动物细胞培养和核移植技术上课用.ppt
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1、2.2 动物细胞工程动物细胞工程1、简述动物细胞培养的过程、条件及、简述动物细胞培养的过程、条件及应用应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的培养原理、条件、结果、培养目的学习目标:学习目标:动物细胞工程常用的技术手段:动物细胞工程常用的技术手段:动物细胞培养技术、动物细胞培养技术、动物细胞核移植技术、动物细胞核移植技术、动物细胞融合技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体技术生产单克隆抗体技术复习:复习:植物细胞工程常用的技术手段有哪些?植物细胞工程常用的技术手段有哪些?植物组织培养技术、植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术植物体细胞
2、杂交技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程阅读阅读“动物细胞培养过程动物细胞培养过程”并思考:并思考:1、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施的原理是什么?的原理是什么?特点是什么?特点是什么?2、为什么要对取出的动物组织进行处理,使、为什么要对取出的动物组织进行处理,使细胞分散?细胞分散?3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?4、胰蛋白酶真
3、的不会把细胞消化掉吗?为什、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?么?5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料?组织做动物细胞培养材料?6、简述动物细胞培养的操作过程、简述动物细胞培养的操作过程动物细胞培动物细胞培养过程:养过程:原代培养原代培养传代培养传代培养 1、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施的原理是什么?的原理是什么?从动物机体中取出相关组织,将它分散成单从动物机体中取出相关组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养基中,让这些细胞生个细胞,然后在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖
4、。长和繁殖。原理是细胞增殖原理是细胞增殖(有丝分裂)(有丝分裂)。聚焦一、动物细胞培养过程聚焦一、动物细胞培养过程动物细胞生长动物细胞生长特点特点:细胞贴壁:细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。要求:要求:培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。易于贴附。细胞的接触抑制:细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。的接触抑制。接触抑制:接触抑制:细胞在贴
5、壁生长过程中,随着细胞分细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再增加。增加。50代以后代以后失去接触抑制失去接触抑制接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变,获部分细胞突变,获得不死性,向癌细得不死性,向癌细胞方向发展,糖蛋胞方向发展,糖蛋白减少。白减少。2、为什么要对取出的动物组织进行处理,使、为什么要对取出的动物组织进行处理,使细胞分散?细胞分散?分散的单个细胞容易摄取所需的营养,排出分散的单个细胞容易摄取所需的营养,排出代谢废
6、物;而用大块组织培养时,内部细胞的营代谢废物;而用大块组织培养时,内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。养供应和代谢废物的排出都较困难。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?细胞间的物质主要是蛋白质(胶原纤维)。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原纤维)。胃蛋白酶作用的适宜胃蛋白酶作用的适宜pH约为约为2,当,当pH大于大于6时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境环境pH为。多数动
7、物细胞培养的适宜为。多数动物细胞培养的适宜pH为。为。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料?组织做动物细胞培养材料?动物胚胎或幼
8、龄动物的组织、器官,它们动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,它们的细胞分化程度低,增殖能力强,分裂旺的细胞分化程度低,增殖能力强,分裂旺盛,容易培养。盛,容易培养。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程6、动物细胞培养过程:、动物细胞培养过程:动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加培养液加培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体传代培
9、养一般传至传代培养一般传至10代直至代直至50代就不能再分裂了,这时细代就不能再分裂了,这时细胞核内遗传物质未发生变化,胞核内遗传物质未发生变化,形成的细胞群形成的细胞群传代培养过程中有个别细胞传代培养过程中有个别细胞传至传至50代以后,由于代以后,由于遗传物遗传物质质改变,失去改变,失去控制控制,成为,成为无无限限增殖增殖的不死的癌症细胞,的不死的癌症细胞,形成的细胞群形成的细胞群 7、什么是原代培养、什么是原代培养、传代培养?为什么要进传代培养?为什么要进行传代培养?行传代培养?原代培养:原代培养:取材(动物组织)取材(动物组织)细胞细胞分散分散初次培养初次培养传代培养:传代培养:培养的细
10、胞培养的细胞细胞细胞分散分散继续培养继续培养进行传代培养的原因:进行传代培养的原因:接触抑制接触抑制一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程8、传代培养中,、传代培养中,第第10代细胞与第代细胞与第50代以后细胞的主要代以后细胞的主要区别是什么?区别是什么?细胞癌变细胞癌变,失去接触失去接触抑制特性。抑制特性。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体?需要诱导其脱分化的过程吗?得克隆个体?需要诱导其脱分化的过程吗?不可以,因为高度分化的动物细胞的全能性受不可以,因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。到抑
11、制。不需要诱导其脱分化。不需要诱导其脱分化。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程原代培养定义:定义:把第把第1 1代细胞的培养与代细胞的培养与1010代以内的细胞代以内的细胞培养统称为原代培养。培养统称为原代培养。过程:过程:从动物机体中取出组织从动物机体中取出组织 剪碎剪碎 加胰蛋白酶加胰蛋白酶 细胞游离细胞游离 加培养液加培养液 将将细胞细胞接种到培养瓶内接种到培养瓶内 培养(培养(1212天换一次天换一次培养液)培养液)细胞贴壁生长细胞贴壁生长 长成单层细胞长成单层细胞取材(动物组织)取材(动物组织)细胞分散细胞分散初次培养初次培养传代培养定义:定义:当原代培养的细胞生长停止,这当原
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