生化实验讲解精品文稿.ppt

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1、生化实验讲解第1页，本讲稿共11页第2页，本讲稿共11页实验分为实验分为l两大块：两大块：l第一块第一块l单元操作单元操作l验证性实验验证性实验l含实验含实验17l独立操作。独立操作。l第二块第二块l系列实验系列实验l综合性综合性l设计性实验设计性实验l含实验含实验l8（1 5）l要求成立要求成立l合作小组合作小组l分工合作分工合作l实验方案实验方案l讨论决定。讨论决定。第3页，本讲稿共11页注注意事项意事项l1.填写填写实验预定表实验预定表，1人人1组组1个操作台个操作台。l2.利用利用实验教材实验教材、实验软件实验软件（演示演示、网络网络）认真预习。）认真预习。l3.认真撰写认真撰写实验预

2、习报告实验预习报告，添上记录和计算结果就是实，添上记录和计算结果就是实验报告，报告验报告，报告要图（表）文并茂要图（表）文并茂。l4.携白大褂、实验预习报告、实验教材、文具（铅笔、携白大褂、实验预习报告、实验教材、文具（铅笔、直尺、坐标纸等）按时到实验室做实验。直尺、坐标纸等）按时到实验室做实验。l5.当场完成实验报告，搞好桌面卫生，经教师检查批准当场完成实验报告，搞好桌面卫生，经教师检查批准后才能离开实验室。后才能离开实验室。l6.班长安排值日生打扫实验室卫生。班长安排值日生打扫实验室卫生。第4页，本讲稿共11页生物化学实验考核l1.实验报告：50%-60，含预习报告、实验表现、实验报告写作

3、、结果合理性等方面。l2.理论笔试：40%-50，明确实验目的、掌握实验原理、熟悉实验操作。第5页，本讲稿共11页实验二实验二.粗脂肪的定量测定粗脂肪的定量测定索氏索氏（SOXhlet）提取法）提取法 滤纸斗滤纸斗:不高于虹吸管不高于虹吸管 花生碾碎去皮，电子天平称重，花生碾碎去皮，电子天平称重，2 2g g 左右。左右。空平底烧瓶洁净无水，电子天平称重。抽空平底烧瓶洁净无水，电子天平称重。抽提结束（不再有溶剂滴下）后的空瓶在水提结束（不再有溶剂滴下）后的空瓶在水浴锅上放浴锅上放3 3分钟后，烘箱烘干。手套拿出，分钟后，烘箱烘干。手套拿出，立即电子天平称重。立即电子天平称重。整个装置在一条直线

4、上。整个装置在一条直线上。用后的平底烧瓶用热水和洗涤剂洗净用后的平底烧瓶用热水和洗涤剂洗净 。第6页，本讲稿共11页实验三实验三.氨基酸的分离鉴定氨基酸的分离鉴定纸纸层析法层析法 先平衡，再戴手套取滤纸操作；先平衡，再戴手套取滤纸操作；点样前铅笔标注点样顺序；点样斑点直径不超过点样前铅笔标注点样顺序；点样斑点直径不超过0.5cm,少量多次，吹干再点。斑点间距离少量多次，吹干再点。斑点间距离2cm左右。左右。1.21.5cm第7页，本讲稿共11页四个同学一组，四个同学一组，微量注射器微量注射器最好专用；如用同根最好专用；如用同根注注射器取不同样品，蒸馏水清洗射器取不同样品，蒸馏水清洗5 5遍以上

5、，以点样样遍以上，以点样样品润洗后，再取样点样。品润洗后，再取样点样。层析过程中观察层析距离和展层时间间的关系，层析过程中观察层析距离和展层时间间的关系，绘图；展层距离为绘图；展层距离为滤纸总长度一半以上滤纸总长度一半以上时，即可停时，即可停止层析。止层析。显色显色：热风吹干热风吹干 时在点样侧时在点样侧吹。吹。铅笔标注铅笔标注溶剂前溶剂前沿和层析斑点的中心，计算沿和层析斑点的中心，计算RfRf值。值。凡跟滤纸接触的操作皆带手套。凡跟滤纸接触的操作皆带手套。第8页，本讲稿共11页实验四实验四.血清蛋白的电泳血清蛋白的电泳 l将粗面朝上放在缓冲液中浸泡将粗面朝上放在缓冲液中浸泡2020分钟。分钟

6、。l熟悉点样器操作：粗细均一的一条线。熟悉点样器操作：粗细均一的一条线。l电泳前混匀电极液；滤纸桥要平。电泳前混匀电极液；滤纸桥要平。l染、脱色要摇晃培养皿。条带要分析。染、脱色要摇晃培养皿。条带要分析。第9页，本讲稿共11页实验五实验五.微量克氏（微量克氏（Kjeldahl）定氮法定氮法l消化：浓酸下把蛋白中消化：浓酸下把蛋白中1摩尔有机氮转化为摩尔有机氮转化为1NH31/2(NH(NH4 4)2 2SOSO4 4 l蒸馏蒸馏：浓浓碱碱可使消化液中的可使消化液中的1/2硫酸硫酸铵铵分解，游离出分解，游离出1 1氨氨，氨使氨使硼酸硼酸溶液中溶液中1 1氢氢离子离子浓浓度降低。度降低。标标准酸滴准酸滴定定，回，回复复硼酸硼酸原来原来氢氢离子离子浓浓度度为为止。止。即即标标准酸的摩准酸的摩尔尔数数 蛋白中氮的摩尔蛋白中氮的摩尔数数。l注意：不要干烧。夹层水保持注意：不要干烧。夹层水保持3/43/4满球水。满球水。第10页，本讲稿共11页实验六、七实验六、七.标准曲线法求蛋标准曲线法求蛋白和核酸含量白和核酸含量 l标准曲线法，作图求。l试管要清洗干净，无水，稀释时先用手振荡均匀，再在振荡器上均匀。l注意比色皿的清洁及分光光度计的正确使用。l枪的正确使用。第11页，本讲稿共11页