食品微生物检验技能试题及答案.pdf
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1、食品微生物检验技能试题及答食品微生物检验技能试题及答案案食品微生物检验技能试题一食品微生物检验技能试题一一、有两管菌种,一管为金黄葡萄球菌,一管为大肠杆菌,但标签已脱落,请一、有两管菌种,一管为金黄葡萄球菌,一管为大肠杆菌,但标签已脱落,请通过染色实验将其分开。(通过染色实验将其分开。(4040 分)分)1 1、涂片、干燥、固定(涂片、干燥、固定(1010 分)分)2 2、染色(染色(1515 分)分)3 3、镜检(镜检(1010 分)分)4 4、报告(报告(5 5 分)分)二、酱油中细菌总数的测定(二、酱油中细菌总数的测定(6060 分)分)1 1、实验准备(实验准备(2020 分)分)2
2、2、样品稀释与培养(样品稀释与培养(2020 分)分)3 3、菌落计数方法(菌落计数方法(1010 分)分)4 4、菌落计数的报告(菌落计数的报告(1010 分分答案要点答案要点一、菌种区分一、菌种区分1 1、涂片、干燥、固定、涂片、干燥、固定(1 1)取两块洁净载玻片,分别在载玻片中央滴一滴生理盐水,用无菌操作分别)取两块洁净载玻片,分别在载玻片中央滴一滴生理盐水,用无菌操作分别挑取菌种于载玻片的水滴中,调匀涂成薄膜,直径挑取菌种于载玻片的水滴中,调匀涂成薄膜,直径 1.5cm1.5cm 左右。左右。(2 2)干燥)干燥室温干燥或用电吹风吹干。室温干燥或用电吹风吹干。(3 3)固定)固定涂片
3、面上,在酒精灯上过火三次,使细胞质凝固,以固定细菌的形涂片面上,在酒精灯上过火三次,使细胞质凝固,以固定细菌的形态,并使其不易脱落。但不能在火焰上烤,否则,形态会破坏。态,并使其不易脱落。但不能在火焰上烤,否则,形态会破坏。2 2、染色、染色(1 1)初染)初染 加草酸铵结晶紫染色液染色加草酸铵结晶紫染色液染色 1 1 分钟,用水冲洗。分钟,用水冲洗。(2 2)媒染)媒染滴加碘液冲去残水,并用碘液覆盖滴加碘液冲去残水,并用碘液覆盖 1 1 分钟,水洗。分钟,水洗。(3 3)脱色)脱色将载玻片上的水甩干净,在载玻片下衬以白色背景,滴加将载玻片上的水甩干净,在载玻片下衬以白色背景,滴加 95%95
4、%的酒的酒精脱色,直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止(精脱色,直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止(0.50.5 分钟),立即用水冲净酒分钟),立即用水冲净酒精。精。(4 4)复染)复染用番红染液染用番红染液染 1-21-2 分钟,水洗。分钟,水洗。3 3、镜检、镜检 干燥后,置显微镜下观察。干燥后,置显微镜下观察。4 4、报告、报告 球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌,杆状、染成红色者为大肠杆菌。球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌,杆状、染成红色者为大肠杆菌。二、酱油中细菌总数的测定二、酱油中细菌总数的测定1 1、实验准备、实验准备(1 1)酱油)酱油(2 2)1ml1ml 与与 10ml10ml 吸
5、管将吸管洗净烘干,塞入少量脱脂棉,卷好防潮纸进行干热吸管将吸管洗净烘干,塞入少量脱脂棉,卷好防潮纸进行干热灭菌(灭菌(160160、2 2 小时)或加压灭菌。(小时)或加压灭菌。(121121、3030 分钟)分钟)(3 3)平皿)平皿 将平皿分为将平皿分为 1010 个一卷,用防潮纸包好,同上述吸管一起进行灭菌。个一卷,用防潮纸包好,同上述吸管一起进行灭菌。(4 4)备一瓶)备一瓶 90ml90ml 和三管和三管 9ml9ml 的生理盐水,配以松紧适度的棉塞,用防潮纸将的生理盐水,配以松紧适度的棉塞,用防潮纸将口部包好,同上述材料一起进行加压蒸汽灭菌,但需使灭菌后仍能保持原有毫口部包好,同上
6、述材料一起进行加压蒸汽灭菌,但需使灭菌后仍能保持原有毫升数(也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法)。升数(也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法)。(5 5)培养基培养基 蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。将培养基用碱液调至将培养基用碱液调至 PH7.2-7.4,PH7.2-7.4,装入灭菌的试管中约装入灭菌的试管中约 15ml,15ml,进行加压灭菌后,保温进行加压灭菌后,保温 4545备用。备用。2 2、样品稀释与培养、样品稀释与培养(1 1)用)用 10ml10ml 无菌吸管将酱油样品注入无菌吸管将酱油样品注入 90ml90ml 无菌生理盐水内,充分摇匀,作成无菌
7、生理盐水内,充分摇匀,作成1 1:1010 的稀释液。应严格无菌操作。的稀释液。应严格无菌操作。(2 2)用)用 1ml1ml 无菌吸管,吸取无菌吸管,吸取 1 1:1010 稀释液稀释液 1ml1ml,注入含有,注入含有 9ml9ml 无菌生理盐水的无菌生理盐水的试管内,振荡试管混合均匀,做成试管内,振荡试管混合均匀,做成 1 1:100100 的稀释液。的稀释液。(3 3)另取)另取 1ml1ml 无菌吸管,按上项操作顺序做无菌吸管,按上项操作顺序做 1010 倍递增稀释液,每递增稀释一倍递增稀释液,每递增稀释一次,即换用一支灭菌吸管,配成次,即换用一支灭菌吸管,配成 1 1:100010
8、00 和和 1 1:1000010000 的稀释液。的稀释液。(4 4)再取三支)再取三支 1ml1ml 无菌吸管(或使用该稀释度的吸管),分别吸取无菌吸管(或使用该稀释度的吸管),分别吸取 1 1:1010、1 1:100100 和和 1 1:10001000 的稀释液各的稀释液各 1ml1ml 于平皿内,每个稀释度做两个平皿。于平皿内,每个稀释度做两个平皿。(5 5)立即将)立即将 15ml15ml 已冷却至已冷却至 4545的培养基注入平皿内,并转动平皿,使其混合的培养基注入平皿内,并转动平皿,使其混合均匀。均匀。(6 6)待琼脂凝固后,用纸包好,反转平皿,置于)待琼脂凝固后,用纸包好,
9、反转平皿,置于 3737恒温箱内培养恒温箱内培养 2424 小时后小时后取出,计算平皿内细菌菌落数目,成以稀释倍数,即得每毫升样品所含菌落总取出,计算平皿内细菌菌落数目,成以稀释倍数,即得每毫升样品所含菌落总数。数。4 4、菌落计数方法、菌落计数方法(1 1)从温箱中取出平皿,用蜡笔将皿底分为若干等分区域(若菌落稀少,也可)从温箱中取出平皿,用蜡笔将皿底分为若干等分区域(若菌落稀少,也可不分)不分)(2 2)以左手拇指、无名指、小指持握平皿,斜置自然光下,皿底以食指、中指)以左手拇指、无名指、小指持握平皿,斜置自然光下,皿底以食指、中指衬托显出昏暗背景以利菌落观察,右手持蜡笔式钢笔计点菌落数,
10、每数一区,衬托显出昏暗背景以利菌落观察,右手持蜡笔式钢笔计点菌落数,每数一区,于边上标记计数,再用放大镜检查,有无遗漏。合计各区菌落数即为一皿的菌于边上标记计数,再用放大镜检查,有无遗漏。合计各区菌落数即为一皿的菌落总数。如平皿菌落很多不易读数时,亦可选择代表区读计菌落数,然后再求落总数。如平皿菌落很多不易读数时,亦可选择代表区读计菌落数,然后再求出全皿菌落数。出全皿菌落数。5 5、菌落计数的报告、菌落计数的报告(1 1)平皿菌落的选择)平皿菌落的选择选取菌落数在选取菌落数在 30-30030-300 之间的平皿作为菌落总数测定标之间的平皿作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个
11、平皿平均数,其中一个平皿有较大片准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个平皿平均数,其中一个平皿有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落状菌落生长时,则不宜采用,而以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布很均匀,则可于计数数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布很均匀,则可于计数半皿后乘以半皿后乘以 2 2 代表全皿菌落数。代表全皿菌落数。(2 2)稀释度的选择)稀释度的选择规定选择平均菌落数在规定选择平均菌落数在 30-30030-300 之间的稀释度,以平皿菌落数乘以稀释倍数,之间的稀释度,以平皿菌
12、落数乘以稀释倍数,所得菌落总数作为报告。所得菌落总数作为报告。若有两个稀释度,其生长的菌落数均在若有两个稀释度,其生长的菌落数均在 30-30030-300 之间,则应视二者(高稀释度之间,则应视二者(高稀释度菌落数与低稀释度菌落数)之比大小来决定。若其比值小于菌落数与低稀释度菌落数)之比大小来决定。若其比值小于 2 2,应报告平均数;,应报告平均数;若大于若大于 2 2,则报告其中较小数字。,则报告其中较小数字。若所有稀释度其平均菌落数均大于若所有稀释度其平均菌落数均大于 300300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。稀释倍数进行报告。若所有
13、稀释度其平均菌落数均小于若所有稀释度其平均菌落数均小于 3030,则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘,则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。以稀释倍数进行报告。若所有稀释度其平均菌落数不在若所有稀释度其平均菌落数不在 30-30030-300 之间,之间,其中一部分大于其中一部分大于 300300 或小于或小于 3030时,则以最小接近时,则以最小接近 3030 或或 300300 的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。(3 3)菌落数的报告)菌落数的报告菌落数在菌落数在 100100 以内时,按实有数报告;大于以内时,按实有数报告;大于 100100
14、 时,采用时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入法计算,为了缩短数二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入法计算,为了缩短数字后面的零数,也可用字后面的零数,也可用 1010 的指数来表示。的指数来表示。食品微生物检验技能试题二食品微生物检验技能试题二一、肉膏蛋白胨培养基的配制(一、肉膏蛋白胨培养基的配制(6060 分)分)1 1、称量、加热溶解(、称量、加热溶解(2020 分)分)2 2、调值(、调值(1010 分)分)3 3、过滤(、过滤(1010 分)分)4 4、分装(、分装(1010 分)分)5 5、加棉塞(、加棉塞(1010 分)分)二、培养基的灭菌(二
15、、培养基的灭菌(4040 分)分)1 1、包扎(、包扎(1010 分)分)2 2、灭菌(、灭菌(1010 分)分)3 3、摆斜面(、摆斜面(1010 分)分)4 4、无菌检查(、无菌检查(1010 分)分)答案要点答案要点一、配制一、配制1 1、称量加热溶解:称量加热溶解:按配方准确称取牛肉膏按配方准确称取牛肉膏2.52.5克,克,蛋白胨蛋白胨5 5克,克,NaCl2.5NaCl2.5克于的大烧杯中,克于的大烧杯中,取取 450ml450ml 水于水于 800ml800ml 烧杯中加入,烧杯中加入,搅匀,搅匀,加热溶解,加热溶解,待溶液沸腾后,加入琼脂,继续加热使琼脂完全溶化,并不断搅拌,待溶
16、液沸腾后,加入琼脂,继续加热使琼脂完全溶化,并不断搅拌,以免糊底烧焦。最后待冷却后补足水至以免糊底烧焦。最后待冷却后补足水至 500ml500ml。2 2、调、调 PHPH 值值 在未调在未调 PHPH 前,先用精密试纸测定培养基的原始前,先用精密试纸测定培养基的原始 PHPH 值,值,然后滴加然后滴加 1molNaOH1molNaOH 或或 1molHCL1molHCL 调节,直至调节,直至 7.0-7.27.0-7.23 3、过滤、过滤 趁热用四层纱布过滤。一般无特除要求,可省略。趁热用四层纱布过滤。一般无特除要求,可省略。4 4、分装将制好的培养基分装入试管或三角瓶内。注意不要使培养基、
17、分装将制好的培养基分装入试管或三角瓶内。注意不要使培养基沾粘管口或瓶口,沾粘管口或瓶口,以免浸湿棉塞而引起污染。以免浸湿棉塞而引起污染。分装的培养基,分装的培养基,不超过不超过试管长度的五分之一,不超过三角瓶容积的一半。试管长度的五分之一,不超过三角瓶容积的一半。5 5、加棉塞加棉塞 瓶瓶(管)(管)口塞上用非脱脂棉制作的棉塞,口塞上用非脱脂棉制作的棉塞,棉塞形状、棉塞形状、大小、大小、松紧度与试管口完全适合。松紧度与试管口完全适合。加塞时三分之一在管外,加塞时三分之一在管外,三分之二在管内。三分之二在管内。二、培养基的灭菌二、培养基的灭菌1 1、包扎包扎 加塞后,加塞后,将三角瓶的棉塞外包一
18、层牛皮纸或双层报纸,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管,若培养基分装于试管,则以则以 5 5 支或支或 7 7 支在一支在一起,起,再于棉塞外包一层牛皮纸,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。用绳扎好。然后用记号笔注明培养基然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。的名称、组别、日期。2 2、灭菌、灭菌 将培养基于将培养基于 12131213 度湿热灭菌度湿热灭菌 2020 分中。分中。3 3、摆斜面摆斜面 灭菌后,灭菌后,如制斜面,如制斜面,则须趁热将试管口端搁在一根长木条则须趁热将试管口端搁在一根长木条上,调整斜度,
19、使斜面的长度不超过试管总长的二分之一。上,调整斜度,使斜面的长度不超过试管总长的二分之一。4 4、无菌检查将灭菌的培养基放入无菌检查将灭菌的培养基放入 3737 度温箱中培养度温箱中培养 24-4824-48 小时,小时,无菌无菌生长即可使用。生长即可使用。食品微生物检验技能试题三食品微生物检验技能试题三一、淀粉水解实验(一、淀粉水解实验(4040 分)分)1 1、原理(口述)(、原理(口述)(5 5 分)分)2 2、倒平板(、倒平板(1010 分)分)3 3、接种培养(、接种培养(1010 分)分)4 4、路哥氏碘液检验(、路哥氏碘液检验(5 5 分)分)5 5、结果观察(、结果观察(5 5
20、 分)分)6 6、报告(、报告(5 5 分)分)二、平板菌落计数(二、平板菌落计数(6060 分)分)1 1、编号(编号(5 5 分)分)2 2、稀释(稀释(1515 分)分)3 3、取样(取样(1010 分)分)4 4、倒平板、培养(倒平板、培养(1010 分)分)5 5、计算(计算(1010 分)分)6 6、报告(报告(1010 分)分)答案要点答案要点一、淀粉水解实验(一、淀粉水解实验(4040 分)分)1 1、原理、原理 微生物对大分子的淀粉、蛋白质、脂肪不能直接利用,必须微生物对大分子的淀粉、蛋白质、脂肪不能直接利用,必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物利用。依靠产生的胞
21、外酶将大分子物质分解才能被微生物利用。胞外酶主要胞外酶主要为水解酶,为水解酶,可将大分子物质水解为较小的化合物。可将大分子物质水解为较小的化合物。如淀粉酶水解淀粉如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、为小分子的糊精、双糖、双糖、单糖。单糖。这个过程可通过观察细菌菌落周围的这个过程可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实:物质变化来证实:淀粉遇碘会产生兰色,淀粉遇碘会产生兰色,但细菌水解淀粉的区域,但细菌水解淀粉的区域,用用碘测定不产生兰色,表明细菌产生淀粉酶。碘测定不产生兰色,表明细菌产生淀粉酶。2 2、倒平板、倒平板 将固体淀粉培养基溶化后冷却至将固体淀粉培养基溶化后冷却至 5050左右,无菌操作制
22、左右,无菌操作制成平板。成平板。3 3、接种培养用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划接种培养用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划+字接种;字接种;取少取少量大肠杆菌在平板的另一边也作量大肠杆菌在平板的另一边也作+字接种,字接种,将平板倒置在将平板倒置在 3737温箱中温箱中培养培养 16-2016-20 小时。小时。4 4、路哥氏碘液检验、路哥氏碘液检验打开皿盖,滴加少量碘液于培养基上,轻轻旋打开皿盖,滴加少量碘液于培养基上,轻轻旋转培养皿,使碘液均匀铺满整个平板。转培养皿,使碘液均匀铺满整个平板。5 5、结果观察如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已被水解,为阳、结果观察如菌苔周围出现无色透明
23、圈,说明淀粉已被水解,为阳性。根据透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱。性。根据透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱。6 6、报告、报告 填写实验报告填写实验报告二、平板菌落计数二、平板菌落计数1 1、编号、编号 取无菌培养皿取无菌培养皿 9 9 套,分别标明套,分别标明1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6各三套。另取各三套。另取6 6 支盛有支盛有 4.5ml4.5ml 无菌水的试管,无菌水的试管,排列于试管架上,排列于试管架上,依次标明依次标明 1010-1-1、1010-2-2、1010-3-3、1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6。2 2
24、、稀释稀释 用用 1ml1ml 无菌吸管精确吸取无菌吸管精确吸取 0.5ml0.5ml 大肠杆菌悬液放入大肠杆菌悬液放入 1010-1-1的试的试管内,注意试管尖端不要碰到液面,以免吹出时,管内液体外溢。然管内,注意试管尖端不要碰到液面,以免吹出时,管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次,后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次,吸时伸入管底,吸时伸入管底,吹时离开水吹时离开水面,使其混合均匀。另取一支吸管自面,使其混合均匀。另取一支吸管自 1010-1-1试管中吸试管中吸 0.5ml0.5ml 放入放入 1010-2-2试管内,吸吹三次,试管内,吸吹三次,.其余依次类推。其余依次类推。
25、3 3、取样、取样 用三支用三支 1ml1ml 无菌吸管分别精确吸取无菌吸管分别精确吸取 1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6的稀释菌的稀释菌液液 0.2ml0.2ml,对号放入编好号的无菌培养皿中。,对号放入编好号的无菌培养皿中。4 4、倒平板、倒平板 在上述盛有不同稀释度的培养皿中,倒入溶化后冷却至在上述盛有不同稀释度的培养皿中,倒入溶化后冷却至4545左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约 15ml15ml,置水平位置,迅速旋,置水平位置,迅速旋动混匀,待凝固后,倒置于动混匀,待凝固后,倒置于 3737温箱内培养温箱内培养 2424 小时。小时。5
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