《疫组化基本技术》PPT课件.ppt

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1、免疫组化基本技术（一）免疫组化基本技术（一）RCA法 IGSS IS-PCR CSA法 UIP Envision LSAB法 双PAP法 PAP法 ABCABC法法桥法间接法直接法第一部分第一部分 组织与细胞材料的制备组织与细胞材料的制备内容：组织与细胞材料内容：组织与细胞材料 的取材和保存的取材和保存主要内容主要内容一、人体组织标本的取材一、人体组织标本的取材二、动物组织标本的取材二、动物组织标本的取材三、取材注意事项三、取材注意事项四、细胞标本的准备四、细胞标本的准备五、组织的固定、脱水、透明和包埋五、组织的固定、脱水、透明和包埋六、切片六、切片七、组织与细胞材料的保存七、组织与细胞材料的

2、保存 概概 述述 免疫组织化学免疫组织化学（Immunohistochemistry;IHC）技术是一技术是一门综合性技术，除了具备优质、高效，特异门综合性技术，除了具备优质、高效，特异的一抗，敏感的检测方法，稳定的显示系统的一抗，敏感的检测方法，稳定的显示系统外，还需要掌握组织标本或标本的取材、固外，还需要掌握组织标本或标本的取材、固定、包埋、切片，以及定、包埋、切片，以及IHC前的处理，内源前的处理，内源性酶的消除方法，非特异背景的消除方法，性酶的消除方法，非特异背景的消除方法，怎样防止怎样防止IHC染色过程中的脱片。染色过程中的脱片。一、人体组织标本的取材一、人体组织标本的取材 手术切除

3、标本，各种活检穿刺手术切除标本，各种活检穿刺标本和尸体解剖标本。标本和尸体解剖标本。1.1.手术切除标本的取材：手术切除标本的取材：抗原在组织中的分布常不均一，取材时抗原在组织中的分布常不均一，取材时应考虑：主要病灶，病灶与正常组织交界处，应考虑：主要病灶，病灶与正常组织交界处，远离病灶的正常组织。远离病灶的正常组织。组织大小：组织大小：长长1cm宽宽1cm厚。厚。2.2.各种小组织的活检取材：各种小组织的活检取材：它不仅体积小，取材困难，不易取到它不仅体积小，取材困难，不易取到主要病灶，因此对标本的处理应特别慎重，主要病灶，因此对标本的处理应特别慎重，及时固定，包埋时要平整。及时固定，包埋时

4、要平整。3.3.穿刺标本的取材：穿刺标本的取材：光镜（光镜（HEHE、特殊染色、特殊染色、IHCIHC、ISHISH）电镜（透射电镜、免疫电镜）电镜（透射电镜、免疫电镜）4.4.尸检组织的取材尸检组织的取材 病人死亡后，一般要在数小时后才能做病人死亡后，一般要在数小时后才能做尸检，因此，及时取材，尽早固定是开展尸检，因此，及时取材，尽早固定是开展IHC检测的关键。检测的关键。二、动物组织标本的取材二、动物组织标本的取材 动物的处死方式一般为活杀，组织标本动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，来源较新鲜，10min内即可完成固定和冷冻内即可完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应采用灌注固

5、定后，保存，脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。再进行后固定。动物处死方法：动物处死方法：1.麻醉法麻醉法 乙醚或乙醚或4戊巴比妥静注戊巴比妥静注 2.空气栓塞法空气栓塞法三、组织取材注意事项三、组织取材注意事项 min内浸入固定液，尤其是开展分子生内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。时取材。2.注意防止人为因素的影响注意防止人为因素的影响 刀和剪要快，刀要足够长。刀和剪要快，刀要足够长。3.组织块的大小组织块的大小 厚为，大小可根据需要而定厚为，大小可根据需要而定4.动物和人体组织的取材位置动物和人体组

6、织的取材位置 要视研究目的，观察部位而定要视研究目的，观察部位而定5.取材时间取材时间 原则上，应尽快取材，但比较大的手原则上，应尽快取材，但比较大的手术标本如胃、肺、肠等器官，最好先固定术标本如胃、肺、肠等器官，最好先固定后取材。后取材。6.注意包埋方向注意包埋方向 7.边缘标记边缘标记 8.保持材料的清洁保持材料的清洁 9.切除不需要的部分切除不需要的部分10.明确编号，登记明确编号，登记11.骨组织还需脱钙骨组织还需脱钙四、细胞材料的准备四、细胞材料的准备 细胞的取材和制片法：细胞的取材和制片法：1.印片法：印片法：常用于活检或手术切除标本。常用于活检或手术切除标本。将新鲜标本沿病灶中心剖开，将病灶区轻将新鲜标本沿病灶中心剖开，将病灶区轻压于载玻片上，吹干后立即固定压于载玻片上，吹干后立即固定202030min30min。优点：优点：操作简单，抗原保存好操作简单，抗原保存好缺点：缺点：细胞厚薄不均，细胞厚薄不均，IHC染色易引起背染色易引起背 景染色。景染色。2.穿刺吸取法穿刺吸取法 3.沉淀法沉淀法 主要用于胸水、腹水、尿主要用于胸水、腹水、尿液、脑脊液等体液多而细胞较少的标本。液、脑脊液等体液多而细胞较少的标本。（1 1）常规细胞玻片制片法）常规细胞玻片制片法 （2 2）单核细胞分离法）单核细胞分离法