选修三植物组织培养技术精品文稿.ppt
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1、选修三植物组织培养技术选修三植物组织培养技术第1页,本讲稿共50页细胞工程的概念细胞工程的概念第2页,本讲稿共50页细细胞胞工工程程应用的原理和方法应用的原理和方法细胞生物学和分细胞生物学和分子生物学子生物学细胞整体水平或细细胞整体水平或细胞器水平胞器水平按照人们的意愿来改按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质变细胞内的遗传物质或获得细胞产品或获得细胞产品概念概念分类分类植物细胞工程植物细胞工程研究的目的研究的目的研究的水平研究的水平动物细胞工程动物细胞工程与基因工程的比较:与基因工程的比较:前者是前者是细胞水平或胞水平或细胞器水平胞器水平上生物技上生物技术,后者是分子水平上的生物技后者是分子水
2、平上的生物技术。第3页,本讲稿共50页通常采用的通常采用的技术手段技术手段 植物组织培养植物组织培养 植物体细胞杂交植物体细胞杂交所采用技术所采用技术 的理论基础的理论基础 植物细胞的全能性植物细胞的全能性第4页,本讲稿共50页植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物组织培养第5页,本讲稿共50页植物体细胞杂交植物体细胞杂交第6页,本讲稿共50页一、细胞的全能性1、定义:、定义:生物体的细胞具有使后代细胞形成生物体的细胞具有使后代细胞形成生物体的细胞具有使后代细胞形成生物体的细胞具有使后代细胞形成完完完完整个体的潜能整个体的潜能整个体的潜能整个体的潜能的特性。的特性。的特性。的特性。2、原理:
3、、原理:生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全全全全套遗传物质套遗传物质套遗传物质套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的,都有发育成为完整个体所必需的,都有发育成为完整个体所必需的,都有发育成为完整个体所必需的全全全全部基因部基因部基因部基因,从理论上讲,生物体的每一个活细胞,从理论上讲,生物体的每一个活细胞,从理论上讲,生物体的每一个活细胞,从理论上讲,生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。都应该具有全能性。都应该具有全能性。都应该具有全能性。4、体内细胞未表现全能性
4、的原因:、体内细胞未表现全能性的原因:基因选择性表达的结果基因选择性表达的结果基因选择性表达的结果基因选择性表达的结果 3、原因:原因:生物体细胞含有本物种所特有的生物体细胞含有本物种所特有的生物体细胞含有本物种所特有的生物体细胞含有本物种所特有的全套遗传信息。全套遗传信息。全套遗传信息。全套遗传信息。第7页,本讲稿共50页细胞的全能性细胞的全能性与与细胞分化程度细胞分化程度的关系:的关系:全能性高则分化程度低。全能性高则分化程度低。全能性最高的是受精卵,还没全能性最高的是受精卵,还没有分化,个体发育其时就是受精卵不断分裂和分化的过程,有分化,个体发育其时就是受精卵不断分裂和分化的过程,越往后
5、细胞的分化程度越高,体细胞是高度分化的细胞,越往后细胞的分化程度越高,体细胞是高度分化的细胞,也是全能性最低的细胞。也是全能性最低的细胞。全能性的大小:全能性的大小:植物细胞植物细胞 动物细胞(动物细胞的细胞核具全能性)动物细胞(动物细胞的细胞核具全能性)受精卵受精卵 生殖细胞(精细胞生殖细胞(精细胞卵细胞卵细胞配子)配子)体细胞体细胞体细胞:分化程度低的体细胞:分化程度低的 分化程度高的分化程度高的幼嫩细胞幼嫩细胞 衰老细胞衰老细胞细胞分裂能力强的细胞分裂能力强的 细胞分裂能力弱的细胞分裂能力弱的全能性的大小:全能性的大小:植物细胞植物细胞 动物细胞(动物细胞的细胞核具全能性)动物细胞(动物
6、细胞的细胞核具全能性)受精卵受精卵 生殖细胞(精细胞生殖细胞(精细胞卵细胞卵细胞配子)配子)体细胞体细胞体细胞:分化程度低的体细胞:分化程度低的 分化程度高的分化程度高的幼嫩细胞幼嫩细胞 衰老细胞衰老细胞细胞分裂能力强的细胞分裂能力强的 细胞分裂能力弱的细胞分裂能力弱的第8页,本讲稿共50页1、植物组织培养的概念 植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下,植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下,将将离体离体的植物的植物器官、组织、细胞器官、组织、细胞,培养在人工配制的培,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形
7、成丛芽,最终形成完整的植株完整的植株。二、植物组织培养第9页,本讲稿共50页脱分化脱分化外植体外植体愈伤组织愈伤组织脱分化脱分化:已经分化已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成的结构和功能而转变成未分化未分化细胞的过程。脱分化细胞的过程。脱分化的细胞成为薄壁细胞,叫的细胞成为薄壁细胞,叫愈伤组织愈伤组织。离体离体的植物器官、的植物器官、组织或细胞组织或细胞第10页,本讲稿共50页 愈伤组织:愈伤组织:高度液泡化的、无定形状态,细胞排高度液泡化的、无定形状态,细胞排列疏松而无规则,具有分生能力的薄壁细胞。列疏松而无规则,具有分生能力的薄壁细胞。第
8、11页,本讲稿共50页脱分化脱分化外植体外植体愈伤组织愈伤组织脱分化脱分化:已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的:已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。脱分化的细结构和功能而转变成未分化细胞的过程。脱分化的细胞成为薄壁细胞,叫胞成为薄壁细胞,叫愈伤组织愈伤组织。再分化试管苗试管苗再分化再分化:由愈伤组织:由愈伤组织从新分化从新分化出根出根、芽等器官,形成芽等器官,形成完整植株的过程。完整植株的过程。第12页,本讲稿共50页第13页,本讲稿共50页脱分化脱分化外植体外植体愈伤组织愈伤组织脱分化脱分化:已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有:已经分化的细胞
9、,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。脱分化的的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。脱分化的细胞成为薄壁细胞,叫细胞成为薄壁细胞,叫愈伤组织愈伤组织。再分化试管苗试管苗再分化再分化:由愈伤组织从新分化出根:由愈伤组织从新分化出根、芽等器官,形成完芽等器官,形成完整植株的过程。整植株的过程。植物体植物体第14页,本讲稿共50页离体的植物器官、组织或细胞离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织愈伤组织根、芽根、芽植物体植物体外植体外植体A、脱分化、脱分化B、再分化、再分化植物激素:植物激素:细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素2、植物组织培养过程、植物组织培养过程1、A过程进行有
10、丝分裂过程进行有丝分裂2、B过程进行有丝分裂同时也过程进行有丝分裂同时也进行分化进行分化3、A不需光照,而不需光照,而B需光照,需光照,叶绿素的合成需光照叶绿素的合成需光照第15页,本讲稿共50页丛芽(胚丛芽(胚状体)状体)外植体外植体植物体植物体脱分化脱分化再分化再分化过过程程(分化)(分化)(未分化)(未分化)(分化)(分化)条件?条件?特点?特点?适宜温度、无光适宜温度、无光照、照、pH和无菌环境。和无菌环境。无机、有机成分无机、有机成分和植物激素(和植物激素(生长素,生长素,细胞分裂素和赤霉素细胞分裂素和赤霉素)无定形状态无定形状态薄壁细胞薄壁细胞高度液泡化高度液泡化排列疏松、无规则排
11、列疏松、无规则分化程度低分化程度低去分化较易去分化较易离体的离体的植物器植物器官、组织或细官、组织或细胞胞愈伤组织愈伤组织第16页,本讲稿共50页(2 2)植物组织培养的培养基:)植物组织培养的培养基:水、无机盐离子水、无机盐离子有机小分子营养成分:有机小分子营养成分:氮源:氮源:包括包括维生素维生素和和氨基酸氨基酸 碳源:碳源:2%5%2%5%的的蔗糖蔗糖溶液,调节渗透压溶液,调节渗透压 琼脂:琼脂:起支持作用起支持作用 激素:激素:生长素、细胞分裂素生长素、细胞分裂素、赤霉素、赤霉素 pH值:值:5.05.06.06.03、胡萝卜的组织培养实验、胡萝卜的组织培养实验(1 1)实验)实验原理
12、原理、目的、材料、目的、材料第17页,本讲稿共50页1、选取胡萝卜洗净,削皮,切段选取胡萝卜洗净,削皮,切段2、酒精消毒、次氯酸钠杀菌、酒精消毒、次氯酸钠杀菌3、切取、切取1立方厘米左右的立方厘米左右的形成层形成层小块小块5、定期观察和记录愈伤组织、定期观察和记录愈伤组织脱分化脱分化再分化再分化(3 3)方法步骤)方法步骤4、接种,封盖扎紧、接种,封盖扎紧6、诱导出试管苗,移栽、诱导出试管苗,移栽第18页,本讲稿共50页a、激素用量的比例影响实验结果:、激素用量的比例影响实验结果:生长素用量生长素用量细胞分裂素用量细胞分裂素用量,有有利利于于根根的分化、的分化、抑抑制制芽芽的形成;的形成;比值
13、比值低低时,有时,有利利于于芽芽的分化,的分化,抑抑制制根根的形成;的形成;比值比值适中适中时,时,促进愈伤组织的生长。促进愈伤组织的生长。(4 4)注意事项)注意事项b、必要条件:、必要条件:确保确保无菌无菌操作、操作、细胞离体细胞离体、生长发育、生长发育所需的全部营养物质:所需的全部营养物质:矿质元素、糖类、维生素矿质元素、糖类、维生素C、关键词:、关键词:外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织第19页,本讲稿共50页为什么选择为什么选择形成层?形成层?第20页,本讲稿共50页1.1.在组织培养实验中,为什么要强调所用器械的灭在组织培养实验中,为什么要强调所用器械
14、的灭菌和实验人员的无菌操作?菌和实验人员的无菌操作?提示:植物组织培养中用到的培养基提示:植物组织培养中用到的培养基含有丰富的含有丰富的营养成分营养成分,有利于培养物的生长,然而各种杂菌同样也可,有利于培养物的生长,然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长,以在上面迅速生长,所以植物组织培养过程中污染现象所以植物组织培养过程中污染现象经常发生经常发生。培养基一旦被污染,迅速生长的各种杂菌。培养基一旦被污染,迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养,而且这些杂菌生长的过程不但会和培养物争夺营养,而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质,导致培养物迅速中会生成大量对培养物有害的物质,导致培
15、养物迅速死亡。死亡。造成培养基污染的因素造成培养基污染的因素:外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻底、操外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻底、操作人员操作不规范等。作人员操作不规范等。第21页,本讲稿共50页2.2.在本实验中,切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层在本实验中,切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层部分,原因是这部分部分,原因是这部分容易诱导形成愈伤组织容易诱导形成愈伤组织。请思考一。请思考一下,胡萝卜的其他部分(如茎、叶、花),是否也能下,胡萝卜的其他部分(如茎、叶、花),是否也能培养成小植株,你能用实验的方法进行验证吗?培养成小植株,你能用实验的方法进行验证吗?提示:胡萝卜的
16、其他部分(如茎、叶、花)也能培提示:胡萝卜的其他部分(如茎、叶、花)也能培养再生形成小植株,只是诱导愈伤组织比较困难。养再生形成小植株,只是诱导愈伤组织比较困难。第22页,本讲稿共50页3 3,影响植物组织培养的因素有哪些?,影响植物组织培养的因素有哪些?营养成分营养成分:大量元素,微量元素,有机物(氨基酸:大量元素,微量元素,有机物(氨基酸、维生素维生素、蔗蔗糖),水糖),水激素激素:细胞分裂素细胞分裂素和和生长素生长素。两者用量的比例影响植物发育的。两者用量的比例影响植物发育的方向。方向。细胞分裂素细胞分裂素生长素生长素1 1 有利于芽的分化有利于芽的分化1 1 有利于根的分化有利于根的分
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