《凝集反应》PPT课件.ppt

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1、第九章第九章 凝集反应凝集反应学习目标学习目标1.1.解释凝集反应的概念。解释凝集反应的概念。2.2.解释直接凝集反应、间接凝集反应、解释直接凝集反应、间接凝集反应、协同凝集反应的原理。协同凝集反应的原理。3.3.说出抗人球蛋白试验的应用。说出抗人球蛋白试验的应用。4.4.了解自身红细胞凝集。了解自身红细胞凝集。凝集反应凝集反应 细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原颗粒性抗原，或，或可溶性抗原可溶性抗原（或抗体）与（或抗体）与载载体颗粒体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质（或抗原）

2、发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成存在下，形成肉眼可见肉眼可见的凝集现象。的凝集现象。抗原抗原抗原抗原排斥排斥抗原抗原抗体抗体凝集反应凝集反应抗原抗原抗原抗原抗原抗原凝集原：凝集原：凝集反应中的抗原。凝集反应中的抗原。凝集素：凝集素：凝集参与反应的抗体凝集参与反应的抗体反应阶段：反应阶段：抗原抗体的特异性结合抗原抗体的特异性结合出现肉眼可见的凝集现象出现肉眼可见的凝集现象反应特点：反应特点：IgMIgM的作用比的作用比IgGIgG大数百倍大数百倍IgGIgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不称不完全抗体完全抗体凝集反应凝集反应可见反应形成可见反应形成第一

3、节第一节 直接凝集反应直接凝集反应直接凝集反应：直接凝集反应：颗粒性抗原颗粒性抗原直接与抗体结合，直接与抗体结合，在在电解质电解质的作用下，出现的作用下，出现肉眼可见肉眼可见的凝集现象。的凝集现象。+方法评价：方法评价：简便和快速、敏感度低，用于定性试验简便和快速、敏感度低，用于定性试验临床应用：临床应用：菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定及抗菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定及抗体效价测定。体效价测定。第一节第一节 直接凝集反应直接凝集反应一、玻片凝集试验一、玻片凝集试验+方法评价方法评价:定性定性试验试验简便和快速简便和快速敏感度低敏感度低临床应用临床应用:菌种鉴定菌种鉴定血清学分型血清学分型血型

4、鉴定血型鉴定一、玻片凝集试验一、玻片凝集试验 在在试管内试管内颗粒性抗原直接与抗颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出体结合，在电解质的作用下，出现现肉眼肉眼可见的凝集现象。可见的凝集现象。二、试管凝集试验二、试管凝集试验弃掉弃掉 试管凝集试验原理试管凝集试验原理结结果果 1 2 3 4 5 6 7菌液菌液试管凝集试验试管凝集试验结果结果+很小的凝集颗粒很小的凝集颗粒混浊混浊-无凝集现象无凝集现象与对照相同与对照相同+小、部分凝集块小、部分凝集块中等混浊中等混浊+大多凝集管底大多凝集管底轻度混浊轻度混浊+大的凝集块大的凝集块清亮清亮凝集程度凝集程度沉淀沉淀上清上清管底沉淀管底沉淀凝集程

5、度凝集程度最高稀释比例最高稀释比例待测血清的滴度待测血清的滴度方法评价：方法评价：半定量试验半定量试验简便、快速简便、快速敏感度低敏感度低可有假阳性可有假阳性临床应用：临床应用：Widal reactionWidal reactionWeil-felix reactionWeil-felix reactionWright test:Wright test:布鲁菌病布鲁菌病交叉配血试验交叉配血试验二、试管凝集试验二、试管凝集试验一、玻片凝集反应一、玻片凝集反应:未知抗原未知抗原+已知抗体已知抗体凝集团块凝集团块 混浊混浊?二、试管凝集反应：二、试管凝集反应：定量抗原定量抗原+系列稀释抗体系列稀释

6、抗体不同程度的凝集反应不同程度的凝集反应YESYES NO NO确定抗体的滴度确定抗体的滴度凝集、凝集、H H凝集与凝集与ViVi凝集凝集2.2.交叉反应与凝集吸收试验交叉反应与凝集吸收试验三、与凝集反应有关的概念三、与凝集反应有关的概念1、O凝集、凝集、H凝集与凝集与Vi凝集凝集交叉凝集反应交叉凝集反应A BA C乙菌乙菌 甲菌甲菌甲菌甲菌2、交叉凝集反应有凝集吸收试验、交叉凝集反应有凝集吸收试验共同抗原与交叉反应共同抗原与交叉反应抗原抗原1 1抗原抗原2 2+抗血清抗血清交叉反应交叉反应2、交叉凝集反应有凝集吸收试验、交叉凝集反应有凝集吸收试验2、交叉凝集反应有凝集吸收试验、交叉凝集反应有

7、凝集吸收试验凝集吸收试验凝集吸收试验:用一种过量的细菌抗原与发生交用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去，剩下抗体只能与其共同抗体吸去，剩下抗体只能与特异性抗原起反应，这种试验即称特异性抗原起反应，这种试验即称凝集吸收试验。凝集吸收试验。第二节第二节 间接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应:将将可溶性抗原或抗体可溶性抗原或抗体吸附于颗粒吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现原反应，在电解质的作用下，出现肉肉眼眼可见的凝集现象可见的凝集现象载体载体可溶性抗原

8、可溶性抗原致敏致敏致致敏敏颗颗粒粒NSNS凝凝集集颗颗粒粒间接凝集试验示意图间接凝集试验示意图载体种类及其处理方法载体种类及其处理方法红细胞：红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒基团的颗粒正向间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验间接凝集反应的类型间接凝集反应的类型用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测检测抗体抗体一、正向间接凝集试验一、正向间接凝集试验二、反向

9、间接凝集试验二、反向间接凝集试验用抗体致敏载体用抗体致敏载体-检测检测抗原抗原三、间接凝集抑制试验三、间接凝集抑制试验用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测检测抗原抗原间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体特异特异结合结合抗抗原原抗抗体体复复合合物物NSNS致敏颗粒致敏颗粒无凝集颗粒无凝集颗粒阳性阳性间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验待测抗原待测抗原已知抗体已知抗体无结合无结合抗抗原原抗抗体体分分散散NSNS致敏颗粒致敏颗粒有凝集颗粒有凝集颗粒阴性阴性SPA:SPA-IgG Fc;SPA:SPA-IgG Fc;SPASPA抗体致敏抗体致敏-测抗原测抗原一、协同凝集试验一、协

10、同凝集试验 原理图原理图IgGIgGSPASPASPA-IgGSPA-IgG待测抗原待测抗原SPA-IgG-SPA-IgG-待测抗原待测抗原凝集颗粒凝集颗粒混混合合 加入加入抗球蛋白试验抗球蛋白试验又称又称CoombsCoombs试验试验二、二、抗抗人人球蛋白球蛋白凝集凝集试验试验19451945年由年由CoombsCoombs建立的一种抗球蛋建立的一种抗球蛋白参与的间接血凝试验，检测抗红白参与的间接血凝试验，检测抗红细胞细胞不完全抗体不完全抗体的一种非常经典的的一种非常经典的方法。方法。二、二、抗抗人人球蛋白球蛋白凝集凝集试验试验1 1、直接、直接CoombsCoombs试验试验不完全抗体不

11、完全抗体检测红细胞上抗体检测红细胞上抗体2 2、间接间接CoombsCoombs试验试验检测血清中的检测血清中的抗红细胞抗体抗红细胞抗体临床应用：临床应用：在输血上的应用在输血上的应用血型抗原抗体的检查血型抗原抗体的检查对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对溶血性贫血的研究对溶血性贫血的研究对细菌或立克次体的不完全抗体检查对细菌或立克次体的不完全抗体检查抗抗人人球蛋白球蛋白凝集凝集试验试验自身红细胞凝集试验自身红细胞凝集试验未经致敏的受检者新鲜红细胞未经致敏的受检者新鲜红细胞试剂：试剂：抗人抗人O O型红细胞的单克隆抗体型红细胞的单克隆抗体临床应用临床应用：HIVHIV

12、检测、检测、HBVHBV检测检测自身红细胞凝集试验自身红细胞凝集试验胶乳凝集试验胶乳凝集试验明胶凝集试验明胶凝集试验 将病毒抗原或重组抗原吸附于粉将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的则可形成肉眼可见的粉红色凝集粉红色凝集 间接凝集反应的应用间接凝集反应的应用抗原的检测抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测抗体的检测检测细菌、病毒

13、、寄生虫等感染后产生的抗体。检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。小结小结 凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。现肉眼可见的凝集现象。可以分为可以分为直接凝集反应直接凝集反应和和间接凝集反应间接凝集反应。在临床检验中最常用的为在临床检验中最常用的为间接血凝试验间接血凝试验、胶乳胶乳凝集试验凝集试验和和明胶试验明胶试验。抗球蛋白试验又称为抗球蛋白试验又称为CoombsCoombs试验试验，是检测抗红，是检测抗红细胞细胞不完全抗体不完全抗体的一种很有用的方法。的一种很有用的方法。直接直接CoombsCoombs试验用于病人试验用于病人红细胞上不完全抗体红细胞上不完全抗体检测；检测；间接间接CoombsCoombs试验试验用于检测用于检测游离的血清中的不完全抗体。游离的血清中的不完全抗体。