7.3 体内药物分析技术-分析方法学验证.pdf

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1、体内药物分析技术-分析方法学验证 Method validation 大 纲 法规 验证项目-特异性-标准曲线-定量下限-精密度、回收率-稳定性-基质效应、溶血效应、高血脂效应 法 规 中国药典2015年版生物样品定量分析方法验证指导原则 FDA 2012 Guidance for Industry：Bioanalytical Method Validation EMA 2010 GUIDELINE ON VALIDATION OF BIOANALYTICAL METHODS 验证项目 特异性 （丏属性、选择性）定义：是指在样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确、丏一地测定分析物的能力。

2、空白基质 药物溶液 内标溶液 空白基质+药物+内标 验证项目 标准曲线 注意：覆盖全部生物样品的药物浓度，不允许外推法计算未知样本浓度。（稀释方法学）方法：空白基质、空白基质+内标、空白基质+系列浓度点 （至少6个点，通常8个点）跨度1001000倍。如：1000,500,200,100,50,20,10,5 ug/ml 200倍跨度。验证项目 标准曲线 要求：R20.99，准确度85115%，最低点80120%。至少6个点，最低和最高不能去除。验证项目 定量下限 定义：保证精密度和准确度的前提下，能测定出生物样品中药物的最低浓度。要求：精密度：RSD 20%,准确度：80%120%验证项目

3、精密度和准确度 精密度：是指在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度，要求RSD在15%以内。准确度：是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度，要求在理论值85115%之间。方法：批内：一批 批间：连续三批。验证项目 精密度和准确度（续）标曲点：1000,500,200,100,50,20,10,5 ug/ml 低、中、高三个浓度，平行操作6份。低：最低点3倍以内 15 ug/ml 中：标曲点中间浓度 150 ug/ml 高：最高浓度的80%附近 800 ug/ml 注意：低、中、高浓度点与标曲点不重合。验证项目 稳定性 样本稳定性：保证从样本采

4、集到色谱分析全过程的稳定。全血稳定性：室温（4h）血浆样本：室温（4h）、冻存（-80）、冻融（3次）处理液：自动进样器（24h），4冰箱（96h）溶液稳定性：对照品储备液和工作液：室温（4h），冻存（4，-80）验证项目 基质效应 定义：样品中存在的干扰物质对药物响应的影响。目的：防止个体血样内源性物质对结果的影响。方法：低、中、高三个浓度，平行6份（不同来源基质）对照品溶液 vs 空白基质+对照品溶液 要求：内标校正后的相对基质效应在三个浓度间一致，RSD15%验证项目 高血脂效应 目的：考察进食后血浆中的血脂对药物响应的影响。方法：购买高血脂空白血浆或者用脂肪乳自配空白血浆考察。余下参照基质效应考察。溶血效应 目的：考察细胞破碎对药物响应的影响。方法：自制溶血空白血浆（全血反复冻融后用空白血浆稀释（1:50）。余下参照基质效应考察。小 结 法规 中国药典2015年版生物样品定量分析方法验证指导原则 验证项目 项目名称、验证目的、操作方法、接受标准