csq培养液中酵母菌种群数量的变化.doc

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1、 探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化血球计数板血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。计数时，常采用 法，多次取平均值，计算出每mL的酵母菌细胞个数。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（ 01mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的

2、大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即1625=400小方格。每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为01mm，所以计数室的容积为01mm3。在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。下面以一个大方格有25个中

3、方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数（个）如果是16个中方格的计数板，设五个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B则4实验原理1在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。2养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素。3酵母菌计数方法：抽样检测法。 先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计

4、数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。实验步骤(1)将10 mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中。(2)将酵母菌接种入试管中的培养液，先通过显微镜观察估算出10mL培养液中酵母菌的初始数量。 (3)将试管放在25条件下培养。(4)每天定时取样计数酵母菌数量。(5) 以_为横坐标，酵母菌的数量为纵坐标，画出酵母菌种群数量的变化曲线。结果分析时间/天123456平均数量/个（1）酵母菌在培养液中开始呈_增长，经过一段时间的增长后，数量趋于稳定，呈_增长。增长曲线的总趋势是先增加再降低。原因是 (3)影响酵

5、母菌种群数量的因素可能有养料、温度、pH空间及有害代谢废物等探究思路 怎样进行酵母菌的计数。对一支试管中的培养液(可定为10ml)中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测的方法：先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。盖玻片下，培养液厚度为0.1mm，可算出10ml培养液中酵母菌总数的公式：2.5104x(x为小方格内酵母菌数)注意：1、整个实验过程中，从静置的试管中取培养液计数应：从试管中吸

6、出培养液进行计数之前，应 目的是 。如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当 ？ （摇匀试管取1mL酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以n2.5104，即为1mL酵母菌液中酵母菌个数。）2、对于压在小方格界线上的酵母菌，应当怎样计数？本实验需要设置对照？如果需要,请讨论对照组应怎样设计和操作，如果不需要，请说明理由。不需要，本实验旨在探究培养液中酵母菌在一定条件下的种群数量变化，只要分组重复实验，获得平均数值即可。需要做重复实验吗？ 不用重复，只要分组重复实验获得平均值即可。怎样记录结果？记录表怎样设计？(注：菌数2.5104个)起始1234567如果一个小方格内酵母菌过

7、多，难以数清，应当采取怎样的措施？ 摇匀试管取1mL酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以n2.5104，即为1mL酵母菌液中酵母菌个数。对于压在小方格界线上的酵母菌，应当怎样计数？只计数相邻两边及其顶角的酵母菌数。分析： 1、根据实验数据可得到右图所示的增长曲线； (2)增长曲线的总趋势是先增加后降低，原因是在开始时，培养液中营养充足、空间充、裕、条件适宜，因此酵母菌大量繁殖，种群数量剧增；随着酵母菌数量的不断增多，营养消耗、PH变化等，使生存条件恶化。 （三）实验评价 1、问题：用每个小组的记录数值所描种群数量的变化曲线与平均值作出的曲线相比相似程度怎样？试作出解释。 2

8、、评价：相似但不重合，各实验小组在用血球计数板抽样检测时，由于酵母菌不均匀分布在各小方格中，计数小方格的酵母菌密度与培养液中的密度不一致，而全班各组的平均值与培养液密度较接近，所以小组曲线不能与各组平均值曲线重合。酵母菌计数方法：抽样检测法。先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普

9、通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸

10、吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目400104稀释倍数注释：培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。三方法步骤： 提出问题作出假设讨论探究思路制定计划实施计划按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录分析结果，得出结论将记录的数据用曲线图表示出来。（一）提出问题：酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温度会影响酵母菌的生长吗？养分会影响酵母菌的生长吗？（二）设计实验：将24支试管分成ABC三组，每组8支。A组为实验组，装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度28。B组装培养液10 mL，酵母菌母液0.1m

11、L,环境温度5，与A组形成温度条件对照。C组不装培养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28，与A组形成营养条件对照。（三）实验操作：1配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；2预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌水到C组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。3用高压蒸汽灭菌锅灭菌；（无菌条件避免其他菌）4接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）5培养：将 A、C试管置

12、于 28的恒温箱中培养。将 B试管置于5的恒温箱中培养。（5的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5时代替。）6计数和记录：本实验为7天，每天取样时间大体一致，每次每组按序号取一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进行细胞计数，后立即将数据填到记录表格中。思考题1：如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？ （四）分析结果，得出结论；将记录的数据用曲线图表示出来。参考1：一次实验数据记录表 次数12345678时间/h024487296120144168酵母菌数（106.mL-1）A0.85.25.64.820.8

13、0.40.08B0.81.222.83.23.63.23C0.80.40.100000参考2：出A、B、C各个处理的曲线图从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管轻轻振荡几次，为什么？生：保证每次抽样是随机的，这样能减小误差。师：本探究实验需要对照吗？如果需要，应该如何设计？生：需要，对照组改变培养液成分，其他条件不变，观察酵母菌数量变化是否相同。师：需要做重复实验吗?生：需要，因为每次实验都存在偶然性，做重复实验更加准确，更能说明问题。师：如果一个小方格内酵母菌过多，很难数清，应当采取怎样的措施？生：可以先稀释，再计数。但是最后计算时应乘以稀释倍数。师：对于压在小方格线上的酵母菌，应当怎样

14、计数？回顾前一节用样方法调查种群密度时的处理方法。生：顶边、左边和左角处的计算在内，其余不计。师：如何记录结果？每天什么时候计数？计数时，大致数几个小方格？如何进行对照实验？重复实验如何进行？小组如何分工？等等某同学进行了实验探究：培养液中酵母菌种群数量的动态变化实验材料：酵母菌菌种、无菌肉汤培养液、试管、血球计数板（1mm1mm，1625型如右图）、滴管、显微镜等。实验步骤：第1次实验：将一定量的酵母菌种置于无菌肉汤培养液中，搅拌均匀。取血球计数板，在计数室上盖上盖玻片，用滴管滴适量含有酵母菌的肉汤滴于盖玻片的边缘，用吸水纸吸去多余的培养液。立即将上述计数板置于显微镜下进行观察。将数据填于事

15、先设计好的表格中。实验结束对血球计数板进行清洗。以后每天相同时间进行相同步骤的实验，只到实验结束。该同学使用的计数板如右上图，为16个中方格。16个中方格中的酵母菌数目如下表：方格号12345678910111212141516酵母菌数目512520497511508499501503531488514489522496468519分析以上材料，回答下列问题：从实验步骤上看，有多处不足，如计数板在使用之前应、吸去多余培养液后还要，及进行重复实验等。用血球计数板计数，应将培养液进行适当的稀释，使计数板的每一小方格内的酵母菌数在510个为宜，从表格中数据看，该同学存在的问题是。从记录表格看，该同学

16、对血球计数板的计数规则不清楚。事实上没有必要将16个中方格中的数据全部进行统计，只需统计4个中方格即可，即图中的号中方格。该同学在计数每一小方格内的酵母菌时，发现很多小方格的四条边上也有酵母菌，他就看菌体的大半还是小半在计数方格内，若菌体超过一半的体积在该方格内就计数，否则不计数。你觉得该同学的计数方法正确吗？。请加以分析。添加培养液后要吸去多余的培养液，其目的是。若血球计数板的每个小方格中的酵母菌数平均为21个（原液被稀释了20倍），则10mL培养液中的酵母菌数为个。（1）温度、营养物质对酵母菌生长的影响；（2）温度、营养物质；（3）排除杂菌对实验的干扰；（4）2 培养基中营养物质的大量消耗，代谢废物的积累，pH值的改变，使环境阻力增大（5）环境容纳量 A组的培养温度更适合酵母菌的繁殖，环境阻力小。（6）如下图：（7）酵母种群数量与营养物质(或废物、pH、溶氧等)的变化关系技术要求(1)显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应遵循“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则计数。(2)从试管中吸出培养液进行计数前，需将试管轻轻振荡几次，目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，减小误差。(3)结果的记录最好用记录表， (4)每天计数酵母菌数量的时间要固定。(5)溶液要进行定量稀释。 (6)计算10 mL菌液的数量。