体内药物与毒物分析 (18).pdf

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1、免疫分析法（三）免疫分析法（三）化学发光免疫分析（CLIA）是将化学发光反应（氧化反应）的高度灵敏性和免疫反应的高度专一性结合起来，用于测定超微量物质的一种检测技术。化学发光反应多属于氧化反应。能产生化学发光反应的物质称为化学发光剂或化学发光底物。如果将化学发光物质直接标记在抗原或抗体上，或用酶作用于发光底物，即可进行化学发光免疫分析，根据免疫反应所产生的光信号强度，即可求得待测药物的含量。化学发光免疫分析法按标记方法的不同可分为直接化学发光物质标记法和化学发光酶免疫分析法。化学发光酶免疫分析法是以酶标物与抗原或抗体进行免疫反应，免疫反应结合物上的酶再作用于发光底物而发光，其发光强度可用发光信

2、号测定仪进行测定。最常用的发光试剂：氨基苯二酰肼类优点：优点：化学发光免疫分析法具有发光反应的高灵敏性，又兼有免疫反应的特异性。对环境无污染，准确性、重复性较好，线性范围较宽，更适合定量分析。荧光偏振免疫分析（FPIA）是用一定波长的激发偏振光照射荧光物质，然后利用物质吸收光能后所发射出的偏振荧光的强度来测定样品中待测组分含量的一种免疫分析方法。荧光偏振免疫分析通常采用荧光素衍生物作标记药物。偏振荧光标记物的制备多采用化学方法使荧光衍生物与药物相连接，得到的荧光素标记药物用485nm激发光照射时，能发射出525550nm的偏振荧光。当用一定波长的激发光照射荧光物质时，可发射出波长较激发光波长长

3、的荧光。普通荧光是用寻常光（各方向振动的非偏振光）照射荧光物质所产生的荧光，而偏振荧光则是用偏振光照射荧光物质所发射的荧光。利用未标记抗原对标记抗原的竞争抑制作用，随着未标记抗原浓度增加，标记抗原-抗体浓度降低，检测到的偏振荧光强度也相应降低，即被测药物浓度与偏振荧光强度成反比。时间分辨荧光免疫分析是用镧系元素的螯合物作为标记物来标记抗原或抗体，用时间分辨技术来测量样品含量的一种新型荧光免疫分析方法。通常的荧光标记物的衰变时间很短，只有1100纳秒，生物样品中的一些蛋白质荧光衰变时间也只有110纳秒，而镧系元素螯合物的荧光衰变时间为11000微秒，两者相差56个数量级。激发光照射后，适当延缓一段时间，待生物样品中的蛋白质、溶剂等短寿命荧光完全衰变后，再测量镧系元素螯合物的荧光，排除了本底荧光的干扰，实现了时间分辨。该法巧妙地利用了波长和时间分辨两种技术测量荧光，可有效地排除荧光免疫分析过程中本底荧光的干扰，而使测量方法的灵敏度和选择性明显提高。是最有1发展潜力的含量测定方法。2