酿酒分析.doc

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1、2022年-2023年建筑工程管理行业文档 齐鲁斌创作第十章葡萄酒中铁和铜的测定一、概述铁属于葡萄酒中的微量成分，正常工艺加工的葡萄酒含铁量在5mg/L左右。葡萄酒含铁含量会普遍较高。原因主要是外界的污染，即在葡萄酒的酿造过程中接触了含铁物质。铁含量高会产生不良影响：酒的稳定性下降，产生浑浊、沉淀。加速葡萄酒的氧化利衰败过程。我国葡萄酒标准规定：葡萄酒的含铁量应小于或等于8.0mg/L。铁的测定方法： （一）原子吸收法（二）邻菲罗啉比色法（三）磺基水杨酸比色法（一）原子吸收法特点: 干扰少、准确、快速（二）邻菲罗啉比色法特点： 灵敏度高，显色稳定；诸多比色法中一个较好的方法；国际标准化组织推荐

2、使用的方法。（三）磺基水杨酸比色法比较准确、可行，操作简单，标准把此法列为第三种方法。一、原子吸收分光光度法1、原理将处理后的试样导入原子吸收分光光度计中，在乙炔-空气火焰中，试样中的铁被原子化，基态原子铁吸收特征波长（248.3 nm）的光，吸收量的大小与试样中铁原子浓度成正比，测其吸光度，求得铁含量。2、试剂与溶液（1）硝酸溶液(0.5)：量取8ml硝酸，稀释至1000ml。（2）铁标准储备液（ 0.1g/L）：称取0.864g硫酸铁铵溶于水，加1ml硫酸，移入1000ml容量瓶中，稀释至刻度。（3）铁标准使用液（ 10mg/L）：吸取10.00ml铁标准储备液于100ml容量瓶中，用0.

3、5硝酸溶液稀释至刻度。（4）铁标准系列：吸取铁标准使用液 0.00、1.00、3.00、4.00、5.00ml分别于5个100ml的容量瓶中，用 0.5的硝酸溶液稀释至刻度，混匀。浓度分别为 0.00、0.10、0.30、0.50ml/L。3、仪器原子吸收分光光度计：备有铁空心阴极灯4、试样的制备 用0.5硝酸准确稀释样品至510倍，摇匀，备用5、分析步骤 标准工作曲线的绘制 ：配制铁标准系列置仪器于合适 的工作状态，调波长至 248.3 nm，导入标准系列溶液，以零管调零,分别测定其吸光度。以铁的含量对应吸光度绘制标准工作曲线（或者建立回归方程）。试样的测定：将试样导入仪器，其吸光度，然后根

4、据吸光度在标准曲线上查得铁的含量（或带入回归方程计算）。结果计算X=AFA试样中铁的含量，mgL；F样品稀释倍数。所得结果应表示至一位小数。 注意事项： 空心阴极灯充分预热。 调节乙炔和空气比例，调节喷嘴和灯的位置，调节能量增益，提高信号响应，提高检测灵敏度。 调节样液浓度使其中铁含量在标准系列范围内。二、邻菲罗啉比色法1、原理样品经消化处理后，试样中的三价铁在酸性条件下被盐酸羟胺还原成二价铁，二价铁与邻菲罗啉作用，生成红色螯合物，其颜色的深浅与铁的含量成正比。用分光光度法进行铁含量的测定。 (1)消化，将样品中的有机物分解为碳和水，然后变为气体逐出。 (2)还原：样品中的铁变为三价铁离子，用

5、盐酸羟胺将其还原为二价铁。(3)显色：二价铁离子与邻菲罗啉发生显色反应，生成红色螯合物。2、试剂与溶液浓硫酸过氧化氢（30%）氨水（25%-28%）盐酸羟胺溶液 (100gL)：称取100g盐酸羟胺溶解并稀释至1000ml，于棕色瓶中低温贮存。(5) 盐酸溶液(1+1)(6) 乙酸-乙酸钠溶液(pH4.8)：称取272g乙酸钠，溶解于 500ml水中，加200ml冰乙酸，加水稀释至 1000ml。(7）邻菲罗啉溶液(2g/L)：称取邻菲罗啉0.2g，加少量水溶解(必要时加热)，稀释至100ml。(8) 铁标准贮备液(0.1g/L)：同原子吸收法中2(2)。(9) 铁标准使用液(10mg/L)：

6、同原子吸收法中2(3)。3、仪器 (1) 分光光度计(2) 高温电炉：55025 (3) 瓷蒸发皿：100mL4、试样的制备 干法消化：准确吸取 25.00 ml样品于蒸发皿中，在水浴上蒸干，置于电炉上小心炭化，移入（55025）高温电炉中灼烧，灰化至残渣呈白色，取出，加入10 ml盐酸溶液溶解，在水浴上蒸至约 2 ml，再加入 5 ml水，加热煮沸后，移入 50 ml容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。同时做空白试验。 湿法消化：准确吸取 1.00 mL样品（视含铁量增减）于 10mL凯氏烧瓶中，置电炉上缓缓蒸发至近干，取下稍冷后，加1 mL浓硫酸（根据含糖量增减

7、）、1 mL过氧化氢，于通风厨内加热消化。如果消化液颜色较深，继续滴加过氧化氢溶液，直至消化液无色透明。稍冷，加10 mL水微火煮沸（35） min，取下冷却。同时做空白试验。5、分析步骤1）标准工作曲线的绘制铁标准系列：吸取铁标准使用液0.00，0.20，0.40，0.80，1.00，1.40 mL（含 0.0，2.0，4.0，8.0，10.0，14.0 g铁）分别于六支 25 mL比色管中，补加水至 10 mL，加 5 mL乙酸乙酸钠溶液（调pH至35）、1 mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5 min后，再加入1 mL 1,10-菲啰啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置 30 min，备用。该

8、系列用于标准工作曲线的绘制。在 480 nm波长下，测定标准系列的吸光度。根据吸光度及相对应的铁浓度绘制标准工作曲线（或建立回归方2）试样的测定准确吸取试样 (干法)消化液 510 mL及试剂空白消化液分别于25 mL比色管中，补加水至 10 mL，然后按标准工作曲线的绘制同样操作，分别测其吸光度，从标准工作曲线上查出铁的含量（或用回归方程计算）。将试样（湿法）及空白消化液洗入 25 mL比色管中，在每支管中加入一小片刚果红试纸，用氨水中和至试纸显蓝紫色，然后各加5 mL乙酸-乙酸钠溶液（调 pH至35），以下操作同标准工作曲线的绘制。以测出的吸光度，从标准工作曲线上查出铁的含量（或用回归方程

9、计算）。干法计算：湿法计算：6、误差来源 (1)外来污染该法测铁十分灵敏，极易引入误差，因此所用试剂都应该保证其纯度，所用玻璃仪器都应用 10的硝酸浸泡 24h以上。 (2)加水煮沸湿法消化后的样品如果不加水煮沸，所测结果往往偏低，而且含铁量越高的样品，降低的程度越显著。主要是凯氏烧瓶的瓶壁对铁离子有吸附作用，加热时电炉温度越高，吸附作用越大，通过加水煮沸，或将消化液放置过夜，可以消除这种吸附。（3）pH溶液的pH对一些显色反应有很大的影响。邻菲罗啉在 pH39范围内都能与二价铁生成桔红色络合物，虽然都生成桔红色络合物，但其颜色的强度不同，为了准确定量，必须把溶液的 pH调整到相同的水平。先用

10、刚果红试纸对溶液的 pH进行粗调，然后加入缓冲溶液，使各显色溶液的 pH一致。三、磺基水杨酸比色法1、原理样品消化后，试样中的三价铁离子，在碱性氨溶液中(pH810.5)与磺基水杨酸反应，生成黄色络合物，可根据颜色的深浅进行比色测定，反应方程式为：2、试剂与溶液（1）氢氧化铵（11.5）：取100ml的氨水，注入150ml水中， 摇匀。（2）10%磺基水杨酸：称取 10g的磺基水杨酸，用水溶解稀释至 1L。（3）铁标准储备液（ 0.1g/L）：称取0.864g硫酸铁铵溶于水，加 1ml硫酸，移入1000ml容量瓶中，稀释至刻度。（4）铁标准使用液（ 10mg/L）：吸取10.00ml铁标准储备

11、液于 100ml容量瓶中，用0.5硝酸溶液稀释至刻度。4、分析步骤（1）试样的制备干法消化 ：准确吸取25.00ml样品（V）于蒸发皿中，在水浴上蒸干，置于电炉上小火炭化，然后移入（55025）高温电炉中灼烧，灰化至残渣呈灰白色，取出，加入10ml（11）的盐酸溶解，在水浴上蒸发至2ml，再加入5ml水，加热煮沸后，移入50ml的容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，用水稀释至刻度（V1），摇匀，同时做空白试验。湿法消化：准确吸取1.00ml样品(V)于100ml凯氏烧瓶中，置电炉上缓缓蒸发至近干，取下稍冷后，加1ml浓硫酸，1ml过氧化氢，于通风橱内加热消化。如果消化液颜色较深，可继续

12、滴加过氧化氢溶液，直至消化液无色透明。稍冷，加5l0ml水微火煮沸35min，取下冷却，同时做空白试验。 (2) 铁标准系列准确吸取铁标准使用液 0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50ml分别于6支25ml比色管中，补加水至 10ml，分别加5ml磺基水杨酸溶液，用氨水溶液调呈黄色后，再加 0.5mL氨水，然后补加水至刻度，摇匀。（3）试样的测定吸取干法消化的试样 5.00ml和相同量空白消化液分别于 25ml比色管中，或将湿法试样及空白分别注入 25ml比色管中，然后按标准系列的方法同样操作将样品同标准系列目视比色或用分光光度计分别测其吸光度，得出样而中铁的含量。第二节

13、铜含量的测定概述：葡萄酒中铜含量过高易产生浑浊，出现铜破败病；具有催化作用，可以诱发铁的沉淀，控制铜含量对提高葡萄酒的质量，增加其稳定性是十分必要的。我国葡萄酒标准中规定铜1.0mg/L 。GBT150382006葡萄酒 果酒通实验方法标准中列出了两种：一、原子吸收分光光度法二、二乙基二硫代氨基甲酸钠法两种方法测试铜含量数据比较表一、原子吸收分光光度法1、原理将处理后的样品导人原子吸收分光光度计中，在乙炔空气火焰样品中的铜被原子化，基态原子吸收特征波长(324.7nm)的光，其吸收量的大小与试样中铜的含量成正比，测其吸光度，求得铜含量。2、试剂与溶液 (1)硝酸溶液(0.5)：量取5ml硝酸，

14、用水稀释至 1000ml。(2)铜标准贮备液(0.1gL)：称取0.393g硫酸铜，溶于水，移入1000ml容量瓶中稀释至刻度。(3)铜标准使用液(10 m/L)：吸取10.00ml铜标准贮备液于l00ml容量瓶中，用 0.5的硝酸溶液稀释至刻度。(4)铜标准系列：吸取铜标准使用液 0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00ml分别置于6个50ml容量瓶中，用硝酸溶液稀释至刻度。摇匀，该系列用于标准工作曲线的绘制。3、仪器原子吸收分光光度计：备有铜空心阴极灯4、试样的制备根据样品中的含铜量，用0.5的硝酸溶液准确将样品稀释10倍，使稀释后的溶液中的含铜量与铜标准系列相近。5、试

15、验步骤将仪器调整至合适的工作状态下，调整波长至324.7nm，按由低到高的顺序导入标准系列溶液和制备好的样品，分别测其吸光度，以铜的含量对应吸光度绘制标准工作曲线，根据样品的吸光度从工作曲线上查出铜的含量。6、计算二、二乙基二硫代氨基甲酸钠比色法1、原理二乙基二硫代氨基甲酸钠，也称作铜试剂(DDTC)，它在碱性溶液中可与铜离子作用，生成棕黄色络合物，用四氯化碳萃取后比色，反应式如下：2、试剂与溶液3、仪器分光光度计4、试样的制备同铁中邻菲罗啉法。5、试验步骤 (1)铜标准系列：吸取铜标准使用液0.00、0.50、1.00、1.50、1.00、2.50ml分液漏斗中，各补加2mol/L硫酸溶液至

16、20ml，再加入10ml乙二胺四乙酸二钠柠檬酸铵溶液和3滴麝香草酚蓝指示液，混匀，用氨水调加pH（溶液的颜色由黄至微蓝色)，补加水至总体积约40mL，再各加2ml铜试剂和10.00ml四氯化碳，剧烈振摇萃取2min，待静置分层后，将四氯化碳层经脱脂棉滤入2cm比色杯中。(2)标准工作曲线的绘制：将分光光度汁调至合适的工作状态，调整波长至440nm处，分别测铜标准系列的吸光度，根据吸光度及相对应的铜浓度绘制标准曲线(或建立回归方程)。 (3)样品的测定：吸取干法处理的试样 10.00ml和同量空白消化液分别置于125ml分液漏斗中，或者将湿法处理的全部试样及空白消化液分别洗入125ml分液漏斗中

17、，然后，按标准系列方法操作 (湿法处理的样品，以水代替 2mol/L硫酸溶液)，分则测其吸光度，从工作曲线上查出铜的含量。6、计算式中：X样品中铜的含量， g /L；m 1测定用样品从标准曲线上查得铜得质量， g；m 0试剂空白液中铜得质量， g；V 取样体积，ml；第十一章 酚类物质的测定第一节 概述 主要的酚类物质：酚酸 黄酮 花青素 单宁简单酚类物质：（来源于葡萄植株）间位二酚4乙基苯酚4乙烯基苯酚4乙基愈疮木酚 黄酮类：与堪非醇结合为单葡萄糖苷;与槲皮酮结合为单葡萄糖苷;与杨梅酮结合为单葡萄糖苷 花色素：葡萄本身含有的花色素不参与陈年葡萄酒的呈色，参与呈色物质是单宁。 单宁：水解单宁（

18、焦性没食子酸单宁）浓缩单宁（焦性儿茶酸单宁）第二节 单宁的测定一、福林丹尼斯法1、原理单宁类化合物，在碱性溶液中，能将磷钼酸和磷钨酸盐类还原成蓝色化合物，蓝色的深浅程度与单宁含酚基的数目成正比。2、仪器分光光度计 恒温水浴 圆底烧瓶 100ml容量瓶 冷凝管3、试剂（1）福林丹尼斯试剂：在750ml蒸馏水中加入100g钨酸钠，20g磷钼酸，50ml浓磷酸。加热回流2小时，冷却，加入蒸馏水使其达1000ml。（2）碳酸钠饱和溶液：称取20g无水碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，在7080溶解，放置过夜，次日加入少许水合碳酸钠到饱和溶液中做晶种，使结晶析出，24h后过滤后备用。（3）单宁酸标准溶液：称

19、取0.500g单宁酸，用水溶解定容到100ml。4、操作步骤（1）标准曲线的绘制分别吸取 0、0.5、1.0、1.5、2.5、5.0、7.5、10.0ml的单宁酸标准溶液于 50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。分别吸取 1ml上述溶液于 100ml的容量瓶中，加入 70ml的蒸馏水，加入 5ml福林丹尼斯试剂， 10ml的饱和碳酸钠溶液，加水至刻度摇匀。30min后以空白做参比，在 760nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标， 100ml溶液中单宁酸的毫克数为横坐标绘制标准曲线。（2）单宁的提取取10.0020.00g的葡萄浆果研碎后转入 50ml的三角瓶中，加水50ml，放在60的恒温箱中

20、过夜；将清液过滤至 250ml容量瓶中，加 30ml热水在80 水浴中提取20min；试样加入 30ml热水，在 80 水浴中提取 20min，清液转入 250ml容量瓶中；如此重复 34次，将单宁尽量的提取完全，将容量瓶稀释定容至刻度，备用。（3）试样的测定吸取12ml试样溶液于 100ml的容量瓶中，加入 70ml的蒸馏水，加入5ml福林丹尼斯试剂， 10ml的饱和碳酸钠溶液，加水至刻度摇匀。 30min后以空白做参比，在 760nm处测定吸光度。以吸光度在标准曲线上查出相应的单宁含量二、高锰酸钾滴定法1、原理利用单宁的还原性，以靛胭脂为指示剂，用高锰酸钾溶液滴定，样液由蓝色变为黄色时为终

21、点。以活性炭处理葡萄酒，使单宁沉淀，过滤去除单宁，再用高锰酸钾滴定试样，由两次滴定高锰酸钾用量之差计算单宁含量。2、试剂高锰酸钾标准溶液：粉状活性炭;0.1mol/L;高锰酸钾溶液：0.05mol/靛胭脂指示液：称取1.5g靛胭脂，溶于50ml硫酸中，用水稀释至100ml。3、仪器100ml容量瓶、50ml量筒 100ml三角瓶、蒸发皿 玻璃棒、100ml干燥杯 漏斗、滤纸、1000ml烧杯4、操作步骤（1）试样的制备用 100ml容量瓶取酒样 100ml，倾入蒸发皿中，至沸水浴中，加热除去挥发性物质；取下冷却至室温，将残留物返回原容量瓶中，将蒸发皿洗净后一并转入容量瓶中，定容，摇匀得处理液

22、1。另取酒样 100ml于100ml干燥杯中，加 2g活性炭，用玻璃棒搅匀，静置 5min过滤。滤液收集于干燥三角瓶中，得处理液 2。（3）处理液1：用移液管吸取10ml置于1000ml烧杯中，加蒸馏水500ml及10ml靛胭脂指示剂；用0.05mol/l高锰酸钾溶液滴定至金黄色为滴定终点，记录消耗得高锰酸钾毫升数V1。（4）处理液2：用移液管吸取10ml置于1000ml烧杯中，加蒸馏水500ml及10ml靛胭脂指示剂；用0.05mol/L高锰酸钾溶液滴定至金黄色为滴定终点，记录消耗得高锰酸钾毫升数V2。5、计算式中：V1 :滴定溶液中全部可氧化得还原物质得高锰酸钾溶液用量，ml；V2 :滴定

23、溶液中全部可氧化得还原物质得高锰酸钾溶液用量，ml；N:高锰酸钾溶液得当量浓度；Vs:取样量，ml；0.4157：以没食子单宁酸计的单宁1毫克当量相当的克数（g）。第三节 总酚的测定1、原理葡萄酒中的所有酚类物质被福林肖卡试剂氧化。该试剂由磷钨酸和磷钼酸的混合物组成，氧化酚后，会变成蓝色的氧化钨和蓝色氧化钼的混合物。产生的蓝色在750nm有最大吸收峰，与酚的含量成正比，可比色测定其含量。2、仪器分光光度计 恒温水浴 圆底烧瓶 100ml容量瓶 冷凝管3、试剂（1）福林肖卡试剂：市售的试剂可以使用，也可按照下面的方法配制：把100g钨酸钠和25g钼酸钠溶解在700ml蒸馏水中，加入50ml85的

24、磷酸，100ml浓盐酸。加热回流10小时，再加入150g硫酸锂，几滴溴，再沸腾15min，冷却，加入蒸馏水使其达1000ml。（2）碳酸钠饱和溶液称取20g无水碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，在7080溶解，放置过夜，次日加入少许水合碳酸钠到饱和溶液中做晶种，使结晶析出，24h后过滤后备用。（3）酚母液称取0.500g五倍子酸，用水溶解定容到100ml。4、测定步骤（1）标准曲线的绘制用移液管精确吸取 0.0、1.0、2.0、3.0、5.0、 10.0ml酚母液于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。各瓶的酚浓度分别为 0、50、100、150、250、 500mg/L。再分别取6支100m

25、l容量瓶，分别吸取上述溶液各 1ml，各加水60ml，混合，各加入福林肖卡试剂 5ml，充分混匀。在 30s至8min内各加入 15ml碳酸钠溶液，混合后用水定容。将以上各液在 20下放置 2小时，然后在分光光度计上 765nm下测定吸光度。以酚浓度做横坐标，吸光度做纵坐标，绘制标准曲线（2）样品的测定白葡萄酒：吸取1ml样品于100ml的容量瓶中，其他步骤按照（1） 操作。然后在分光光度计上765nm处测定吸光度。红葡萄酒：吸取10ml样品稀释至100ml，再吸取1ml稀释的样品按上法进行测定。5、结果计算以测得样品吸光度数据在标准曲线上查出相应的酚浓度，即为样品中总酚的实际含量。红葡萄酒需

26、乘上稀释倍数。第十三章 葡萄酒中甲醇的测定GB 15037-2006葡萄酒标准中规定甲醇含量：白、桃红葡萄酒250mg/L红葡萄酒400mg/LGBT15038-2006葡萄酒、果酒通用试验方法测定甲醇气相色谱法比色法一、气相色谱法 原理：试样被气化后，随同载气进入色谱柱，利用被测定的各组分在气液两相中具有不同的分配系数，在柱内形成迁移速度的差异而得到分离。分离后的组分先后流出色谱柱，进入氢火焰离子化检测器，根据色谱图上各组分峰的保留值与标样相对照进行定性；利用峰面积(或峰高)，以内标法定量。 测定方法：参照酒精度的测定（气相色谱法）二、比色法原理：甲醇经氧化成甲醛后，与品红亚硫酸作用生成蓝紫

27、色化合物，与标准系列比较定量。1、试剂高锰酸钾磷酸溶液;草酸硫酸溶液;品红亚硫酸溶液; 无甲醇的乙醇溶液甲醇标准使用液：每毫升相当于 0.50mg甲醇。2、仪器:分光光度计3、试样制备：参照酒精度的测定4、分析步骤根据样品乙醇浓度适吸取按上述方法制备的试样（乙醇浓度10，取1.4mL；乙醇浓度20，取1.2mL）。置于25mL具塞比色管中。吸取0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL甲醇标准使用液（相当于0，0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50mg甲醇）分别置于25mL具塞比色管中，并用无甲醇的乙醇稀释至1.0mL。于样品管及标准管中各加水至5m

28、L，再依次各加2mL高锰酸钾磷酸溶液，混匀，放置10min，各加2mL草酸硫酸溶液，混匀使之褪色，再各加 5mL品红亚硫酸溶液，混匀，于20以上静置0.5h，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长590nm处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准色列目测比较。 注意事项：高锰酸钾磷酸溶液应贮于棕色瓶内，防止氧化力下降，保存时间不宜过长。品红亚硫酸溶液 的配制，应贮于棕色瓶中，置暗处保存，溶液呈红色时弃去重新配制。 抗坏血酸的测定原理：还原型抗坏血酸能还原2，6-二氯靛酚染料。该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的

29、样品提取液还原标准染料的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 (一) 2，6二氯靛酚滴定法1原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯血酸含量成正比。2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C维生素C（还原型）OH 2,6-二氯酚靛酚 （氧化型，粉红色）;CH2OH; 维生素C（氧化型）OH 2,6-二氯酚靛

30、酚 （还原型）2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色;在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。 滴定要点吸取5-10m1滤液，置于50m1三角瓶中，快速加入2，6二氯靛酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽快地一滴一滴的加入(样品中可能存在其他还原性杂质，但一般杂质还原染料的速度均比抗坏血酸慢)，以呈现的粉红色在15S内不消失为终点。同时做空白。 说明所有试剂最好用重蒸馏水配制。样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。若测动物性样品，须用10%三氯醋酸代替2%草酸溶液提取。若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。