离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究.pdf

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1、离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究虞英;蒋惠亮【摘【摘 要】要】以 D311 离子交换树脂为载体,通过离子交换吸附法对 Lipolase 100L 脂肪酶进行了固定化.采用考马斯亮蓝法测定了酶蛋白在离子交换树脂上的吸附率,考察并得到了酶固定化的最佳条件:在 pH 10 缓冲液下,加酶液量为每克预处理过的树脂加入 1.5 mL,吸附时间为 10 h,吸附温度为 35.所得固定化酶用于催化合成月桂酸月桂醇酯,在反应物质的量比为 1:1 时,水质量分数为 8%,在 50 mL 异辛烷有机溶剂中固定化酶用量为 200 mg,反应时间为 210 min,温度为 55

2、的最佳条件下,酯化率可达 91.3%.【期刊名称】【期刊名称】食品与生物技术学报【年【年(卷卷),),期】期】2007(026)004【总页数】【总页数】4 页(P97-100)【关键词】【关键词】脂肪酶;固定化;酶催化;酯化【作【作 者】者】虞英;蒋惠亮【作者单位】【作者单位】江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,化学与材料工程学院,江苏,无锡,214122【正文语种】【正文语种】中 文【中图分类】【中图分类】工业技术第 26 卷第 4 期 2007 年 7 月 食品与生物技术学报 Journal of Food ScienceandBiotechnology V

3、ol.26 No.4Jul.2007 文章编号：1673-1689(2007)04-0097-04 离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究虞英，蒋惠亮（江南大学化学与材料工程学院，江苏无锡 214122)摘要：以 D311 离 子交换树脂为载体，通过离子交换吸附法对 Lipolase lOOL 脂肪酶进行了固定 化。采用考马斯亮蓝法测定了酶蛋白在离子交换树脂上的吸附卒，考察并得到了酶固定化的最佳 条件：在pH 10 缓冲液下，加酶液量为每克预处理过的树脂加入 1.5mL，吸附时间为 10h，吸附温 度为 35。所得固定化酶用于催化合成月桂酸月桂醇酶，在反应物质的量比为 1:1 时，水质量分数为

4、8%，在 50 mL 异辛；民有机溶剂中固定化酶用量为 200 mg，反应时间为 210 min，温度为 55 的最佳条件下，醋化率可达9 1.3%。关键词：脂肪酶；固定化；酶催化；酣化 中图分类号：Q 556 文献标识码：AStudy of Lipase Immobilization onthe ExchangeResinbyAdsorption YU Ying,JIANG Hui-liang(School of ChemistryandMaterials Engineering,Jiangnan University,Wuxi214122,China)Abstract:The immobi

5、lization of lipase(Lipolase 100L)withionexchangeresinbyionexchangeadsorptionwas studied.The optimum conditions forenzyme immobitized as follow:1.5 mL liquidlipasewas addedinto onegramof pretreatedresin,stirred for10hours at35 in buffer ofpH10.Thecatalysisof suchimmobilizedlipasewas estimated inthe e

6、sterificationof!auric acidandlaurylalcohol.The result showed that the yield of the estercan reach at 91.3%when the ratio oflauricacid/laurylalcoholwas0.2:0.2,thedosageofimmobilizedlipasewas200mgin50mLisooctane at 8%water and at 55 after 210min.Keywords:lipase;immobilization;enzymaticcatalysis;esteri

7、fication 近年来，随着绿色化学 的兴起和对节能环保的 重视，有机相酶催化在有机合成中的应用越来越受 到人们的青睐。脂肪酶是一种重要的生物催化剂，在食品、皮革、医药和洗涤剂等许多工业领域中均 有广泛应用1-2）。利用脂肪酶在有机相催化的各种 反应可以合成许多高附加值产品。李瑞等问 研究 了有机相脂肪酶催化合成共辄亚油酸伊谷面醇醋收稿日期：2006 0702.的工艺条件，用高效液相色谱测定脂肪酶催化合成 国醇醋的醋化率，最高可达72.63%。赵庆节等。在有机相中用大孔吸附树脂固定化脂肪酶拆分消 旋荼普生，利用固定化脂肪酶在有机相中能有效地 选择性催化 S 一荼普生与正辛醇发生醋化反应，实

8、现消旋茶普生的拆分。酶催化反应具有条件温和、能耗低、催化效率作者简介：虞英 0981），女，浙江上虞人，化学与材料工程硕士研究生通讯作者：蒋惠亮(1956），男，江苏无锡人，副教授，主要从事油脂化工研究.Email:hlj iang-.en 第 26 卷第 4 期 2007 年 7 月食品与生物技术学报 Journal of Food Science andBiotechnology No.4 Jul.2007 文章编号：1673-1689(2007)04-0097-04 要：以 D311 离 子交换树脂为载体，通过离子交换吸附法对 Lipolase lOOL 脂肪酶进行了固定化。采用考马斯亮

9、蓝法测定了酶蛋白在离子交换树脂上的吸附卒，考察并得到了酶固定化的最佳条件：在 pH10 缓冲液下，加酶液量为每克预处理过的树脂加入 1.5mL，吸附时间为 10 h，吸附温度为。所得固定化酶用于催化合成月桂酸月桂醇酶，在反应物质的量比为1:1 时，水质量分的最佳条件下，醋化率可达 9 1.3%。关键词：脂肪酶；固定化；酶催化；酣化中图分类号：Q 556 Study of Lipase Immobilization ontheExchange ResinbyAdsorption YU Ying,JIANG Hui-liang(School ofChemistry andMaterials Eng

10、ineering,Jiangnan University,Wuxi214122,China)Abstract:The immobilization of lipase(Lipolase 100L)withionexchangeresinbyionexchange adsorptionwas studied.The optimum conditions forenzyme immobitized as follow:1.5 mL liquid lipasewas addedinto onegramof pretreatedresin,stirred for10hours at35 in buff

11、er ofpH 10.Thecatalysisof suchimmobilizedlipasewas estimated inthe esterificationof!auric acidand laurylalcohol.The result showed that the yield of the estercan reach at 91.3%when the ratio of lauricacid/laurylalcoholwas0.2:0.2,thedosageof immobilizedlipasewas200mgin50mLisooctane at 8%water and at 5

12、5 after210min.Keywords:lipase;immobilization;enzymatic catalysis;esterification近年来，随着绿色化学 的兴起和对节能环保的重视，有机相酶催化在有机合成中的应用越来越受到人们的青睐。脂肪酶是一种重要的生物催化剂，在食品、皮革、医药和洗涤剂等许多工业领域中均有广泛应用1-2）。利用脂肪酶在有机相催化的各种反应可以合成许多高附加值产品。李瑞等问 研究了有机相脂肪酶催化合成共辄亚油酸伊谷面醇醋收稿日期：2006 0702.的工艺条件，用高效液相色谱测定脂肪酶催化合成国醇醋的醋化率，最高可达 72.63%。赵庆节等。在有机相中

13、用大孔吸附树脂固定化脂肪酶拆分消旋荼普生，利用固定化脂肪酶在有机相中能有效地选择性催化 S 一荼普生与正辛醇发生醋化反应，实现消旋茶普生的拆分。98 第 26 卷高、质量好等优点。但由于脂肪酶是水溶性的，在 有机相中只能得到分散，不易回收重复使用。将脂 肪酶固定于离子交换树脂上，可克服这些缺点。此 法处理条件温和，酶活力损失少，载体与酶分子的 结合力较物理吸附法牢固问。作者采用 D311 弱碱 性阴离子交换树脂进行脂肪酶的固定化，并采用由 此法得到的固定化酶为催化剂合成了月桂酸月挂 醇醋。实验结果表明，吸附法固定脂肪酶方法简 便，酶活损失少，催化效率高，便于回收利用。1 材料与方法 1.1 实

14、验材料 脂肪酶 Lipolase 100L：诺维信公司惠赠；D311 离子交换树脂：江苏苏青水处理工程集团有限公司惠赠。1.2 实验仪器 SHZ-22 水浴恒温振荡器 z 太仓市医疗器械厂产品；TU-901 双光束紫外可见分光光度计：北京 普析通用仪器有限责任公司产品；W201B 恒温水 浴：上海申顺生物科技有限公司产品。1.3 实验方法1.3.1 离子交换树脂的预处理 离子交换树脂先用蒸馆水浸泡胀润，去杂，然后用质量分数 4%NaOH 和 4%HCI 溶液交替在磁力搅拌器下搅拌浸 泡 10 h，并分别用蒸馆水冲洗至中性，最后用 2 倍体积以上蒸馆水浸泡于 4冰箱中保存备用问。1.3.2 脂肪

15、酶的固定化 称取 1.0g 经预处理的树脂于 50 mL 三角烧瓶中，加入含有一定量酶的缓冲液 5 mL，控制温度恒定，转速 110 r/min，在恒温振荡器中吸附固定。固定完成后，移取一定量的上 清液，测定酶的吸附率。抽滤，用 5 的去离子水 洗涤，得到固定化酶。1.3.3 蛋白质质量分数的检测 考马斯亮蓝法7测定蛋白质的质量分数。取一定量原酶稀释作标准曲线。吸附率（%）（加入的酶蛋白质质量一上清液中游 离酶蛋白质质量）加入的酶蛋白质质量 100%1.3.4 固定化酶的酶交换反应 在 100 mL 的三颈烧瓶中，加入含有月桂酸0.2mol/L 和十二醇 0.2mol/L 的有机溶剂 50 m

16、L，加入一定量的固定 化酶，一定的温度下，搅拌开始反应。定时吸取 1 mL 反应液于锥形瓶中，加入 5 mL(V（苯）:VC 乙 醇）=12 的的溶液，以酣散作指示剂，用 0.025mol/L 的 NaOH标准溶液滴定反应液中的酸值。2 结果与讨论 2.1 脂肪酶的浓度与眼光值的线性关系配制系列浓度的脂肪酶溶液，采用考马斯亮蓝 法测定其吸光值。以脂肪酶浓度为横坐标，蛋白质 的吸光值为纵坐标，再用最小二乘法进行回归，得 标准曲线（见图 1）。所得直线方程为 y=o.0012x（线性相关系数 R2=0.9968）。1.2r;!,62;1.0 L0.8、电 0.60.4。；l 三。200400600

17、80010001200 脂肪酶添加量用 J/mL)图 1 标准幽线 Fig.1 The standardline 由图 1 可知在一定的浓度范围内，脂肪酶的浓度与其在 595 nm 处的吸光值成良好的线性关系，可用于测定未知溶液中游离脂肪酶的含量。2.2 固定化条件的考察 2.2.1 酶液浓度对吸附率的影响 分别称取 8 份经预处理的树脂各 1.0g 于 8 个 50 mL 锥形瓶中，再分别加入不同浓度的酶液 5 mL 进行吸附固定。固定其他吸附条件为：吸附温度 30，吸附时间 24 h，振荡速度 110 r/min。缓 冲液 pH 为 10.0。由图 2 可以看出，随着加酶量的增加，由于一定

18、量的离子交换树脂的交换能力是一定的，一定的 酶与离子交换树脂通过离子交换吸附后达到饱和，所以吸附率开始下降，最佳的酶液浓度为 5.0mL 缓冲液中加入原酶液量为 1.5mL，此时的吸附率可 达 98.26%。1004JAV 白歹 ny 汉、国霄崔医 85800.51.01.52.02.53.0SmL 酶液中加原酶液量mL 图 2 酶液浓度对吸附率的影响 Fig.2 Effect of solubelipase amountonimmobilization 卷高、质量好等优点。但由于脂肪酶是水溶性的，在有机相中只能得到分散，不易回收重复使用。将脂肪酶固定于离子交换树脂上，可克服这些缺点。此法处理

19、条件温和，酶活力损失少，载体与酶分子的结合力较物理吸附法牢固问。作者采用 D311 弱碱性阴离子交换树脂进行脂肪酶的固定化，并采用由此法得到的固定化酶为催化剂合成了月桂酸月挂醇醋。实验结果表明，吸附法固定脂肪酶方法简便，酶活损失少，催化效率高，便于回收利用。1.1 实验材料脂肪酶Lipolase 100L：诺维信公司惠赠；D311 惠赠。1.2 实验仪器 SHZ-22 水浴恒温振荡器 z 太仓市医疗器械厂产品；TU-901 双光束紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司产品；W201B 恒温水浴：上海申顺生物科技有限公司产品。1.3 实验方法 1.3.1 离子交换树脂的预处理 离子交换

20、树脂先用蒸馆水浸泡胀润，去杂，然后用质量分数 4%NaOH 和 4%HCI 溶液交替在磁力搅拌器下搅拌浸泡10h，并分别用蒸馆水冲洗至中性，最后用 2 倍脂肪酶的固定化 称取 1.0g 经预处理的冲液 5mL，控制温度恒定，转速 110 r/min，在恒温振荡器中吸附固定。固定完成后，移取一定量的上清液，测定酶的吸附率。抽滤，用 5 的去离子水洗涤，得到固定化酶。吸附率（%）（加入的酶蛋白质质量一上清液中游离酶蛋白质质量）加入的酶蛋白质质量 100%1.3.4 颈烧瓶中，加入含有月桂酸0.2mol/L 和十二醇 0.2mol/L 的有机溶剂 50 mL，加入一定量的固定化酶，一定的温度下，搅拌

21、开始反应。定时吸取 1mL 反应液于锥形瓶中，加入 5 mL(V（苯）:VC 乙醇）=12 配制系列浓度的脂肪酶溶液，采用考马斯亮蓝法测定其吸光值。以脂肪酶浓度为横坐标，蛋白质的吸光值为纵坐标，再用最小二乘法进行回归，得标准曲线（见图 1）。所得直线方程为 y=o.0012 x 线性相关系数 R2=0.9968）。1.0 L 0.8、电 0.6 0.4。；l 三。200 400 600 800 1000 1200 脂肪酶添加量用 J/mL)图 1 标准幽线 Fig.1 The standardline 由图可知在一定的浓度范围内，脂肪酶的浓度与其在 595 nm 处的吸光值成良好的线性关系，可

22、用于测定未知溶液中游离脂肪酶的含量。2.2 经预处理的树脂各 1.0g 于 8 个 50 mL锥形瓶中，再分别加入不同浓度的酶液 5 mL 进行吸附固定。固定其他吸附条件为：吸附温度 30，吸附时间 242 可以看出，随着加酶量的增加，由于一定量的离子交换树脂的交换能力是一定的，一定的酶与离子交换树脂通过离子交换吸附后达到饱和，所以吸附率开始下降，最佳的酶液浓度为 5.0mL 缓冲液中加入原酶液量为 1.5mL，此时的吸附率可达 98.26%。100 4JAV 白歹 ny 汉、国霄崔医 85 800.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 SmL 酶液中加原酶液量mL 酶液浓度对吸附率的影

23、响Effect of solubelipase amount onimmobilization 第 4 期 虞英等：离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究 99 2.2.2 附时间对吸附率的影响 固定吸附条件为：每克树脂加入含酶液 1.5mL 的缓冲液 5 mL,吸附温度为 30，振荡速度为 110r/min.改变不 同的吸附时间进行酶的固定化，考察吸附时间对吸 附率的影响，结果见图 3。120100 法 80 主 60 昏 4020。10 1520 吸附时间/h 图 3 吸附时间对吸附率的影响 5 25 Fig.3 Effect of adsorbtiontime on immobilizat

24、ion 图 3显示最佳吸附时间为 10 h，说明在酶的固定化中要达到吸附平衡需要较长的时间。这可能 是因为酶是大分子，具有较大的体积，先吸附的酶 对后续酶的吸附具有一定的空间位阻效应，需要一 系列的吸附一解吸过程来实现位置的重排才能达 到最大吸附。2.2.3 吸附温度的选择 恒定不同吸附温度进行吸附固定，其他吸附条件为：每克树脂加入含酶 1.5 mL 的缓冲液 5 mL，吸附时间为 24 h，振荡速度为110r/min.结果见图 4。离子交换反应需要一定 的活化能，温度的升高有利于交换速度的提高，温 度也影响分子热运动的速度，但温度过高又可导致 蛋白质的变性而失活，因此多种因素决定了温度对 酶

25、的固定化过程的影响较为复杂，并存在一个最造 温度范围。10098 飞思 主 96 瞥 94 9220253035404550 温度图 4温度对吸附的影响 Fig.4 Effect of temperature on immobilization 由图 4 可知，最佳吸附温度为 35，这是因为：蛋白质的吸附是一个吸热过程，在温度较低时，酶 不容易吸附到树脂上，随着固定化温度的升高，分 子运动逐渐加剧，载体对酶的吸附量有所提高，但 是由于蛋白质在较高的温度下容易变性失活，所以温度继续升高时，吸附率反而下降。2.3 固定化酶的催化性能 2.3.1 水质量分数对固定化酶催化反应的影响在微水相酶反应中，

26、酶的催化活性存在一最佳水质 量分数，这些适量水充当润滑剂，可使酶的柔性增 大，维持酶的最佳活性，因而称为“必需水”。含水 量低于最佳水质量分数时，酶的构象过于“刚性”而 无法表现催化活力；如果水质量分数高于“必需 水飞酶的结构柔性过大，也容易引起酶活性中心结 构的变化，引起酶的失活。图 5 为有机溶剂异辛烧 中，温度为 35，不同水质量分数的固定化酶催化 醋化反应时的初速度。从图中可知，当固定化酶水 质量分数为 8%时反应的初速度最高。当水质量分 数大于 8%时，其催化醋化反应的初速度明显下降。1d 亏 1.0 日 虱 量。当 原 倒 四 004 8 水质量分数%图 5 水质量分被对催化反应初

27、速度的影晌 12 Fig.5 Effect of water content ofimmobilizedlipaseon the initial velocityof reaction 2.3.2 加酶量对催化反应的影响 在反应物质的量比为 1:l(mol)的条件下，分别加入不同量的含 固定化酶的树脂，其不同的催化效果见图 6。lOOmg-0-200mg企 300mg 骨500mg AUAU 40AaTX 飞倒退曲曲 20OO50100150200250300 反应时间min图 6 加酶量对催化反应的影晌 Fig.6 Effect of immobilized lipaseconcentrat

28、ion on reaction 由图可知，随着加入的固定化酶量的增加，醋 化反应的速度增大，达到平衡的时间也缩短。当加 入 500 mg 固定化酶时，反应 150min 就达到平衡，此时转化率为 93.02%。虞英等：离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究：每克树脂加入含酶液 1.5mL 的缓冲液 5 mL,吸附温度为 30，振荡速度为 110 r/min.改变不同的吸附时间进行酶的固定化，考察吸附时间对吸附率的影响，结果见图 3。120 法 80 主 60 昏 40 20 10 15 吸附时间/h3 吸附时间对吸附率的影响 Effect of adsorbtiontime on immobil

29、ization 显示最佳吸附时间为 10 h，说明在酶的固定化中要达到吸附平衡需要较长的时间。这可能是因为酶是大分子，具有较大的体积，先吸附的酶对后续酶的吸附具有一定的空间位阻效应，需要一系列的吸附一解吸过程来实现位置的重排才能达到最大吸附。的缓冲液 5 mL，吸附时间为 24 h，振荡速度为 110r/min.结果见图 4。离子交换反应需要一定的活化能，温度的升高有利于交换速度的提高，温度也影响分子热运动的速度，但温度过高又可导致蛋白质的变性而失活，因此多种因素决定了温度对酶的固定化过程的影响较为复杂，并存在一个最造温度范围。飞思 96 瞥 9492 30 3545 50 温度温度对吸附的影

30、响可知，最佳吸附温度为 35，这是因为：蛋白质的吸附是一个吸热过程，在温度较低时，酶不容易吸附到树脂上，随着固定化温度的升高，分子运动逐渐加剧，载体对酶的吸附量有所提高，但是由于蛋白质在较高的温度下容易变性失活，所以在微水相酶反应中，酶的催化活性存在一最佳水质量分数，这些适量水充当润滑剂，可使酶的柔性增大，维持酶的最佳活性，因而称为“必需水”。含水量低于最佳水质量分数时，酶的构象过于“刚性”而无法表现催化活力；如果水质量分数高于“必需水飞酶的结构柔性过大，也容易引起酶活性中心结构的变化，引起酶的失活。图 5 为有机溶剂异辛烧中，温度为 35，不同水质量分数的固定化酶催化醋化反应时的初速度。从图

31、中可知，当固定化酶水质量分数为 8%时反应的初速度最高。当水质量分数大于 8%时，其催化醋化反应的初速度明显下降。d 亏 1.0 日虱量。当原倒四 0 4 水质量分被对催化反应初速度的影晌 Effect of water content of immobilizedlipaseon the initial velocityofreaction 量比为 1:l(mol)的条件下，分别加入不同量的含固定化酶的树脂，其不同的催化效果见图 6。lOOmg-0-200mg 企 300mg骨500mgAUAU40AaT X 飞倒退曲曲 O 150 250 300 反应时间min6 加酶量对催化反应的影晌由

32、图可知，随着加入的固定化酶量的增加，醋化反应的速度增大，达到平衡的时间也缩短。当加入 500mg 固定化酶时，反应 150 min 就达到平衡，食品与生物技术学报 2.3.3 温度对西旨化反应的影响 图 7 是不同温度下，酶催化酶化反应的转化率与时间的关系。从图 中可知，在一定的范围内，温度对酶有一定的激活 作用，能较大提高酶与底物的反应速度。LipolaselOOL 的最适温度为 30 阳，但实验结果表明经固 定化后，在 55 时催化效果最好，说明该酶经固定化 后其热稳定性有了一定的提高。但当温度达到 75 时，固定化酶因热失活作用，导致酶活力的降低。3 结 t 吾 100804 汉昌 60

33、 去主 草草 4020。50100150 图 7温度对酶催化反应的影响第 26 卷-25-o-35 45 骨 55 膏 65 -0-75 250 D311 离子交换树脂为载体，能对脂肪酶进行 有效的固定化。固定化的最佳条件为在 pH 10 缓 冲液下，加酶液量为每克预处理过的树脂加入 1.5mL 原酶液，吸附时间为 10 h，温度为 35。得到 的固定化酶催化合成月挂酸月桂醇醋，在加酶量 4 mg/mL，最佳水质量分数 8%,55 的条件下醋化Fig.7 Effectof temperature onreactionprogresswith immobilized lipase 反应催化效果最

34、好，反应 210 min 转化率可达 91.3%。参考文献（References):1 许建军，张颖脂肪酶的应用研究进展J.江苏食品与发酵，2002,(4):19 21.XU Jian-jun,ZHANG Ying.Advances inapplication research oflipaseJ.Jiangs，Food and Fermentation,2002,(4):19-21.(in Chinese)2 李香春脂肪酶的研究进展JJ.肉类工业，2003,(4):45-48.LIXiang-chun.Advancesresearch of lipaseJ.Meat Industry,200

35、3 沃的：“48.(inChinese)3李瑞，张晓鸣有机相脂肪酶催化合成共辄亚泊酸谷笛声事酶的研究 J.中国油脂，2006,31(2),56-59.LI Rui,ZHANG Xiao-ming.Lipase-catalyzed synthesis of 严sitosterol ester with conjugatedlinoleicacidinorganic solventJ.China Oils and Fats,2006,31(2),56-59.(in Chinese)4赵庆节，余莹，周文瑜等有机相中大孔吸附树脂固定化酶催化拆分消旋茶普生 J.华东理工大学学报，2001,(8):423

36、 一 426.ZHAO Qing-jie,YUYing,ZHOU Wen-yu.Resolution of racemic naproxen catalyzed by lipasefrom candida cylindracea ad sorbed on macroporous resin in organicmedia J.Journal of East China University of Science and Technol 略 y,2001,(8),423-426.(in Chinese)5张艳，江波，陈超 离子交换树脂固定果糖转移酶JJ.无锡轻工大学学报 z 食品与生物技术，20

37、04,23(4):60-64.ZHANGYan,JIANG Bo,CHEN Chao.Immobilizing Fructosyltransferase with Ion-exchange Resin andthe Optimal cndi tionsJ.Journal of WuxiUniversityof Light Industry,2004,23（的：60-64.(in Chinese)6 李再资生物化学工程基础M北京：化学工业出版社，2001.7钱庭宝离子交换剂应用技术M.天津：天津科学技术出版社，1984.8余冰宾生物化学试验指导M.北京：清华大学出版社，2004.9华章熙，徐清洗

38、涤剂酶应用手册 M.北京：中国轻工业出版社，1999.（责任编辑：朱明）,/”,2.3.3 温度对西旨化反应的影响 图 7 是不同温度下，酶催化酶化反应的转化率与时间的关系。从图中可知，在一定的范围内，温度对酶有一定的激活作用，能较大提高酶与底物的反应速度。Lipolase lOOL 的最适温度为 30 阳，但实验结果表明经固定化后，在 55 时催化效果最好，说明该酶经固定化后其热稳定性有了一定的提高。但当温度达到 75 时，固定化酶因热失活作用，导致酶活力的降低。结 t 吾汉昌60 去主草草温度对酶催化反应的影响-25-o-45 骨 55 膏65-0-75 D311 离子交换树脂为载体，能对

39、脂肪酶进行有效的固定化。固定化的最佳条件为在 pH 10 缓冲液下，加酶液量为每克预处理过的树脂加入 1.5 原酶液，吸附时间为 10 h，温度为 35。得到的固定化酶催化合成月挂酸月桂醇醋，在加酶量 4mg/mL，最佳水质量分数 8%,55 的条件下醋化 Effectoftemperature onreactionprogresswith 许建军，张颖脂肪酶的应用研究进展J.江苏食品与发酵，2002,(4):19 21.XU Jian-jun,ZHANG Ying.Advancesinapplication research of lipaseJ.Jiangs，Food and Fermen

40、tation,2002,(4):19-LIXiang-chun.Advancesresearch of lipaseJ.Meat Industry,2003 沃的：“48.(in Chinese)3李瑞，张晓鸣有机相脂肪酶催化合成共辄亚泊酸谷笛声事酶的研究 J.中国油脂，2006,31(2),56-59.LI Rui,ZHANG Xiao-ming.Lipase-catalyzed synthesis of 严sitosterol ester withconjugatedlinoleic acidinorganic solvent J.China Oils andFats,2006,31(2)

41、,56-59.(in Chinese)ZHAO Qing-jie,YU Ying,ZHOU Wen-yu.Resolution of racemic naproxen catalyzed by lipase from candidacylindracea adsorbed on macroporous resin in organic media J.Journalof East China University of Science and Technol 略 y,2001,(8),423-426.(inChinese)5张艳，江波，陈超 离子交换树脂固定果糖转移酶JJ.无锡轻工大学学报 z

42、 食品与生物技术，2004,23(4):60-64.ZHANG Yan,JIANG Bo,CHENChao.Immobilizing Fructosyltransferase with Ion-exchange Resin andtheOptimal cnditionsJ.Journal of WuxiUniv ersity of Light Industry,2004,23（的：60-64.(in Chinese)李再资生物化学工程基础M北京：化学工业出版社，2001.7钱庭宝离子交换剂应用技术M.天津：天津科学技术出版社，1984.8余冰宾生物化学试验指导M.北京：清华大学出版社，2004

43、.,/”,【文献来源】【文献来源】https:/ 型离子交换树脂固定化假丝酵母脂肪酶的研究 J,钱俊青，蒋盛蓝，秦德怀，郭辉，凌春英2.固定酶法催化合成生物柴油.大孔树脂固定化脂肪酶的制备 J,李浔，刘汝宽，王闰珂，肖志红，李昌珠3.离子交换树脂固定接枝脂肪酶 J,ZHANG Ruzhuang，张汝壮，ZHOU Yanbo，周彦波，ZHUMingying，朱明英，LU Jun，鲁军4.离子交换树脂固定接枝脂肪酶的研究 J,Zhang Ruzhuang，张汝壮，ZhouYanbo，周彦波，Lu Jun，鲁军5.树脂吸附法固定 Candida rugosa 脂肪酶 J,宋宝东，宋丽，庞春霞，陈二霞，蒋亚庆