尿液蛋白测定.doc

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1、标题：尿液蛋白测定版本号：A修订号：0文件编号：HRYY-SOP-LJ-04发布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日发布部门：管理层编制人：张丽君审核人：张丽君批准人：钱晓伟页码：第1 页 ， 共 5 页尿液蛋白定性试验1 检验目的正常情况下，肾小球滤过膜的孔径屏障及电荷屏障使只有相对分子质量低于70000、主要带正电荷的蛋白质可滤入原尿中，而近端肾小管通过胞饮作用可重吸收原尿中的蛋白质。由于蛋白质的肾小管最大重吸收率极低，一旦肾小球滤过增高或肾小管分泌增多，就使肾小管蛋白质重吸收达到饱和，从而形成蛋白尿。因此检查尿液蛋白含量变化对肾脏疾病的诊断，观察疾病的变化及治疗效

2、果具有重要参考价值。2 检测原理尿液蛋白定性测定方法主要有干化学法、加热醋酸法和磺基水杨酸法。干化学法测定尿液蛋白的原理是在一定的条件下(pH为3.2时)，溴酚蓝产生出阴离子，与带阳离子的蛋白质(主要是白蛋白)结合发生颜色变化。加热醋酸法测定尿液蛋白的原理是加热煮沸可使蛋白质凝固变性，加酸使尿pH接近蛋白质等电点(pH5左右)时，有利于变性蛋白质的沉淀。磺基水杨酸法测定尿液蛋白的原理是磺基水杨酸是一种生物碱试剂，在略低于蛋白质等电点的酸性环境下，其磺柳酸根阴离子可与蛋白质的氨基酸残端阳离子相结合，成为不溶性的蛋白盐而沉淀。3 标本3.1 收集患者清晨新鲜尿液10ml。3.2 标本采集后应立即送

3、到临床检验科体液检验室。3.3 不能及时测定的标本应于28冰箱保存。4 设备和试剂4.1 干化学法：罗氏公司的Miditron Junior尿液分析仪(主机号：)及专用试带。4.2 加热醋酸法：5%醋酸溶液；50%醋酸溶液；饱和氯化钠溶液。4.3 磺基水杨酸法：100g/L磺基水杨酸乙醇溶液：取磺基水杨酸20g，加水至100ml，取此溶液与等量95%乙醇或甲醇液混合。标题：尿液蛋白测定版本号：A修订号：0文件编号：HRYY-SOP-LJ-04发布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日发布部门：管理层编制人：张丽君审核人：张丽君批准人：钱晓伟页码：第2 页 ， 共 5 页5

4、 干化学法的校准步骤5.1 Miditron Junior尿液分析仪每1月对仪器进行校准一次。5.2 仪器校准的操作步骤，详见Miditron Junior尿液分析仪仪器登记文件。6 操作步骤6.1 干化学法操作步骤样本的准备：将编好号的样品放在仪器相应的标本位置； 试剂的检查：仪器开机后，检查各种试剂的位置、体积、批号等，确认无误后方可进行测定；操作方法：测定样本项目必须在仪器校准通过的情况下进行，其操作过程操作步骤详见Miditron Junior尿液分析仪仪器登记文件。6.2 加热醋酸法操作步骤取15150mm试管一支，加尿液约8毫升到试管2/3处，用手指(或试管夹)捏住试管底部，将试管

5、口向上斜置在火焰上，使火焰直接在尿液斜面下约12公分处加热，煮沸；轻轻直立试管，在黑色背景下观察煮沸部分有无白色混浊；滴加5醋酸溶液34滴，再煮沸后，立即观察结果。若尿液有蛋白则加酸后仍显混浊，若为盐类，加酸后即变清亮；结果判断：阴性(-，无蛋白)：清亮无混浊；微量(，10mg/dl以下)：仅于黑色背景时可见白色混浊；弱阳性(+，1050mg/dl)：白色轻度混浊无颗粒及絮状沉淀；阳性(2+，50200mg/dl)：明显白色混浊有颗粒但无絮状沉淀；强阳性(3+，200500mg/dl)：大量絮片状混浊一般不见凝固块出现；极强阳性(4+，500mg/dl以上)：煮沸后凝固成块状有大量絮片状沉淀。

6、6.3 磺基水杨酸法操作步骤1 试管法：取小试管2支，各加清晰弱酸性尿液35毫升，于一试管内加100g/L磺柳酸溶液34滴，轻轻混匀，1分钟后观察结果。另一试管不加试剂作对照。2 凹玻片法：在凹玻片的两个凹孔内，各加清晰尿液35滴(约0.2毫升)，于一凹孔内滴加100g/L磺柳酸溶液1滴，于另一凹孔内不加试剂作对照，在黑色背景下，1分钟后观察结果。3 结果判断：阴性(-)：不显混浊，尿液外观仍清晰透明；微量()：可见轻微混浊，隐约可见；弱阳性(+)：明显白色混浊，但无颗粒出现；阳性(2+)：稀簿乳样混浊出现颗粒；强阳性(3+)：乳浊，标题：尿液蛋白测定版本号：A修订号：0文件编号：HRYY-S

7、OP-LJ-04发布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日发布部门：管理层编制人：张丽君审核人：张丽君批准人：钱晓伟页码：第3 页 ， 共 5 页有絮片状沉淀；极强阳性(4+)：絮状混浊，有大凝块下沉。7 质量控制干化学法每天操作过程中应使用自配的尿液质控液至少做一次质量控制。请参见Miditron Junior尿液分析仪仪器登记文件。加热醋酸法和磺基水杨酸法试验过程中应分别做一次阴性、阳性对照。8 干扰因素尿液标本必须新鲜，变质的尿液会使尿pH发生变化，或者尿液本身过酸、过碱都会影响实验结果。当病人服用奎宁、奎宁丁和嘧啶等药物时，引起尿液呈强碱尿(pH9.0)，超过了试

8、剂带本身的缓冲能力，会使干化学法出现假阳性结果；而用磺柳酸法和加热醋酸法做尿蛋白定性时，因尿液过碱远离蛋白质的等电点出现假阴性结果。不同的尿蛋白测定方法对病人尿液内不同类型蛋白质检测的敏感性不同，测定结果也不相同。经实验证实尿中球蛋白浓度为4000mg/L以下时，干化学法蛋白定性为阴性，只当其浓度达5500mg/L时，才出现可疑反应；白蛋白、球蛋白比值为1:2的蛋白尿，蛋白浓度高达2000mg/L时才会出现阳性(+)反应，干化学法测量球蛋白的敏感性仅是白蛋白的1/1001/50。磺柳酸定性法对球蛋白反应的灵敏度亦较白蛋白低，浓度同时为2000mg/L时，白蛋白出现阳性(+)反应，球蛋白仅为阳性

9、(+)反应；在白蛋白、球蛋白尿中，球蛋白比例增大，则阳性程度减弱。加热醋酸定性法和双缩脲定量法可以对白蛋白、球蛋白显示同样的敏感性多种物质(多为药物)可使尿蛋白不同检查方法呈现出假阳性和假阴性结果。尿液中青霉素浓度达到一定浓度时，可对磺柳酸法产生假阳性；对干化学法产生假阴性。除此之外，尿中含有高浓度有机碘造影剂(如胆影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸盐时，磺柳酸法可呈假阳性，而对干化学和加热醋酸法影响较小。为避免因盐类析出所致假性混浊，因此操作时必须遵照“加热加酸再加热”的程序，以保证检出微量蛋白质。加入的醋酸量也要适当，过多或过少均可使阳性反应程度减弱。加酸过量以至远离蛋白质的等电点，可使阳性

10、反应程度减弱或出现假阴性；加酸太少(或尿液太碱)达不到蛋白质等电点，也可呈假阴性。尿中含高浓度尿酸或尿酸盐时，可呈假阳性。但出现反应与尿蛋标题：尿液蛋白测定版本号：A修订号：0文件编号：HRYY-SOP-LJ-04发布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日发布部门：管理层编制人：张丽君审核人：张丽君批准人：钱晓伟页码：第4 页 ， 共 5 页白不同，加试剂12分钟后出现白色点状物，向周围呈刺状突起，并慢慢形成雾状，加热或加碱可迅速消失。9 计算Miditron Junior尿液分析系统会自动地计算出结果。10 生物参考值区间健康人尿液蛋白定性试验呈阴性。11 实验室解释1

11、1.1 生理性蛋白尿或无症状性蛋白尿生理性蛋白尿指泌尿系统并无器质性病变，而是由于各种体内环境因素对正常机体的影响所导致的尿蛋白含量增多，分为功能性蛋白尿和体位性(直立性)蛋白尿。功能性蛋白尿：功能性蛋白尿是指机体剧烈运动、发热、低温刺激、精神紧张、交感神经兴奋等所致的暂时性轻度的蛋白尿。其形成机理可能是由于上述诸因素使肾血管痉挛或充血，导致肾小球毛细血管壁的通透性增加。一旦诱发因素消失，尿蛋白也迅速消失，此类尿蛋白定量试验0.5g/24小时尿，多见于青少年。体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，是指由于直立位或腰部前突时引起的轻度或中度蛋白尿。其特点为夜间尿蛋白定性为阴性，起床活动若干时间后出现蛋

12、白尿，再平卧后又转为阴性，常发生于青少年，一般随年龄增长而消失。此种蛋白尿的发生机理尚不完全明了，可能与直立时前突的脊柱压迫肾静脉；直立时由于肾向下移动，肾静脉被动扭曲，而使肾脏处于暂时瘀血状态，淋巴血流受阻有关。此类蛋白尿定性试验阳性可达(+)，甚至(+)，但卧床休息后又消失。11.2 病理性蛋白尿病理性蛋白尿指泌尿系统因器质性病变，尿内持续出现蛋白而言。导致蛋白尿的原因很多，通常可归纳为以下5种。11.2.1 肾小球性蛋白尿：肾小球性蛋白尿是由于肾小球滤过膜受损而使通透性增加，滤出较多的血浆蛋白，超过了肾小管重吸收能力。此型蛋白尿最为常见，蛋白尿以白蛋白为主，尿蛋白定量常大于2g/24小时

13、，主要见于肾小球疾病如急性肾小球肾炎，某些继发性肾病如糖尿病肾病，免疫复合物病如SLE等。11.2.2 肾小管性蛋白尿：肾小管性蛋白尿是由于炎症或中毒引标题：尿液蛋白测定版本号：A修订号：0文件编号：HRYY-SOP-LJ-04发布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日发布部门：管理层编制人：张丽君审核人：张丽君批准人：钱晓伟页码：第5 页 ， 共 5 页起近曲小管对低分子量蛋白质的重吸收障碍而导致的以低分子量蛋白质为主的蛋白尿。此类的特点是以2微球蛋白、溶菌酶等增多为主，白蛋白正常或轻度增多，主要见于肾盂肾炎，间质性肾炎，肾小管性酸中毒、重金属(汞、镉、铋)中毒等。11

14、.2.3 混合性蛋白尿：混合性蛋白尿是由于肾病同时累及肾小球和肾小管而产生的蛋白尿。此类特点是白蛋白、低分子量蛋白质和高分子量蛋白质同时增多，主要见于肾小球疾病后期如慢性肾炎、慢性肾功能不全，全身性疾病同时侵犯肾小球和肾小管如狼疮肾炎、多发性骨髓瘤等。11.2.4 溢出性蛋白尿：溢出性蛋白尿主要是血循环中出现低分子量蛋白质(如游离血红蛋白、肌红蛋白及溶菌酶)或本-周氏蛋白过多，肾小球滤过及肾小管重吸收功能均正常而溢出尿液中。此类主要见于多发性骨髓瘤，肌肉严重损伤或急性血管内溶血，髓性单核细胞白血病等。11.2.5 组织性蛋白尿：组织性蛋白尿是指在尿液形成过程中，肾小管代谢产生的和肾组织破坏分解

15、的蛋白质，以及炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白(如Tamm-Horsfall糖蛋白等)。12 异常结果处理尿液蛋白定性试验异常结果需与临床诊断相符合，不符合的结果应复查。13 报告时间与标本保存13.1 尿液蛋白定性试验4小时出结果；病房患者的检验结果报告单，在24小时内发回科室。13.2 尿液蛋白定性试验检查过的标本不保存。14 操作性能尿液蛋白定性试验加热醋酸法敏感度为15mg/dl，磺基水杨酸法敏感度为510mg/dl。尿液蛋白定性试验是一个定性试验，目前还没有其它试验性能指标。15 参考文献叶应妩, 王毓三主编. 全国临床检验操作规程. 中华人民共和国卫生部医政司. 南京. 第二版. 1997.