《实验二凝集反应》PPT课件.ppt

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1、主讲教师：张秋玉 实验二实验二 凝集反应凝集反应基础医学院免疫学院基础医学院免疫学院Zhang Qiuyu凝集反应（agglutination)沉淀反应(precipitation)补体结合实验中和实验免 疫 酶 标 技 术(eg.ELISA)免疫荧光技术放射免疫技术发光免疫技术经经典典反反应应现现代代反反应应抗抗原原抗抗体体反反应应类类型型抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法Zhang Qiuyu反应类型反应类型抗原类型及例子抗原类型及例子凝集反应凝集反应颗颗粒粒性性Ag，如如细细菌菌、RBC、表表面面结结合合可可溶性溶性Ag的乳胶颗粒等的乳胶颗粒等沉淀反应沉淀反应可可溶溶性性Ag，如如

2、血血清清中中免免疫疫球球蛋蛋白白、补补体体、FP、HbsAg等等补体结合补体结合实验实验有有补补体体参参与与，SRBC和和其其溶溶血血素素组组成成指指示示系系统统中和实验中和实验特殊作用的特殊作用的Ag，如病毒、毒素、激素、酶，如病毒、毒素、激素、酶n1.1 1.1 经典的血清学反应经典的血清学反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu1.2 1.2 现代的抗原抗体反应：现代的抗原抗体反应：现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺点是需特殊

3、精密检测仪量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪。名称名称标记物标记物 检测仪器检测仪器缺点缺点免疫酶标技术免疫酶标技术 酶酶酶标仪酶标仪免疫荧光技术免疫荧光技术 荧光荧光荧荧光光显显微微镜镜或或流流式细胞仪式细胞仪放射免疫技术放射免疫技术 同位素同位素 液闪仪液闪仪放放射射性性污污染染，有半衰期有半衰期发光免疫技术发光免疫技术 发光剂发光剂 发光现微测定仪发光现微测定仪Zhang Qiuyu凝集反应的定义及基本类型凝集反应的定义及基本类型1直接凝集试验颗粒性Ag与相应Ab的反应玻片法：如血型的鉴定、细菌菌种的鉴定试管法：肥达氏反应2间接凝集试验（可溶性Ag+载体=致敏颗粒）与相应Ab的反应3间接

4、凝集抑制试验可溶性Ag与相应Ab作用后，再与致敏颗粒反应4.反相间接凝集试验（可溶性Ab+载体=致敏颗粒)与相应Ag的反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu 试管凝集反应示意图试管凝集反应示意图肥达氏反应-用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu人的红细胞表面有20几种血型抗原系统ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由Landsteiner于1901年提出：血型AB

5、ABO红细胞上的凝集原（抗原）ABA和B无抗原血型鉴定的原理血型鉴定的原理根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型：ABO血型系统中有两种抗原，分别称为A抗原和B抗原，均存在于红细胞膜的外表面。Zhang Qiuyu1.抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂，ABO抗原特异性是在H抗原基础上形成的Zhang Qiuyu2.抗体本质：血浆中存在两种相应的抗体即抗A抗体和抗B抗体血型ABABO红细胞上的凝集原（抗原）ABA和B无抗原血清中的凝集素（抗体）抗B抗A无抗体抗A和抗B ABO血型系统的抗体为天然抗体天然抗体，主要为IgM，不能通过胎盘。Zhang QiuyuZhang

6、QiuyuZhang Qiuyu1.如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血相合，可以进行输血；2.如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血；3.如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多（300ml），并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。Zhang QiuyuZhang Qiuyu载玻片 1块/每人 *用完各自用水冲洗净置消毒缸三棱针 1根/每人 用后弃垃圾斗棉签 根/每人（先取再取1)用后弃垃圾斗牙签 1根/每人（两端使用）用后弃垃圾斗碘伏生理盐水试管试管架标记笔实验材料实验材料Zhang Qiuyu操作步骤操作步骤 i 取血：搓揉左手

7、无名指的指腹碘伏消毒用三棱针刺1-2滴血将无名指的指腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴洗入盐水中并混匀形成1%的血球悬液。ii 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央划线分区，标明“A”、“B”区在“A”、“B”区分别滴加抗A、抗B血清各1滴用毛细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗A、抗B血清中，用牙签两端分别拌匀将玻片平持手中，前后左右转动使之充分混匀，室温放置10-15分钟后观察结果。Zhang QiuyuZhang Qiuyu注意事项注意事项 取血时，注意无菌操作，避免HBsAg的交叉污染（*HBsAg携带者）；刺血时，尽可能一次性成功，用力适当，让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿强行挤压。

8、鉴定时，滴1滴抗血清及血球悬液即可，多则两边易混；牙签两头不可混用；O型血无凝集现象，无须反复检测。Zhang Qiuyu血型血型抗抗B血清血清抗抗A血清血清O_A_+B+_AB+结果判断结果判断 Zhang QiuyuABO血型的遗传规律血型的遗传规律？父母血型分别为？父母血型分别为A型、型、B型，他们型，他们子女的血型可能是何种？子女的血型可能是何种？父母分别为？父母分别为A型和型和O型，子女有无型，子女有无可能是可能是B型型 思考思考Zhang Qiuyu三、E-花结形成实验 原理原理 人的外周血T淋巴细胞上特有能与绵羊红细胞结合的受体，称E受体；在一定实验条件下，绵羊红细胞与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花结实验。E受体与CD2分子、LFA-2（淋巴细胞功能相关抗原）为同一物质。Zhang Qiuyu花结花结分类：分类：Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为15-35%。E-RFC(总和)：正常值为60-80%。意义：意义：用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。E-受体为T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一，还用于T细胞的分离。Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu