酿酒葡萄品种蛇龙珠亲缘关系分析.pdf

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1、 http:/ 1 酿酒葡萄品种蛇龙珠亲缘关系分析酿酒葡萄品种蛇龙珠亲缘关系分析 姚玉新1 左方梅1 翟衡1 刘来馨2 1.山东农业大学园艺工程与技术学院 泰安 271018 2.烟台中粮长城葡萄酒公司技术科 蓬莱 265600 E-mail: 摘摘 要要 本文利用 36 个 RAPD 引物对 14 个酿酒葡萄品种基因组 DNA 扩增通过聚类分析将其划分为四个类群其中赤霞珠品丽珠梅露汁和蛇龙珠同属于一个类群利用 SSR 技术对该类群含三个不同地区来源的蛇龙珠进一步分析结果表明蛇龙珠赤霞珠品丽珠和梅露汁是 4 个独立的品种三个不同地区来源的蛇龙珠遗传上存在差异欧氏遗传距离在 1.41-2.24

2、之间但明显小于与其它品种的差异与其它品种相比来自蓬莱北沟的蛇龙珠与品丽珠遗传距离最近为 3.16来自昌黎和烟台本地的蛇龙珠与品丽珠的遗传距离分别为 3.18 和 3.32根据调查考证及遗传分析还探讨了蛇龙珠的起源问题 关键词关键词 蛇龙珠RAPDSSR亲缘关系起源 1.引言 1.引言 葡萄是世界第三大水果也是大宗果品中加工比例最高的水果世界葡萄产量的 70以上用于加工葡萄酒 与其他果树品种追新求变不同 酿酒葡萄品种受葡萄酒文化的制约而恪守传统甚至于保守随着国际葡萄酒市场的日益开放主流酿酒品种的集中化雷同化趋势更加明显用于酿造红葡萄酒的品种以解百纳CABERNET香型的系列品种如赤霞珠梅露汁品丽

3、珠等为主流其次是果香型的品种如黑比诺西拉等我国酿酒葡萄栽培和工业化酿造只有百年历史最早的酿酒品种是 1892 年张裕公司建厂后从欧洲引进的其中包括赤霞珠品丽珠这些品种同时还有与这些品种香型类似的品种类型蛇龙珠并与赤霞珠和品丽珠合称为三珠三珠成为我国红色酿酒葡萄的代表特别自 20 世纪 90 年代末红葡萄酒盛行以来赤霞珠和蛇龙珠成为发展酿酒葡萄的首选品种 在很长一段时间内国内同行都认为蛇龙珠与其他二珠一样也是法国品种 随着改革开放国际交流的增加 欧洲葡萄专家否认了蛇龙珠在他们国家的存在 阿根廷专家在考察了昌黎的蛇龙珠后认为蛇龙珠就是品丽珠1国内有关专家在研究了蛇龙珠的形态特征以后也认为其与品丽珠

4、很相似可能是引进时品种混淆或以后发生变异12近年随着引种繁殖增加人们注意到各地栽培的蛇龙珠形态也有明显差异如果穗大小新梢颜色叶型以及生长势等 使人们更加迫切希望澄清蛇龙珠的身份 而单纯形态学分析很难确认蛇龙珠的来源因此利用日益发展的分子生物学手段研究蛇龙珠及相关品种的亲缘关系不但具有一定的理论价值 也有很大的生产实践意义 本试验收集了与蛇龙珠有渊源关系的波尔多栽培品种如赤霞珠品丽珠梅露汁高特及白索味浓以及其他已知起源于同一个家族或关系密切的不同品种群如黑白比诺霞多丽雷司令和贵人香等共 14 个品种进行了遗传关系分析并利用 SSR 技术重点对 CABERNET 家族品种进一步进行遗传考证 2 材

5、料和方法材料和方法 2.1 供试材料供试材料 RAPD 分析所用 14 个品种为1.高特Cot2.佳利酿(Carignan)3.西拉(Syrah)4.黑比诺(Pinot N)5.白比诺 Pinot B6.贵人香 Riesling Italien7.白诗南 Chenin B8.雷司令Riesling B9.赤霞珠Cabernet sauvignon10.蛇龙珠烟台当地品 http:/ 2 种Cabernet Gemischet11.品丽珠Cabernet Franc12.梅露汁Merlot13.白索味浓Sauvignon B14.霞多丽Chardonny B SSR 分析所用试材为01.法国引进

6、的赤霞珠02.昌黎栽培的蛇龙珠03.品丽珠04.烟台本地栽培的蛇龙珠05.梅露汁06.蓬莱北沟蛇龙珠 所选繁殖材料为葡萄枝条温室催芽取刚萌发的芽或幼叶作为提取 DNA 的材料 2.2 DNA 提取提取 参照遆卫国3王跃进4的方法略有改动 2.3 DNA 扩增及电泳扩增及电泳 RAPD 扩增反应体系 25ul分别为 2.5ul 10buffer,2.0mmol/L mgCl2,100umol/L dNTPs,0.2umol/L 引物,1.5U TaqDNA 聚合酶及 1015ng 模板 DNA热循环程序为94预变性1min45s94变性 30s36退火 45s72延伸 2min45 个循环72延

7、伸 10min SSR扩 增VVMD系 列 为 反 应 体 系20ul分 别 为2.0ul 10buffer,1.0mmol/LmgCl2,200umol/L dNTPs,20pmol 引物,0.5U TaqDNA 聚合酶及 10ng 模板DNA热循环程序为94预变性 2min92变性 30s52退火 30s72延伸 2min40个循环72延伸 7minVVS 系列为反应体系 10ul分别为 1.0ul 10buffer,1.5mmol/L mgCl2,200umol/L dNTPs,25pmol 引物,0.625U TaqDNA 聚合酶及 25ng 模板 DNA热循环程序为95预变性 5mi

8、n94变性 1min50退火 50s50721min72延伸 1min26个循环72延伸 7min RAPD 扩增产物用 1.2%琼脂糖凝胶电泳分离经溴化乙锭染色后紫外凝胶成像系统中分析SSR 扩增产物 6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染观察 2.4 数据分析 2.4 数据分析 利用欧氏距离系数法计算遗传距离D根据遗传距离 D 值利用分析统计软件STATISTACA 对各品种进行 UPGMA非加权算术平均法聚类分析 3 3 结果与分析 结果与分析 3.1 14 个酿酒葡萄品种的 RAPD 分析 3.1.1 RAPD 带形分析 3.1 14 个酿酒葡萄品种的 RAPD 分析 3.1.1 RAPD

9、带形分析 本实验选用了发表过的在葡萄上具有多态性的 36 个引物利用 36 个引物分别对 14个酿酒葡萄品种进行扩增 筛选出 14 个扩增谱带清晰且多态性好的引物用于进一步分析 表114 个引物共扩增出 137 条 DNA 带平均每个引物 9.8 条其中 98 条具有多态性占总条带数的 71.5%每个引物可扩增出 3-10 条多态性带平均为每个引物 7 条多态性带其中引物 X102 多态性谱带最多13 条而多态性谱带百分率最高的是 S462 和 S347(图 1)各为 88.9%3.1.2 品种间遗传距离及聚类分析 3.1.2 品种间遗传距离及聚类分析 利用 RAPD 标记计算不同品种的欧氏距

10、离从表 2 可以看出14 个品种欧氏距离在3.32-7.48 之间 其中梅露汁和品丽珠的遗传距离最近为 3.32 蛇龙珠和黑比诺的遗传距离最远为 7.48 在聚类图上(图 3)我们以 6.0 水平将 14 个品种分成四类类群 1 由霞多丽白比诺黑比诺雷司令贵人香白诗南和西拉构成类群 2 由白索味浓和佳利酿构成类群 3由赤霞珠品丽珠蛇龙珠梅露汁构成类群 4 由高特构成类群 3 中梅露汁和品丽珠的 http:/ 3 遗传距离最近为 3.32赤霞珠和蛇龙珠的遗传距离最大为 6.24二者相差 2.92就蛇龙珠与 表 1.所筛选的 RAPD 引物序列及扩增结果 Table 1.The sequence

11、and results of selected RAPD primers 引物 primer 序列 sequence 扩增谱带数 Number of amplified bands 多态性谱带数 Number of polymorphic bands 多态性 Rate of Polymorphic bands(%)S238 TGGTGGCGTT 10 6 60.0 S462 TCGGCACGCA 9 8 88.9 S347 CCTCTCGACA 9 8 88.9 S450 TCAGAGCGCC 9 4 44.4 S35 TTCCGAACCC 10 9 87.0 S119 CTGACCAGCC

12、9 7 77.8 S262 ACCCCGCCAA 12 9 75.0 S94 GGATGAGACC 9 7 77.8 S445 CCCAGTCACT 9 4 44.4 S446 CCACGGGAAG 10 8 80.0 X102 TACCGTGGCG 13 10 76.9 X101 TTTGCCGCCC 11 6 54.5 X105 CCACACGTAG 11 9 81.8 X115 CGCGTTCCTG 6 3 50.0 总计Total 137 98 71.5 图 1.RAPD 引物 S347 扩增图谱 图 2.SSR 引物 VMD6 扩增图谱 图 1 从左向右依次为PCR marker 1

13、-14.为 1.1 供试材料所编序号 图 2 从左向右依次为PCR marker 01-06 为 1.1 供试材料所编序号 Fig.1.The amplied results of RAPD primers S347 Fig.2.The amplied results of SSR primer pairs VMD6 Fig.1 From left to right:PCR marker114.Experimental sample numbers listed in 1.1Materials Fig.2:From left to right:PCR marker0106.Experiment

14、al sample numbers listed in 1.1Materials 其他品种的遗传距离来看蛇龙珠和品丽珠的遗传距离比较近为 5.20其次是和梅露汁为 6.00再次就是和赤霞珠为 6.24 可见该四个品种在遗传上存在明显差异但又有着密切的关系都属于解百纳家族 http:/ 4 遗传距离 Linkage Distance?2.533.544.555.566.571454867313210121191 图 3.14 个酿酒葡萄品种的 UPGMA 聚类分析结果 样品编号见 1.1 材料 Fig.3.The UPGMA cluster analysis 14 wine grapes See

15、 1.1 Materials for variety name 3.2 赤霞珠3.2 赤霞珠品丽珠品丽珠梅露汁及不同地区栽培蛇龙珠的 SSR 分析 3.2.1 SSR 带形分析 梅露汁及不同地区栽培蛇龙珠的 SSR 分析 3.2.1 SSR 带形分析 本实验利用 12 对 SSR 引物对三个不同地区来源的蛇龙珠赤霞珠品丽珠及梅露汁共6 表 2.所筛选的 RAPD 引物序列及扩增结果 Table 3.The sequence and results of selected RAPD primers 引物primer 序列 sequence 5-3 扩增带数Number of amplified

16、bands 多态性带数Number of polymorphic bands 多态性 Rate of Polymorphic bands(%)VMD5 CTAGAGCTACGCCAATCCAA TATACCAAAAATCATATTCCTAAA 4 4 100 VMD6 ATCTCTAACCCTAAAACCAT CTGTGCTAAGACGAAGAAGA 6 6 100 VMD7 AGAGTTGCGGAGAACAGGAT CGAACCTTCACACGCTTGAT 4 4 100 VMD8 TAACAAACAAGAAGAGGAAT AGCACATCCACAACATAATG 4 2 50 VVS1 A

17、CAATTGGAAACCGCGTGGAG CTTCTCAATGATATCTAAAACCATG 2 1 50 VVS2 CAGCCCGTAAATGTATCCATC AAATTCAAAATTCTAATTCAACTGG 4 4 100 VVS3 TGCCCTATCAATTAGTTCACCTA TCGACTTTGATATATTGATGATT 2 1 50 VVS4 CCATCAGTGATAAAACCTAATGCC CCCACCTTGCCCTTAGATGTTA 2 1 50 VVS5 ATTGATTTATCAAACACCTTCTACAT TAGAAAGATGGAAGGAATGGTGAT 1 1 100

18、总计 Total 29 24 82.8 http:/ 5 个品种/类型进行扩增分析12 对 SSR 引物筛选出 9 对多态性的引物表 29 对引物共扩增出 29 条 DNA 带其中 24 条具有多态性占总条带数的 82.8%每对多态性引物可扩增出1-6 条带平均为每对引物 3.3 条多态性带其中引物 VMD6 多态性最好图 2扩增出 6条多态性带 3.3.2 品种/类型间遗传距离及聚类分析 3.3.2 品种/类型间遗传距离及聚类分析 SSR 分析结果表明蛇龙珠三个类型在遗传上并不是完全相同存在差异在三个类型蛇龙珠之间昌黎的蛇龙珠和蓬莱北沟的蛇龙珠较近遗传距离为 1.41昌黎的蛇龙珠蓬莱北沟的蛇

19、龙珠和烟台本地蛇龙珠较远遗传距离分别为 2.24 和 1.73但蛇龙珠品种之间的遗传差异明显小于蛇龙珠品种和其他品种之间的差异 蛇龙珠与品丽珠最近 遗传距离在3.16-3.32 之间其中蓬莱北沟的蛇龙珠与品丽珠遗传距离最小烟台本地蛇龙珠与品丽珠遗传距离最大烟台本地蛇龙珠和赤霞珠最远昌黎蓬莱北沟蛇龙珠和梅露汁最远 就 6 个品种/类型而言 不包含蛇龙珠三个类型之间遗传距离最近的是梅露汁与品丽珠蓬莱北沟的蛇龙珠和品丽珠都为 3.16与 14 个品种 RAPD 分析结果一致遗传距离最大的是梅露汁和赤霞珠为 4.58与 14 个品种的 RAPD 分析结果不一致,其遗传距离最大的是赤霞珠和蛇龙珠为 6.

20、24 在聚类图上(图 4)我们以 3.3 水平将 6 品种/类型分成 3 类类群 1 由不同来源的蛇龙珠构成类群 2 由品丽珠和梅露汁构成类群 3 由赤霞珠构成 遗传距离 Linkage Distance?11.522.533.544.5010503040602 图 4.不同类型蛇龙珠和其它品种的 UPGMA 聚类分析结果 样品编号见 1.1 材料 Fig.4.Cluster results of three phenotypic Cabernet Gemischet and other cultivars See 1.1 Materials for variety name 3 讨论 3 讨

21、论 3.1 RAPD3.1 RAPDSSR 技术用于葡萄品种鉴定的可行性及分析结果比较 SSR 技术用于葡萄品种鉴定的可行性及分析结果比较 PAPD 由于操作简单引物方便多态性好等优点被广泛用于种质资源研究涉及到苹果56桃7杏8葡萄9等许多果树本研究用了 36 个引物对 14 个品种进行扩增筛选出 14 个多态性引物 共产生了 137 条扩增带 这就意味着对 14 个品种的 137 个位点进行检测其效率是同工酶RFLP 等方法无法比拟的有的品种产生了特有带可作为重要分子性状用于品种鉴定例如引物 S347 扩增出一条约 720bp 的谱带图 1这可作为蛇龙珠品种鉴定的重要分子性状从这些结果来看R

22、APD 可以作为一种有效的辅助分子标记用于葡萄种质资源的研究 http:/ 6 SSR 标记作为一种新的分子标记其检测位点多态性明显高于 RFLP而且重复性优于RAPD与 AFLP 相比不同的材料结果略有不同本研究中多态性条带在 82%以上没有单对引物能将所有品种/类型区分开 但 2 对或 2 对以上引物则能区别开所有品种/类型 其中引物 VMD6图 2能区分 5 个品种/类型并且实验表明同一样品同一引物和相同的扩增条件下扩增条带完全一致重复性和可靠性明显优于本实验的 RAPD 分析SSR 研究的关键是开发引物目前果树上获得 SSR 引物的树种主要有葡萄1011猕猴桃1213越橘14苹果151

23、6桃17以及鳄梨18等研究显示 SSR 可以作为一种强有力的手段用于葡萄等种质资源的研究 3.2 蛇龙珠3.2 蛇龙珠赤霞珠赤霞珠品丽珠及梅露汁的亲缘关系分析 品丽珠及梅露汁的亲缘关系分析 从本文分析结果可以看出 14 个酿酒葡萄品种的分类基本上和传统的栽培学分类相一致,也和葡萄品种的地理/产地分布基本符合 尹克林等2对蛇龙珠赤霞珠和夏桑进行叶形结构数值鉴别并将品丽珠和蛇龙珠的SS上缺裂深比SI下缺裂深比和大夹角相比较两者完全一致并且将蛇龙珠的上下裂刻和叶柄洼与 Galet 描述的品丽珠比较 认为两者一致 还认为品丽珠比赤霞珠稍大的果穗以及更化渣的果肉都与蛇龙珠相似因此尹克林等推测蛇龙珠可能就

24、是品丽珠罗国光研究认为蛇龙珠是品丽珠经过长期选择形成的新品系12 有关蛇龙珠与其他三个品种的亲缘关系 前人仅进行了形态学分析和栽培学比较 本试验用 RAPD 和 SSR 标记技术分析的结果认为蛇龙珠属于解百纳家族的一员是一个独立的品种蛇龙珠的基因型和品丽珠赤霞珠之间的遗传关系比较近但差异很明显和供试的其他酿酒葡萄品种则差异较大 蛇龙珠品种下存在着较多的生态变异类型 类型间也存在着较明显的基因型差异张裕公司采用液相气相色谱质谱等现代分析技术确定了构成张裕解百纳葡萄酒的蛇龙珠品种有 4 个不同的类型来自 ,2003-11-12 赤霞珠品丽珠及梅露汁三者之间的亲缘关系较近从栽培历史看他们都起源于法国

25、西部是波尔多地区的三大主栽品种形态学特征较为相近特别是其果实和葡萄酒含有CABERNET 的典型香型即青椒或青草香含有吡臻化合物Bowers 等19用 RFLP 等分子标记技术对三个品种进行了亲缘关系研究 认为赤霞珠和品丽珠的亲缘关系最近 其次是和梅露汁赤霞珠是白索味浓和品丽珠杂交后代20而本研究用 SSR 标记获得的结果认为梅露汁和品丽珠的亲缘关系最近其次才是和赤霞珠这和罗素兰21的研究结果一致这说明不同地区的同一栽培品种可能会有差别 3.3 关于蛇龙珠来源的探讨 3.3 关于蛇龙珠来源的探讨 我国第一次大规模的引进酿酒葡萄是 1892 年爱国华侨张弼士在烟台创建张裕葡萄酿酒公司随后从欧洲但

26、没有留下具体引种国家的文字记载引进 129 个酿酒品种的苗木栽培于西山和东山葡萄园据悉第一批苗木因为运输问题没有成活翌年又引进了第二批均以外文名字记录为方便起见公司给每个品种进行了数码编号葡萄结果数年并酿酒之后张裕公司邀请当时的文人墨客到张裕公司的葡萄园里对照着每棵葡萄回味着葡萄酒给每个品种命名 就这样产生了各种富有诗意的葡萄品种中文名称并一直沿用至今 1#玛瑙红2#大宛红 3#大宛香 4#品丽珠 5#蛇龙珠 6#赤霞珠 7#冰雪丸17#雷司令 18#李将军25#贵人香72#紫北塞129#玫瑰香直到上世纪的七十年代张裕公司葡萄园的老工人还能准确地把每一个葡萄的编号和名称对应起来 因此可以肯定最

27、早蛇龙珠和赤霞珠 品丽珠及梅露汁都是当时张裕公司同时引进并命名的 长期以来 由于大多数酿酒品种都起源于法国 人们一直以为蛇龙珠与赤霞珠等品种一样也是法国品种当 1960 年原北京农业大学编写我国第一本葡萄栽培学教材时罗国光教授查阅了 6 卷苏联葡萄志 却没有找到蛇龙珠的外文资料 在其随后多年查阅的各国葡萄文献和品种志中均没有发现关于蛇龙珠 Cabernet Gernischt 的任何记载有关 Gernischet http:/ 7 的词义在英法和德文的词典中都无法查到直到 1998 年一次偶然的机会罗国光教授遇到了一位精通德文的人才知道 Cabernet Gernischet 中的 Gerni

28、schet 是德文 Gemishet的误写Gemishet 是动词 Mischen 的过去分词意思是混合的混杂的很可能是当时记录人将标签上的手写体 m 看成了字母 rn基于这一点罗国光教授认为最初引进张裕公司的蛇龙珠是一批混合的 CABERNET并推测我国葡萄生产中现有的蛇龙珠实际上是经过长期人工选择的品丽珠无性系或生物型他们既不同于赤霞珠也不同于一般的品丽珠而是在中国条件下选育出的品丽珠新品系可能不止一个 1998 年 9 月阿根廷的葡萄专家C.TIZIO 先生在罗国光教授陪同下考察了青岛烟台和昌黎等地的 78 个蛇龙珠葡萄园根据叶片和果实的基本特征 C.梯佐认为蛇龙珠就是品丽珠而非什么新的

29、品种 然而有关蛇龙珠的来源仍然疑窦丛生首先是苗木的来源/输出国问题由于没有原始的档案保留在最早的记录中写明从欧洲法国意大利进口22而我们推测苗木从法国进口的可能性小于从奥地利进口的可能性 理由之一是 当时张裕公司的第一任酿酒师是奥地利人讲德语而且有的品种如蛇龙珠 Cabernet Gemischet 是用德语标注的而且这些标注是在出口国内完成的 不是到达烟台后才写的 如果是由于苗木达到烟台后因为散了捆植株混乱而由奥地利酿酒师来写是不会出现 Gemischet 写成 Gernischet 这样的笔误理由之二是 进口的品种包含了东 西欧多个国家的原产品种 具有明显的第三国引种迹象例如意大利品种贵人

30、香 德国品种雷司令不可能在法国栽培并育苗 其他一些东欧品种也是法国所没有的而从意大利进口的可能性更小因为其中很少有意大利的典型品种因此合理的推测是这些品种是由奥地利从各国引种栽培的后来因张裕公司的需求而出口到了中国 至于蛇龙珠为什么被称为 cabernet gemischet 我们推测 当时奥地利引进的 Cabernet 解百纳系列品种在长期栽培过程中发生了较多变异 由于那时侯还没有人工品系选择 因此这些变异类型也一直不曾被选择确定或命名 再者由于那时没有现在这么正规的苗木繁殖公司和育苗规定 当张裕公司需要苗木时 人们极有可能从葡萄生产园内直接剪下枝条进行育苗由于人们既不能把这些变异类型的枝条

31、/苗木写作 Cabernet sauvignon-赤霞珠也不能写成 Cabernet franc-品丽珠但知道这是 Cabernet 的变异因此就写上了 Cabernet gemishet出口到了中国这也可以解释为什么在国外到处查不到这个品种名称的原因 关于蛇龙珠的多型性问题根据张裕公司退休的老工程师冯贻标先生回忆当他 1952年进入张裕公司时葡萄园还保留有 32 个号的品种老工人对他说当时进口的葡萄品种里有很多具有生草味或 Cabernet 味的品种后来工作中他发现仅在蛇龙珠编号种植的小区内就有多个类型第一种他认为是最好的果穗较大果粒也较其他类型大丰产性好与其他类型的区别是秋季老叶呈绿色不变

32、黄不卷边第二种类型是秋季老叶变红并且翻卷第三种类型是秋季老叶变黄色但不翻卷还有一种类型生长势很旺几乎坐不住果这也证明了葡萄品种的易变性当时在烟台地区推广繁殖的主要是第一种类型但由于是在葡萄园内直接剪枝条外卖 在需要量大时其他类型的枝条也同时混杂在一起进入社会 因此造成了现在各地栽培的蛇龙珠类型不一致的现象 由以上研究可以推论 蛇龙珠主要是从输出国完成了品种变异和变型 葡萄品种在栽培中发生生物型变异是常有的事国外已经开展了大量的品种品系鉴定如法国的赤霞珠有15 个品系黑比诺有 45 个品系我国在这方面的研究还是空白蛇龙珠是与品丽珠和赤霞珠亲缘关系很近的品种但要确定蛇龙珠的直接亲本还需要进行大量的

33、研究工作 参考文献 参考文献 1 罗国光.葡萄品种蛇龙珠是否就是品丽珠关于蛇龙珠起源问题的探讨.果树科学1999163161164 http:/ 8 2 尹克林,梁武,诸葛宏庆.酿酒葡萄品种 蛇龙珠 的叶形结构数值鉴别.园艺学报 1998 25 2189190 3 遆卫国.葡萄不同部位提取 DNA 得方法研究.山西师范大学学报(自然科学版),2002,16(1):6365 4 王跃进Lamikanra Olusola.检测葡萄无核基因 DNA 探针的合成与应用.西北农林科技大学学报自然科学版20023034246 5 李汝刚.分子标记在苹果品种鉴定中的应用.生物技术通报199711721 6

34、祝军周爱群王涛等.苹果 RAPD 分析体系的建立.果树科学20001717072 7 程中平陈志伟胡春根等.油桃品种的 RAPD 分析.中国农业大学学报2002736368 8 沈向郭卫东吴燕民等.杏 43 个品种资源的 RAPD 分类.园艺学报20002715556 9 张立平林伯年沈德绪等.葡萄属 RAPD 分类研究.园艺学报1998252191193 10 Bowers J.E.,Dangl G.S.,Vignani R.et al.Isolation and characterization of new polymorphic simple repeat loci in grape(

35、Vitis Vinifera L.).Genome,1996,39:628633 11 Scott KD,Eggle P,Seatox G,et al.Analysis of SSRs derived from grape ESTSJ.Thero Appl Gene,2000,100(5):723726 12 Huang WG,Cipriani G,Morgante M,et al.Microsatellite DNA in Actinidia chinensis:isolation,characterization in related species J.Theor Appl Genet,

36、1998,97:12691278 13 Ciptiani G,Lot G,Huang WG,et al.AC/GT and AG/CT microsatellite repeats in peachPrunus persica(L.)Batsch:Isolation,characterization and cross-species amplication in prunusJ.Theor Appl Genet,1999,99:6572 14 Kijas JMH,Thomas MR,Fowsler JCS,et al.Integration of trinuleotide microsate

37、llites into a linkage map of citrusJ.Theor Appl Genet,1997,94:701706 15 Guilford P,Prakash S,Zhu JM,et al.Microsatellites in Malus domestica(apple):abundance,polymorphism and cultivar identificationJ.Theor Apple Genet,1997,94:249254 16 Gianfranceschi L,Seglias N,Tarchini R,et al.Simple sequence repe

38、ats for genetic analysis of appleJ.Theor Appl Genet,1998,96:10691076 17 Pancaldi M,Kacar Y,Kuden AB,et al.Using microsatellite sequence from peach for fingerprinting and genealogica analysis of almondJ.Rivista di Frulticoltura e di ortot loricoltura,1999,61(11):7073 18 Sharon D,Cregan PB,Mhameed S,e

39、t al.An integrated genetic linkage map of avocadoJ.Theor Appl Genet,1997,95:911921 19 Bowers J.E.,Dangl G.S.,Vignani R.et al.Isolation and characterization of new polymorphic simple repeat loci in grape(Vitis Vinifera L.).Genome,1996,39:628633 20 Bowers J.E.,Meredith C.P.The parentage of a classic w

40、ine grape Cabernet sauvignon.Nature Genet.1997,16:8487 21 罗素兰,贺普超,郑学勤.中国野生葡萄遗传多样性的 RAPD 分析.植物学报2001432158163 22 张裕公司.张裕公司葡萄品种特性记载油印资料.195713 Phylogenetic Analysis of Wine Grape cultivar Cabernet Gernischet YuXin YAO1 FangMei ZUO1 Zhai Heng1 LaiXin LIU2 1College of Horticulture,Shandong Agriculture U

41、niversity Taian 271018 2Yantai COFCO Winery,Penglai 265608 http:/ 9 Abstract Cabernet Gernischet is an important grape cultivar in China used for wine.However,its genetic origin is not clear yet.In this study,depending on the RAPD(Random Amplification Polymorphism DNA)analysis with 36 primers,14 win

42、e grape cultivars were classified into four groups by UPGMA(unweighted pair group method using arithmetic average)cluster analysis.Four cultivars of them,i.e.Cabernet Sauvignon,Cabernet Gernischet,Cabernet Franc and Merlot,belonged to the same group.The SSR(Simple Sequence Repeat)analysis further in

43、dicated that they were four independent cultivars.Also,the results from SSR analysis showed that 3 phenotypes of Cabernet Gernischet sampled from different regions were genetically distinct with Euclidean distances ranging from 1.41 to 2.24,which were much smaller than those among distinct cultivars

44、.Comparing with other cultivars,the phenotype of Cabernet Gernischet from Beigou at Penglai was the closest to Cabernet Franc with the Euclidean distance of 3.16,and followed by Changli and Yantai with the Euclidean distances of 3.18 and 3.32,respectively.The historical origin of the cultivar Cabernet Gernischet was investigated and discussed.Key words:Cabernet Gernischet;RAPD;SSR;genetic relationship;historical origin