂增殖的现象。第8页，本讲稿共13页相关问题相关问题1.1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织做动物细为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织做动物细胞培养

8、材料？胞培养材料？胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛2.2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸收分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖3.3.为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？在动物组织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，它在动物组织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，它们将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器们将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和

9、器官，而弹性纤维易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分官，而弹性纤维易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分离开。离开。第9页，本讲稿共13页相关问题相关问题4.4.培养的细胞为何贴壁生长？培养的细胞为何贴壁生长？大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定的表大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定的表面生长和分裂面生长和分裂5.5.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成生物个体？成生物个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体成新的动物个体第10页，本讲稿共13页二二 动物体细胞

10、克隆技术动物体细胞克隆技术1.1.概念：是将动物的一个细胞的细胞核移入一概念：是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其重组并发个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎始终发育育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎始终发育为动物个体。为动物个体。第11页，本讲稿共13页单克隆抗体制备流程单克隆抗体制备流程 英国科学家米尔斯坦和德国科学英国科学家米尔斯坦和德国科学家选用小鼠体内的家选用小鼠体内的B B淋巴细胞和一种淋巴细胞和一种营养缺陷型的骨髓瘤细胞作为实验材营养缺陷型的骨髓瘤细胞作为实验材料利用聚乙二醇为融合剂，使两种细料利用聚乙二醇为融合剂，使

11、两种细胞发生融合。然后利用只有杂交瘤细胞发生融合。然后利用只有杂交瘤细胞才能生长的选择培养液来筛选处理胞才能生长的选择培养液来筛选处理过的细胞群体。骨髓瘤细胞在选择培过的细胞群体。骨髓瘤细胞在选择培养液中停止生长，养液中停止生长，B B淋巴细胞在体外淋巴细胞在体外培养也只能存活数天，因此只有培养也只能存活数天，因此只有杂交瘤细胞才可以大量生长、繁杂交瘤细胞才可以大量生长、繁殖。利用这种方法培育得到的杂殖。利用这种方法培育得到的杂交瘤细胞不但可以像肿瘤细胞那交瘤细胞不但可以像肿瘤细胞那样无休止、快速地进行分裂增殖样无休止、快速地进行分裂增殖而且能像而且能像B B淋巴细胞一样分泌大量淋巴细胞一样分

12、泌大量特异性抗体。通过杂交瘤细胞培养特异性抗体。通过杂交瘤细胞培养得到的这些特异性抗体就是所谓的得到的这些特异性抗体就是所谓的单克隆抗体。单克隆抗体。第12页，本讲稿共13页问题问题1 1 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合？淋巴细胞融合？细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活成活问题问题2 2 骨髓瘤细胞是癌细胞吗？骨髓瘤细胞是癌细胞吗？有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而且具有转有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而且具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说瘤细胞移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说瘤细胞不等于癌细胞。不等于癌细胞。问题问题3 3 整个制备过程为何要经过两次筛选？整个制备过程为何要经过两次筛选？第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需在多第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。第13页，本讲稿共13页