微生物限度方法适应性试验方案汇总(共10页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上XXXXXXXXXXX有限公司胶囊用明胶微生物限度检查方法适用性试验方案 文件编号：YZF-QC-001-01起草人： （QC） 年 月 日审核人： （QA） 年 月 日批准人： （质量负责人） 年 月 日目 录.验证目的.验证原理.验证人员.相关文件.验证内容.验证周期7.验证综合结论1. 验证目的 建立微生物限度检查方法适用性试验验证，通过验证确认检测所采用的方法适合于本公司所用原料胶囊用明胶的微生物限度的测定。2. 验证原理 通过试验数据结果，比较实验组中试验菌的恢复生长结果来评价整个验证方法的准确性、有效性和重现性。3. 验证人员职位姓名负责内容QC检验员负责

2、验证方案的起草和实施，并对所测数据准确性负责。QC负责人负责验证方案的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。QA负责人负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。审核人负责验证方案及报告的审核和批准。4. 相关文件 中国药典2015版四部通则1105、通则11065. 验证内容 通过验证以确认所采用的方法适合于该产品需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定；确认所采用的方法适合于该产品控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，就按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立

3、制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。5.1微生物计数法验证 当建立产品的微生物限度检查时，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。验证试验可与供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数同时进行。5.1.1验证用菌种 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501（第一代） 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003（第一代） 铜绿假单胞菌CMCC（B）44102（第一代） 白色念珠菌CMCC（F）98001（第一代） 黑曲霉CMCC（F）98003（第一代）5.1.2验证依据：中国药典2015版四部5.1

4、.3验证步骤5.1.3.1菌液制备5.1.3.1.1分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，经3035培养1824小时后，分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物0.9%无菌氯化钠溶液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-610-7，细菌数为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。5.1.3.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经2025培养2到3天后，取12环白色念珠菌斜面培养物加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-410-7，菌液为不大于100 cfu/ml，做活菌

5、计数备用。5.1.3.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经2025培养57天后，取黑曲霉斜面培养物，加35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，吸出孢子悬液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4，菌液为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。5.1.3.2 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验。5.1.3.3 计数方法适用性试验 5.1.3.3.1供试液制备 取供试品10g，加45 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇，放置45水浴保温使其完全溶解，摇匀，作为1:10供试液，

6、备用。 5.1.3.3.2试验组： 取1:10的供试液加入试验菌，使1ml供试液中含菌量不大于100cfu。注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。 5.1.3.3.3菌液组： 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液同试验组操作。测定所加的试验菌数。 5.1.3.3.4供试品对照组：取制备好的供试液。以稀释液替代菌液同试验组操作。按菌落计数方法测定供试品本底菌数。 5.1.3.3.4阴性对照组： 取0.9%无菌氯化钠溶液，空白对照。5.1.4结果至少应进行3次独立试验。若试验组的菌回收率均0.52，则照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数、

7、霉菌和酵母菌总数；若任一次试验中试验组的菌回收率不在范围内，应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证，使试验组菌回收率在规定范围内。5.1.4.1试验组的菌回收率=(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌数组平均菌落数5.1.4.2连续3批验证的菌落计数结果 5.1.4.2.1规格：0#蓝白 批号： 验证试验结果（常规法） 单位（cuf/ml）技术方法试验菌株菌浓度（ml）试验次数菌液组供试品对照组实验组回收率实际回收率理论需氧菌总数计数大肠埃希菌10-610.5210-620.5210-630.

8、52金黄色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢杆菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌总数计数白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 检验人： 复核人： 日期： 年 月 日 5.1.4.2.2规格：0#蓝白 批号： 验证试验结果（常规法） 单位（cuf/ml）技术方法试验菌株菌浓度（ml）试验次数菌液组供试品对照组实验组回收

9、率实际回收率理论需氧菌总数计数大肠埃希菌10-610.5210-620.5210-630.52金黄色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢杆菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌总数计数白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 检验人： 复核人： 日期： 年 月 日 5.1.4.2.3规格：0#蓝白 批号： 验证试验结果（常规法

10、） 单位（cuf/ml）技术方法试验菌株菌浓度（ml）试验次数菌液组供试品对照组实验组回收率实际回收率理论需氧菌总数计数大肠埃希菌10-610.5210-620.5210-630.52金黄色葡萄球菌10-610.5210-620.5210-630.52枯草芽孢杆菌10-610.5210-620.5210-630.52白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52霉菌和酵母菌总数计数白色念珠菌10-510.5210-520.5210-530.52黑曲霉10-510.5210-520.5210-530.52 检验人： 复

11、核人： 日期： 年 月 日 5.1.5 结论 5.2控制菌检查法的验证 当建立产品的微生物限度检查时，应进行控制菌检查法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的的控制菌检查方法测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检验方法应进行重新验证。验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。5.2.1验证用菌种 大肠埃希菌CMCC（B）44102（第一代） 乙型付伤寒沙门菌CMCC（B）50094（第一代）5.2.2验证依据：中国药典2015年版四部5.2.3 大肠埃希菌、沙门菌检查法 5.2.3.1菌液制备 分别接种大肠埃希菌、乙型付伤寒沙门菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，经

12、3035培养1824小时后，分别取大肠埃希菌、乙型付伤寒沙门菌的肉汤培养物1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-610-7，细菌数为10100cuf/ml，做活菌计数备用。 5.2.3.2 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验。5.2.3.3 控制菌检查方法适用性试验5.2.3.3.1 供试液制备：同需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法验证。5.2.3.2.2大肠埃希菌5.2.3.2.2.1试验组 取供试品10ml及不大于100cuf/ml大肠埃希菌接种至100ml的增菌培养基中，依相应大肠埃希菌检查法进行检查。5.2.3.2.2.2 阴性对照组 取PH

13、7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml加至100ml的增菌培养基中，依相应大肠埃希菌检查法进行检查。5.2.3.2.2.3阳性对照组 取不大于100cuf/ml大肠埃希菌1ml接种至100ml的增菌培养基中，依相应大肠埃希菌检查法进行检查。5.2.3.2.3沙门氏菌5.2.3.2.3.1试验组 取供试品10g及不大于100cuf/ml乙型副伤寒沙门菌接种至200ml的增菌培养基中，依相应沙门菌检查法进行检查。5.2.3.2.3.3阴性对照组 取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml加至200ml的增菌培养基中，依相应沙门氏菌检查法进行检查。5.2.3.2.3.4阳性对照组 取不大于cuf/m乙型副

14、伤寒沙门菌1ml接种至200ml的增菌培养基中，依相应沙门菌检查法进行检查。5.2.3.2.4 结果 至少应进行3次独立试验。阳性对照组应检出试验菌，阴性对照组应无菌生长。若试验组检出试验菌，照该供试液制备方法和控制菌检查法进行该供试品控制菌的检查；若试验组未检出试验菌，应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。5.2.3.2.4.1验证连续三批的观察结果 5.2.3.2.4.1.1大肠埃希菌验证试验结果供试品规格批号项目试验组阴性对照组阳性对照组麦康凯琼脂培养基麦康凯琼脂培养基麦康凯琼脂培养基 检验人： 复核人： 日期： 年 月 日5.2.3.2.4.1.1沙门氏菌验证试验结果供试品规格批号项目试验组阴性对照组阳性对照组XLDXLDXLD检验人： 复核人： 日期： 年 月 日 5.2.3.2.5 结论 6. 验证周期6.1.药品的组分发生改变可能影响检验结果时。6.2.验证时检验条件发生改变可能影响检验结果时。 7. 验证综合结论 结论人： 日期： 年 月 日专心-专注-专业