高效液相色谱仪系统使用与保养标准操作规程.doc

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1、编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程01 of 06制 定 人：新定 替代 制定日期：审 核 人：批 准 人：颁发部门： 质量管理部审核日期：批准日期：生效日期：分发部门总经办质量部生产部物料部销售部工程部生产车间分发数量1目 的：建立高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程，使高效液相色谱仪的操作、清洁和保养规范化、标准化，符合检验操作和GMP的管理要求，使操作人员能够正确、安全、合理的操作。范 围：高效液相色谱仪的使用与保养责任人：化验室主任、化验员内 容：1 编制依据：高效液相色谱仪使用说明书。2 仪器系统的组成：溶剂盘、流动相储液瓶、高压恒流A、B泵

2、头、混合器、进样器、色谱柱、紫外检测器、废液接收瓶及管路、电脑主机及显示器。3 工作原理：将具一定极性的不同溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用高压恒流泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，通过手动进样器注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。4 安装条件：4.1 工作室内应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。4.2 室温保持在1530，湿度在2085%RH范围内。4.3 仪器应平稳的安放在工作台上，周围无机械震动、电磁和静电干扰。4.4 电源电压：220V，50Hz，尽量使用足够功率的稳压器，使电源

3、保持稳定。5操作方法：5.1LC-P100高压恒流输液泵5.1.1仪器启动仪器启动之前，应首先检查仪器的供电系统连接是否正确，供电电压是否正常，供电系统地线的正确连接尤其重要，建议使用稳压电源。电源连接正常之后，一般要再检查液路情况。接好输入输出管路及电源之后，可以打开仪器电源开关。5.1.2参数设置方法仪器启动之后，方可进行参数设置。编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程02 of 065.1.2.1 控制参数：5.1.2.1.1 流量：设置范围：0.001-9.999ml/min 5.1.2.1.2 压力： 上限：0-42.0MPa 初始值：42MPa

4、 下限：0-42MPa 初始值：1.0MPa5.1.2.1.3 工作时间：设置范围：1-99h 初始值：8h 设置此参数可以使泵在无人操作的情况下自动停止泵的运行。5.1.2.1.4 泵的编号：可以设置：A、B、C、D5.1.2.2 参数的设置：5.1.2.2.1 打开电源开关（不要启动LC-WS100工作站）液晶屏幕显示：第一行左 泵准备 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及数值 第三行 压力实测值及数值 第四行 压力上下限 1.0-42.0MPa5.1.2.2.2 按“设定”键液晶屏幕显示： 第一行：请设置参数 第二行：流量及数值 第三行：压力上限及数值 第四行：压力下限及数值此时手形指示

5、符指向流量参数，按增加键和减少键即可改变参数。若要改变压力上限值，继续按设定键，手形指示符指向压力上限，同样方法改变压力下限值。修改了压力下限继续按设定键：液晶屏幕显示：第一行：请设置参数 第二行：工作时间及数值 第三行：压力单位MPa 第四行：泵编号通过此页面可以设置工作时间、压力单位与泵的编号。5.1.3 泵的清洗5.1.3.1 在液晶屏幕显示LC-P100高压恒流泵准备就绪的情况下，按“设定”键7此可进入冲洗状态。液晶屏幕显示：第一行：请设置参数 第二行：按二次启动键开始冲洗 第三行：手形指示符 冲洗 否按“增加键”或“减少键”可以就爱那个冲洗”否”改变到冲洗“是”。液晶屏幕显示：第一行

6、：请设置参数 第二行：按二次启动键开始冲洗 第三行：手形指示符 冲洗 是按1次“启动/停止”键，显示冲洗条件。液晶屏幕显示：编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程03 of 06 第一行左 A(B)泵准备 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及5.000ml/min 第三行 压力实测值及0.1MPa 第四行 压力上下限 1.0-42.0MPa若准备工作还没有做好，并不希望立即进入冲洗状态工作，可以再按一次“设定”键，液晶屏幕显示回复到初始的流量设置状态。液晶屏幕显示为：第一行：请设置参数 第二行：流量及数值 第三行：压力上限及数值 第四行：压力下限及数值此时

7、等待20s，或按1次“启动/停止”键，液晶屏幕转换到： 第一行左 A(B)泵准备 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及5.000ml/min 第三行 压力实测值及0.1MPa 第四行 压力上下限 1.0-42.0MPa5.1.4泵的启动仪器连续使用时，泵不会出现不动现象，但当更换贮液瓶时或泵长期不用，则在开始分析以前需要抽液排气启动。在液晶屏幕显示泵准备就绪的状态下，按“启动/停止”键，即能使泵运行，输出高压液流。这时液晶屏幕显示： 第一行左 A(B)泵运行 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及设置流速 第三行 压力实测值及数值 第四行 压力上下限 1.0-42.0MPa当泵工作了一定时间，输

8、液系统中压力已稳定。液晶屏幕显示： 第一行左 A(B)泵稳定 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及设置流速 第三行 压力实测值及数值并且此时绿色指示灯亮，表示高压恒流泵压力已稳定，可以进行样品分析了。5.1.5 泵的停止运行在液晶屏幕显示泵在运行，或泵压力已稳定的状态下，按“启动/停止”键，高压恒流泵立即停止运行。此时压力显示输液管路中剩余压力，正在逐步减少，等待1s以后，液晶屏幕显示： 第一行左 A(B)泵准备 第一行右 泵运行时间 第二行 流量及设定值 第三行 压力实测值及数值 第四行 压力上下限 1.0-42.0MPa注意：当于LC-WS100工作站连接，并启动LC-WS100工作站时，

9、所有按键不再被响应。编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程04 of 065.2 LC-100UV 紫外检测器5.2.1 工作状态模式：仪器在按下电源开关，接通电源并燃亮氘灯后，进入自检程序及进行波长校正，自检结束即进入工作状态模式，液晶屏幕显示：第一行左：STOP 第一行右：氘灯使用状态及运行和累计时间第二行： 波长及数值 第三行：吸光度 第四行：光强 第五行：日期和时间左上角STOP表示仪器处于待机状态。按“启动/停止”键开始运行，显示“RUN”，右侧0.000（保留时间）开始计时。在运行“RUN”状态，按“启动/停止”键即停止运行，处于待机状态，显示

10、“STOP”。进样器进样时自动控制启动，但不控制停止。右上侧为氘灯使用状态，前一计时表示本次氘灯燃亮计时，后一计时表示氘灯累计使用时间。右上角表示氘灯处于的状态，按“氘灯开关”键即关闭氘灯。5.2.2 参数设置模式：按“设置”键即进入参数设置模式，显示器显示为：第一行：设置波长及数值254nm 第二行：滤波时间0.5秒第三行：输出量程及数值 第四行：光谱扫描再按“设置”键，手形光标逐行下移，选择需修改的参数项，按“增加键”和“减少键”改变数值。而当按4次“设置”键，液晶显示器会变为：第一行：设置时间日期 第二行：氘灯累计使用时间清零。当手形光标在设置波长、滤波时间、输出量程三项时，按“确认”键

11、，即保存所修改的参数并返回到工作状态模式。波长设置：波长设定范围为180-680nm。假如由250nm设置到450nm（或由450nm设置到250nm）。波长数值相差较大，逐一按（）较为费时，此时可按下（）键不松开手指，待显示数据接近450（250），再按一下（）数值既不在改变。若略有不足（略微超过）可再按几次（）键到正确值数。滤波时间常数设置为0.1、0.2、0.5、1、2，单位为秒，按、逐挡变换。输出量程设置为0.001、0.005、0.01、0.01、0.1、0.5、1、2、（单位：AU/FS)按、逐档变换。光谱扫描为由180nm连续扫描到680nm。仪器后方IVFS输出口输出为参照池光

12、强相对电压值，扫描时间大约120秒。当手形光标指向光谱扫描，按确认键后显示屏显示“光谱扫描？”再按确认键，即进入扫描过程。扫描结束后返回到工作状态模式。当手形光标在设置时间日期上时，按确认键，即进入时间日期的设置。可逐项、编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程05 of 06键设置年、月、日、时、分，并按确认键进入下一项设置，指导分设置完成，秒被自动清零，并保存时间日期返回到工作状态模式。氘灯累计使用时间清零是在更换灯之后，工作状态模式显示的氘灯累计使用时间从0：00起始。当手形光标在氘灯累计使用时间清零时，按确认键，屏幕会提示再次确认，只有当再次按确认键

13、后才进入该项功能，否则仅保存修改过的参数而不执行其他任何操作。若数到十秒不按键。仪器会自动保存参数并退出设置状态。时间日期不会自动保存。所设置参数在关不断电时不会丢失LC-UV100检测器可由LC-WS100光谱工作站控制操作，但参数不在LC-UV100检测器及LC-P100高压恒流泵中保存，而使保存在LC-WS100色谱工作站处在的计算机中。在参阅LC-WS100色谱工作站有关的说明书注意：当LC-WS100色谱工作站连接，并启动LC-WS100色谱工作站时，除启动/停止键外的所有按键不再被响应。5.2.3进样完成以上设置后，可以通过进样阀注入待测样品。进行此步操作时仪器须配有7725手动进

14、样阀或其他进样阀；手动进样阀一般带有标准定量管，可根据需要选用10l、25l、50l或其他规格；进样体积低于10l时应使用小体积注射器（10l）进样；载样时手柄置于“LOAD”位置，进样时手柄板至“INJECT”位置，之后按START键，反控就不需要啦。注意：只允许使用平端冲洗注射器和样品注射器向进样阀进样！非标准的注射器可能会刺穿阀芯，划伤密封表面！5.2.4停置条件在仪器不作用时，为安全起见，通常需要切断主电源开关。如果使用水性缓冲剂（特别是含有诸如卤化物一类的腐蚀性盐类）时，泵在停置前应用大量水性溶剂冲洗，然后用有机溶剂冲洗；如果腐蚀盐在系统内保持不动则会严重地减少不锈钢元件的寿命。6

15、仪器保养及注意事项6.1 保持环境清洁、恒温恒湿，通风良好。6.2 仪器必须配备220V电子交流稳压器，防震、防尘、工作时仪器必须接地。6.3 色谱仪进样前，必须用甲醇液冲洗至仪器进入稳定工作状态（基线、泵压稳定）才能进行测试工作。6.4 刚打开泵或换液时，应注意旋开放空阀排气。6.5 换液时压力会先升高，到一定程度后才下降到流动相下稳定压力，操作时应编号：SOP-QA-418-00名称： 高效液相色谱仪使用与保养标准操作规程06 of 06注意压力是否会过高，仪器操作宜低压而不宜高压，高压对泵及色谱柱均有影响。6.6 换液时，必须将泵停止，并将流速调为1ml/min，待泵压至“0”附近时才能

16、进行换液操作。6.7 仪器用完后必须先用5%HPLC甲醇重蒸馏水冲洗1小时左右，再用甲醇冲洗30min至仪器稳定后才能关机。6.8 所用试剂必须是色谱级以上或色谱纯，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。6.9 所用溶液必须经0.45m（最好为0.22m）的微孔滤膜过滤，再用超声波脱气后方可使用。6.10 本色谱仪工作站的内存软件不能随意清除或更换。6.11 本仪器原则上不用于含有缓冲盐的流动相，如一定要用，则仪器用完后必须先用50%异丙醇溶液冲洗4.5小时左右（打开Purge阀，流速为2.00ml/min），然后按5.1（从“换重蒸馏水冲洗”开始）操作。6.12 色谱

17、柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死。对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。流动相使用前必须过滤。每天使用新鲜的蒸馏水，瓶要清洗。6.13 开机时，旋开排液阀，二次蒸馏过的纯化水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 10bar，则应更换Purge阀内的玻璃料。6.14 过滤头脏了（同瓶内砂芯滤膜），用1：1的HNO3超声清洗，再用清水超声清洗。6.15 仪器所用的水用滤膜抽滤2次，流动相用滤膜抽滤2次，最好用0.22m的滤膜，以延长过滤头及柱的寿命。6.16 当显示压力越来越高（压力约为200bar左右），可能要换柱。(注：1bar=100Pa)