环氧合酶_2对胃癌生长的调节作用及胃癌发病机制探讨_夏敏[1].docx

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1、 环氧合酶 -2 对胃癌生长的调节作用 及胃癌发病机制探讨 夏敏，严洁，郭继中，唐建英，谢平 (无锡市第一人民医院消化内科，江苏无锡 214000) 摘要：目的：旨在研究环氧合酶 -2mRN A (Cox-2 )在胃癌中的表达，并初步探讨 Cox-2 对胃癌新生血管生成以及胃癌 细胞增殖与凋亡过程的调节作用。方法 ： RT-PCR法检测 54 例胃癌患者的胃癌组织和 20 例幽门螺杆菌阴性、组织 学相对正常者的胃窦组织 Cox-2mRNA。 免疫组织化学方法测定 Cox-2 及 bcl-2 蛋白表达，同时进行胃癌组织中微 血管标记。结果 :Cox-2mRNA在胃癌中呈高表达； Cox-2 蛋白

2、与 bcl-2 蛋白及微血管密度 （ MVD)呈正相关 （ r = 0.79, PC0.01; r = 0.74, P classification and metastasis. The expression of Cox-2 protein had positive correlation with that of bcl-2 protein and MVD. Conclusion： The expression of Cox-2 in gastric cancer was high, and carcinogenic mechanism was related with suppress

3、ion of cell apoptosis and increase of the microvessel density. Keywords： stomach neoplasms； cyclooxygenase-2； B-cell leukemia-lymphoma-2； angiogenesis 环氧和酶 -2 (Cox-2)是 1989年被发现、 1992年 被基因克隆的一个膜蛋白，人类 Cox-2 基因编码蛋 白全长 604 个氨基酸，分子量 72-74KD, Cox-2 主要 定位于细胞内质网和核膜。 Cox-2 与人类消化道肿 瘤密切相关，在多种肿瘤中过度表达 ;流行病学调查 表明

4、，长期服用非甾体类抗炎 NSAIDs 药人群中消 化系统肿瘤发病率明显下降，尤其是结肠癌。目前 认为 Cox-2 促进肿瘤发生的机制可能涉及肿瘤细胞 增殖与凋亡紊 乱，肿瘤新生血管生成，肿瘤免疫逃避 等多个方面。本文旨在研宄 Cox-2 在胃癌中的表达 及与临床病理的关系，并初步探讨其对细胞凋亡及 胃癌新生血管生成的调节作用。 1 材料与方法 1 . 1 材料 本研宄中的标本取自 2002 年 2 12 月在无锡 市第一人民医院外科行胃癌（非贲门部 )切除术及镜 下确诊的 54 例胃癌患者，其中男 23 例，女 31 例。 年龄26 80 岁。包括癌组织及距癌灶 5cm 以上的 癌旁组织。20

5、 例幽门螺杆菌阴性和组织学相对正 常者的胃窦组织作为正常对照，男 12 例，女 8 例。 年龄 21 72 岁。所有患者均无家族性腺瘤病史和 收稿日期： 2004 05 25 作者简介：夏敏 （ 1968 ），女，硕士，副主任医师，研宄方向：胃肠道肿瘤的防治。 2 实用临床医学 2004 年第 5 卷第 5 期 7Vacr/ca/ C7/az/ 2004, Vol 5, No5 结肠癌史 ,也无长期服用 NSAIDs 或糖皮质激素史。 标本分为两份 ，一 份一 70C 冰葙保存待测 mRNA. 一份经10%中性福尔马林固定、普通石蜡包埋后， 切成 4Pm厚的连续切片，切片作苏木精伊红染色 (H

6、E)以明确诊断。 1.2 方法 Cox-2 mRNA 检测 （ RT-PCR 法 ）： 应用 Trizol 试 剂 (Gibco ERB),按说明书提取胃癌组织、癌旁组织及 正常胃窦组织的总 RNA,取 5 Pg RNA 加引物及逆转 录酶合成 cDNA 链。取 20 W cDNA 作模板，加 Cox-2 弓 I 物： 5 -TGAAACCCACTCCAAACACAG-3 ， 5 - TCACAGGCACAGGAGGAAG-3 扩增片段为 232bp。 95 C 变性 5 min 后进入循环，包括 95 C 变性 45 s, 54 C 复性 90 s， 72 C 延伸 90 s， 共 30 个

7、循环，最后以 54 C 延伸 2 min， 72 C 延伸 3 min。 以 (3-actin作内对照 :5 GTGGGG0GCCCC0GGCACCA- 35 - CTTAATGT- CA0GCA0GATTTC -3 (540bp )， 95 C 变性 30 s， 60 C 退火 45 s, 72 伸 60 s， 共 30 个循环。取 10 W 扩增 产物用 1.7%的琼脂糖凝胶电泳，电泳后凝胶在紫外 灯下观察、拍照，用图像分析仪扫描，进行半定量分 析，以 Cox-2 与 (3-actin 的光密度比值来表示 Cox-2 基 因mRNA 水平。 Cox-2及 bcl-2蛋白检测（免疫组化方法

8、)Cox-2 多克隆抗体及 ABC 免疫染色试剂盒购自美国 Santa Cruz公司 ,bcl-2 多克隆抗体及 ABC 免疫染色试剂 盒购自福州迈新公司。具体步骤为 :石蜡切片脱蜡、 梯度水化，过氧化酶阻断 ,用微波处理修复抗原，凉 至室温，磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照，分别滴 加 1: 100 稀释的 Cox-2 及 bcl-2 多克隆抗体， 4 C 放 置过 夜，滴加生物素二抗 (37 C 放置 60 min)及 ABC 复合物 ,DAB显色，苏木素复染、封片。 微血管标记及密度计算：所有标本的石蜡切片 进行免疫组化染色，免疫组化 Sp 试剂盒及抗 CD34 单克隆抗体均为 Maxin

9、 Biotech 产品，具体操作见说 明书。按文献方法低倍镜观察整张切片的血管分布 情况后，选择癌灶周围间质血管密集区，在 400 倍视 野内计数上述 4 个不同区域的微血管数，取其平均 值为微血管密度 （ MVD)， 计数时管腔直径 0.05 女 31 1.68 0.34 年龄 0.05 55 36 1.78+0.43 肿瘤大小 3 cm 16 1.60 0.41 0.05 3 cm 38 1.75 0.39 分化程度 分化型癌 34 2.321.02 0.05 淋巴结转移 无 40 1.70+0.52 有 14 2.25+0.67 lon cancer cells increase metastatic potential J . Proc Natl Acad Sci USA， 1997, 94: 3 336 3 340. (责任编辑 :胡炜华 ）