4.2 细胞培养的基本条件.pdf

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1、细胞培养的基本条件 细胞培养的基本条件 无菌条件 细胞生长条件 细胞培养的无菌环境 无菌室的结构：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。每周甲醛熏蒸（2小时）和每月新洁尔灭擦拭地面一次的方式进行消毒。无菌室使用前，紫外照射15-30分钟。超净工作台的使用 使用前 开启柜内紫外灯照射1030分钟；预工作1015分钟，以除去臭氧和使工作 台面、空间呈净化状态。使用完毕后 要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净。消毒 压力蒸汽消毒器：湿热消毒 当压力达15磅、温度121C时，维持20-30分钟。主要用于培养基、平衡盐溶液、手术器械等消毒。电热干燥箱：干热消毒 温度达160180，维持2小时。主要用

2、于玱璃器皿等消毒。培养细胞生长的条件 1、细胞的营养需要 碳水化合物、氨基酸和脂类 一定量的无机盐、维生素和微量元素 2、细胞的生存环境 温度:37 气体环境和pH：需要O2和CO2 CO2维持pH:7.2-7.4 细胞培养的常用液体 水：纯净，不含有离子和其他的杂质 平衡盐溶液：生理盐水，PBS，D-Hanks pH调节液：碳酸氢钠液，HEPES缓冲液 消化液：胰蛋白酶溶液，EDTA溶液，胶原酶溶液 抗生素溶液：青霉素和链霉素联合使用(双抗溶液)培养基：天然培养基和合成培养基 天然培养基 血清：胎牛血清，使用浓度：520，通用10 20 至4冰箱溶解一天，至室温下全溶后，分装或使用 组织提取

3、液：如鸡胚和牛胚浸液 早期用于动物细胞的培养，现很少用 合成培养基 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物 目前常用培养基：RPMI-1640、DMEM、M199、MEM、人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。无机盐 包括：CaCl2、KCl、MgSO4、NaCl、NaHCO3、NaH2PO4 作用：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及 溶液的酸碱度都是必须的。谷氨酰胺 细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。一般培养液中谷氨酰胺的含量为14mmol/L。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4放置1周可分解50，故应单独配制，置于-20保存，临用前加入培养液。完全培养基的组成 基础培养基 8095 血清 520 青、链霉素 各100Uml