血小板抗原抗体检测以及其输血科应用PPT课件.ppt
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1、关于血小板抗原抗体检测及其输血科应用第一张,PPT共五十四页,创作于2022年6月010203目 录/contents血小板抗原血小板抗原血小板抗体与疾病血小板抗体与疾病血小板抗体检测的临床意义和临床应用血小板抗体检测的临床意义和临床应用第二张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板简介血小板简介血小板:血小板:D:2-5umD:2-5um V:V:红细胞红细胞*1/51/5功能:促进止血和加速凝血功能:促进止血和加速凝血正常范围:正常范围:100-30010100-300109 9/L/L骨髓干细胞骨髓干细胞胞质块脱落胞质块脱落来源来源:多功能祖细胞多功能祖细胞巨核祖细胞巨核祖细胞幼巨
2、核细胞幼巨核细胞巨核细胞巨核细胞血小板血小板第三张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板形态血小板形态静息状态静息状态活化状态活化状态第四张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗原血小板抗原l血小板血小板“非特异性非特异性”抗原抗原l血小板血小板“特异性特异性”抗原抗原 HPAHPA抗原抗原 HLA-HLA-类抗原类抗原 ABHABH抗原抗原第五张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l血小板具有血小板具有HLA-HLA-类抗原(类抗原(HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B抗原和少抗原和少量量HLA-CHLA-C抗原),无抗原),无HLA-HLA-类抗原。故输注血小板
3、类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。要比器官移植所需配型简单。l血小板个体间血小板个体间HLA-HLA-类抗原位点数差别不大。类抗原位点数差别不大。l每个血小板上至少有每个血小板上至少有2000020000个个HLAHLA抗原位点。抗原位点。HLAHLA抗原抗原第六张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l部分为血小板的固有蛋白,另一部分从血浆中吸附。部分为血小板的固有蛋白,另一部分从血浆中吸附。l血小板上的血小板上的ABHABH抗原个体之间表达不同,约抗原个体之间表达不同,约5%5%的非的非O O型个体为型个体为A A抗原或抗原或B B抗原的高表达者。抗原的高表达者。l故血小板输
4、血应同型输注;抗体检测应采用故血小板输血应同型输注;抗体检测应采用O O型血型血小板,以排除小板,以排除ABOABO系统抗体的干扰。系统抗体的干扰。GPIbGPIb、GPIIb/IIIaGPIIb/IIIa、GPIa/IiaGPIa/Iia、CD109CD109等也携带等也携带少量少量ABHABH抗原抗原ABHABH抗原抗原第七张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l主要存在于血小板膜的主要存在于血小板膜的GPGP分子上,也少量存在于分子上,也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。l19901990年国际输血协会血小板免疫学工作组提出了年
5、国际输血协会血小板免疫学工作组提出了HPAHPA命名,以发现的时间顺序排列:命名,以发现的时间顺序排列:HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-3HPA-3等系统。等系统。HPAHPA抗原抗原第八张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l已确定了已确定了3333个个HPAHPA,其中,其中12 12 个抗原为双等位基因表达(个抗原为双等位基因表达(HPA-HPA-1,-2,-3,-41,-2,-3,-4,-5-5和和-15-15)。其中高频率抗原命名)。其中高频率抗原命名a a,低频率,低频率抗原命名抗原命名b b。其余。其余2121个抗原为低频率抗原,尚未发现对偶抗个抗原为低频
6、率抗原,尚未发现对偶抗原,命名为原,命名为bwbw。l单核苷酸多态性(单核苷酸多态性(SNPSNP):33:33个个HPAHPA中均已搞清楚基因背景,中均已搞清楚基因背景,其中其中3232个个HPAHPA的多态性型是由一个氨基酸置换所致,而这又的多态性型是由一个氨基酸置换所致,而这又是由编码血小板膜糖蛋白(是由编码血小板膜糖蛋白(GPGP)基因的一个核苷酸的不同所)基因的一个核苷酸的不同所致。致。lHPA-14bwHPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在 AAG1929-31AAG1929-31。HPAHPA抗原抗原第九张,PPT共五十四
7、页,创作于2022年6月HPAHPA抗原抗原第十张,PPT共五十四页,创作于2022年6月HPAHPA抗原抗原第十一张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗原定型血小板抗原定型u血清学定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点:特异性抗体来源困难缺点:特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏,目前国际上仅有单克隆抗体匮乏,目前国际上仅有HPA-1aHPA-1a单抗,单抗,无其它无其它HPAHPA单抗。单抗。u基因定型基因定型限制性片段长度多态性分析(限制性片段长度多态性分析
8、(RFLPRFLP)序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSPPCR-SSP)第十二张,PPT共五十四页,创作于2022年6月用途:(1 1)健康人群)健康人群HPAHPA基因分型,建立已知基因分型,建立已知HPAHPA基因型的血小板献血员库。基因型的血小板献血员库。(2 2)检测受者)检测受者HPAHPA基因型,以便从血小板献血员库中寻找与其基因型,以便从血小板献血员库中寻找与其HPAHPA基因型相基因型相 匹配的血小板供者。匹配的血小板供者。(3 3)检测患者)检测患者
9、HPAHPA基因型,辅助临床胎儿基因型,辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输新生儿免疫性血小板减少症、输 血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。(4 4)对特定区域或种族人群)对特定区域或种族人群HPAHPA基因分型,可为人类遗传学研究提供相关基因分型,可为人类遗传学研究提供相关 资料和证据。资料和证据。1aa2aa3ab4aa5aa6aa7aa8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa血小板抗原定型血小板抗原定型第十三张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗体的产生方式血小板抗体的产生方式 以
10、上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合,导致血小板被内皮网状系统清除。抗原结合,导致血小板被内皮网状系统清除。怀孕怀孕移植(骨髓、器官)移植(骨髓、器官)药物、自身免疫药物、自身免疫输血小板、红细胞(尤其是输血小板、红细胞(尤其是没有滤白的红细胞)没有滤白的红细胞)第十四张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗体与部分相关疾病血小板抗体与部分相关疾病 抗抗 体体分分 类类疾疾 病病HLA/HPA HLA/HPA 抗抗 体体其其 它它 抗抗 体体同同 种种抗抗 体体格格兰兰茨曼血小板功能茨曼血小板功能不全病不全病抗抗GPb/aPb
11、/a抗体抗体同同 种种 异异体体 抗抗 体体新生儿同种异体免疫新生儿同种异体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA1a(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板血小板输输注无效症注无效症HLA-I抗体抗体5080%,HPA1725%(日本人日本人为为HPA-2b),HPA-15,anti-CD36极少数极少数为为ABO抗体抗体血小板血小板输输血后紫癜血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36少数少数为为抗抗GPIa/IIa抗体抗体被被动动同种异体免疫同种异
12、体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体移植相关同种异体免疫性血小板减少症免疫性血小板减少症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自自 身身抗抗 体体自自发发性血小板减少症性血小板减少症多数位于多数位于GPb/ab/aGPIb/IX/VIb/IX/V,少数位于,少数位于GPIV/V IV/V 和和 GPIa/IIaGPIa/IIa继发继发于母体自于母体自发发性性血小板减少症血小板减少症同上同上药物依药物依赖性抗赖性抗体体奎宁奎宁/奎尼丁抗体奎尼丁抗体所致疾病所致疾病抗原位于抗原位于GPb/ab/a和和GPIb/IXIb/IX肝素抗体所致疾病肝素抗体所致疾病抗
13、原表位是抗原表位是PF4第十五张,PPT共五十四页,创作于2022年6月胎盘屏障胎盘屏障Y YY YY YY Y母体同种异体抗母体同种异体抗体通过胎盘体通过胎盘母体同种异体免疫胎儿血小板减少举例举例NAITNAIT第十六张,PPT共五十四页,创作于2022年6月NAITl胎母同种异体免疫血小板减少症(胎母同种异体免疫血小板减少症(fetomaternal alloimmune fetomaternal alloimmune thrombocytopeniathrombocytopenia,FMAITFMAIT)致病机理与新生儿溶血病()致病机理与新生儿溶血病(HDNHDN)相似,)相似,前者是
14、由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症,后者为红细前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症,后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。胞抗原不合引起的溶血性疾病。l由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgGIgG型的抗血小板抗型的抗血小板抗体,该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原的血小板结体,该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原的血小板结合,此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使得胎儿血小板减合,此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使得胎儿血小板减少,出现瘀点和瘀斑,其严重者会导致神经系统损伤(占已报道病少,出现瘀点和
15、瘀斑,其严重者会导致神经系统损伤(占已报道病例的例的20%20%)、)、10%10%出现颅内出血出现颅内出血(死亡率近死亡率近100%100%)。)。l因多数病例在出生后才得以诊断,故此病也称作新生儿同种异体因多数病例在出生后才得以诊断,故此病也称作新生儿同种异体免疫血小板减少症。免疫血小板减少症。l初次妊娠妇女即可发生初次妊娠妇女即可发生FMAITFMAIT,其发病率大约为,其发病率大约为1/800-1500 1/800-1500。第十七张,PPT共五十四页,创作于2022年6月lFMAITFMAIT患儿病情变化较大,具有自限性,常在出生后患儿病情变化较大,具有自限性,常在出生后 2-32-
16、3周恢复。周恢复。l轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿 临床表现为皮肤、体内外黏膜出血,出现紫癜、瘀点或瘀斑。临床表现为皮肤、体内外黏膜出血,出现紫癜、瘀点或瘀斑。l严重患儿可能发生颅内出血(严重患儿可能发生颅内出血(intracranial haemorrhageintracranial haemorrhage,ICH ICH),占),占10%10%。l与与FMAITFMAIT相关的相关的ICHICH 80%80%发生在子宫内,其中发生在子宫内,其中14%14%发生在妊娠发生在妊娠20 20 周前,周前,28%28%发生在
17、妊娠发生在妊娠3030周前。周前。NAITNAIT临床表现临床表现第十八张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l母体血清母体血清抗抗HPAHPA抗体检测抗体检测,然而母体抗体水平到预产期,然而母体抗体水平到预产期时逐渐下降,约有时逐渐下降,约有30%30%的病例抗体阴性。的病例抗体阴性。l父母双亲的父母双亲的HPAHPA基因检测基因检测,在高加索地区采取对其,在高加索地区采取对其HPA-HPA-1 1和和HPA-5HPA-5基因检测,而在亚洲地区应考虑进行基因检测,而在亚洲地区应考虑进行HPA-4HPA-4和和HPA-5HPA-5基因检测。基因检测。l父母双亲父母双亲交叉配型实验交叉配型实
18、验,将母体血清与父亲血小板,将母体血清与父亲血小板进行交叉配型实验,即使不能确切知道不相合的抗原进行交叉配型实验,即使不能确切知道不相合的抗原,但这种方法也能发现母体是否存在血小板同种异体,但这种方法也能发现母体是否存在血小板同种异体免疫反应免疫反应。NAITNAIT早期诊断与筛查早期诊断与筛查第十九张,PPT共五十四页,创作于2022年6月NAITNAIT第二十张,PPT共五十四页,创作于2022年6月NAITNAIT第二十一张,PPT共五十四页,创作于2022年6月举例举例血小板输注无效血小板输注无效第二十二张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗体检测常用方法血小板抗体检测常用
19、方法功能性功能性试验试验酶标法酶标法荧光法荧光法固相凝集法固相凝集法应用应用范围范围抗体检测抗体检测交叉配型交叉配型性能性能灵敏度灵敏度低低高高极高极高高高特异性特异性不好不好好好一般一般较好较好反应时间反应时间长长2h2h2h2h1h1h所用仪器所用仪器不定不定酶标仪酶标仪荧光显微镜荧光显微镜或流式细胞仪或流式细胞仪平板离心机平板离心机16th16th版版AABBAABB评价评价未提及未提及特异性鉴定的特异性鉴定的可靠方法可靠方法敏感性高敏感性高特异性不足特异性不足血小板交叉配型应血小板交叉配型应用最为广泛的方法用最为广泛的方法方法方法指标指标第二十三张,PPT共五十四页,创作于2022年6
20、月血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法-固相凝集法固相凝集法第二十四张,PPT共五十四页,创作于2022年6月血小板抗体筛检,血小板抗体筛检,包括包括HLAHLA抗体、抗体、HPAHPA抗体及其它血小板反应性抗体。抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。血小板交叉配型血小板交叉配型,为患者筛选相容性的血小板或血小板供者,避,为患者筛选相容性的血小板或血小板供者,避免血小板输注无效症的发生。免血小板输注无效症的发生。患者自身抗体检测患者自身抗体检测,包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检测,包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。检测血小板结合抗体
21、可将患者血小板平铺在反应孔后,直接加入抗血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后,直接加入抗人人IgGIgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。身血小板和血清反应来检测。用途:用途:血小板抗体检测方法血小板抗体检测方法-固相凝集法固相凝集法第二十五张,PPT共五十四页,创作于2022年6月 l 1.1.主要应用科室:输血科,血液病科,妇产科,新生儿科。主要应用科室:输血科,血液病科,妇产科,新生儿科。l 2.2.输血科:输血科:.预防血小板输注无效症的发生:通过对患者进行血小板抗体筛查以及随预防血小板输
22、注无效症的发生:通过对患者进行血小板抗体筛查以及随后的与血小板供者的交叉配型试验,筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者,以提后的与血小板供者的交叉配型试验,筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者,以提高血小板输注有效率,防止血小板输注无效症的发生。高血小板输注有效率,防止血小板输注无效症的发生。.指导临床输血,保障输血安全:输血科在常规血型鉴指导临床输血,保障输血安全:输血科在常规血型鉴 定中加入血小板抗体检测,可对临床输血中出现发热、黄疸、急性肺定中加入血小板抗体检测,可对临床输血中出现发热、黄疸、急性肺 损伤等非溶血性输血反应的风险作出评估。损伤等非溶血性输血反应的风险作出评估。血小
23、板抗体检测临床意义血小板抗体检测临床意义第二十六张,PPT共五十四页,创作于2022年6月l 3.3.妇产科妇产科:孕前,孕期,产后孕前,孕期,产后l 1).1).反复流产、不孕不育查因:对于反复和习惯性流产史(尤其是孕早期)和不孕不育史的患者,反复流产、不孕不育查因:对于反复和习惯性流产史(尤其是孕早期)和不孕不育史的患者,检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平,可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平,可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。l2).2).产检(尤其针对高龄和二胎产妇)产检(尤其针对高龄和二胎产妇)l孕早期检测:在孕早期(三个月)产
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