《核酸生物合成》课件.ppt
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1、第10章 核酸的生物合成 为什么子女与父母非常相象?为什么子女与父母非常相象?生物所以有遗传现象,是与遗传物质生物所以有遗传现象,是与遗传物质DNADNA的复的复制有关系的。制有关系的。中心法则中心法则(central dogma)(central dogma)DNA RNA DNA RNA 蛋白质蛋白质复制复制复制复制转录转录转录转录翻译翻译翻译翻译逆转录逆转录逆转录逆转录RNARNA复制复制复制复制 复制:复制:以亲代以亲代DNADNA或或RNARNA为模板,根据为模板,根据碱基配对碱基配对的原则的原则,在一系列酶的作用下,生成与亲代相同,在一系列酶的作用下,生成与亲代相同的子代的子代DN
2、ADNA或或RNARNA的过程。的过程。几个基本概念:几个基本概念:逆转录:逆转录:以以RNARNA为模板,在为模板,在逆转录酶逆转录酶的作用下,的作用下,生成生成DNADNA的过程。的过程。翻译:翻译:亦叫转译,以亦叫转译,以mRNAmRNA为模板,将为模板,将mRNAmRNA的密的密码解读成蛋白质的码解读成蛋白质的氨基酸顺序氨基酸顺序的过程。的过程。转录:转录:以以DNADNA为模板,按照碱基配对原则合成为模板,按照碱基配对原则合成RNARNA,即将即将DNADNA所含的遗传信息传给所含的遗传信息传给RNARNA,形成一条形成一条与与DNADNA链互补的链互补的RNARNA的过程。的过程。
3、第第1 1节节 DNA DNA的生物合成的生物合成三个方面:三个方面:w1.1.复制复制 w2.2.损伤修复损伤修复 w3.3.逆转录逆转录 一、参与一、参与DNADNA复制的酶及蛋白因子复制的酶及蛋白因子DNADNA链合成的条件:链合成的条件:wdNTPdNTPwMgMg+w引物引物wDNADNA模板模板w酶和蛋白质因子酶和蛋白质因子三种大肠杆菌三种大肠杆菌DNADNA聚合酶聚合酶 1.DNA 1.DNA聚合酶聚合酶I I 3 5 3 5外切酶;外切酶;5 3 5 3聚合酶聚合酶 5 3 5 3外切酶外切酶 作用:切除引物、填补空缺、损伤修复作用:切除引物、填补空缺、损伤修复Klenow片段
4、片段(一)(一)DNA DNA聚合酶(聚合酶(DNA polymeraseDNA polymerase)枯草杆菌蛋白酶枯草杆菌蛋白酶68 kDa35 kDa大肠杆菌大肠杆菌DNADNA聚合酶聚合酶(修复酶)(修复酶)Large(Klenow)fragment of DNA pol 2.DNA2.DNA聚合酶聚合酶 3 53 5外切酶外切酶 5 3 5 3聚合酶聚合酶 作用:作用:DNADNA损伤修复损伤修复3.DNA3.DNA聚合酶聚合酶IIIIII 大肠杆菌大肠杆菌DNADNA复制的主要酶复制的主要酶Sliding clamp subunits聚合酶活性聚合酶活性聚合酶活性聚合酶活性3 5
5、外切活性外切活性 复合物,复合物,促进促进亚基二聚体转移亚基二聚体转移并结合于并结合于DNA双螺旋双螺旋DNA pol III(复制酶)(复制酶)促进核心酶促进核心酶形成二聚体形成二聚体组装组装防止核心酶从防止核心酶从模板模板DNADNA上滑落上滑落 酶酶作用作用DNADNA聚合酶聚合酶5533聚合酶;聚合酶;5533外切酶外切酶;3355外切酶酶;外切酶酶;切除引物、填补空缺、损伤修复切除引物、填补空缺、损伤修复DNADNA聚合酶聚合酶5533聚合酶;聚合酶;3355外切酶酶;外切酶酶;校正校正/修复修复DNADNA链链DNADNA聚合酶聚合酶主要的链延伸酶主要的链延伸酶所有所有DNADNA
6、聚合酶都只能在模板链的指令下,在引物聚合酶都只能在模板链的指令下,在引物(通常(通常RNARNA)3-OH3-OH添加新核苷酸功能,没有从头合添加新核苷酸功能,没有从头合成活力;成活力;引物酶合成一小段引物酶合成一小段RNARNA,作为,作为DNADNA合成的引物;合成的引物;必须与几种辅助蛋白组装成必须与几种辅助蛋白组装成引发体引发体,才有合成引物的,才有合成引物的活性。活性。如:如:DonaBDonaB、DonaCDonaC、DonaTDonaT、PriAPriA、PriBPriB、PriCPriC等等(二)引物酶和引发体(二)引物酶和引发体(三)(三)DNADNA连接酶(连接酶(DNA
7、ligase)DNA ligase)w3,5 3,5 磷酸二酯键的形成磷酸二酯键的形成w哺乳动物:哺乳动物:ATPATP供能,供能,大肠杆菌:大肠杆菌:NADNAD供能,供能,都需要都需要MgMg2+2+w在在DNADNA复制、重组及损伤修复中起作用复制、重组及损伤修复中起作用w催化二段催化二段DNADNA链之间链之间3,5 3,5 磷酸二酯键的形磷酸二酯键的形成成33OHOH5533 O OOO-P O P O O O-有缺口的有缺口的有缺口的有缺口的DNADNADNADNA链链链链DNADNADNADNA连接酶连接酶连接酶连接酶ATPATPAMP+PPiAMP+PPi O OOO P O
8、P O O O-533缺口封闭缺口封闭缺口封闭缺口封闭(四)解螺旋酶(四)解螺旋酶催化催化DNADNA双螺旋解链;双螺旋解链;需需ATPATP供能。供能。(五)单链结合蛋白(五)单链结合蛋白(SSBSSB)与解开的单链结合,防止形成双螺旋;与解开的单链结合,防止形成双螺旋;防止核酸酶的降解;防止核酸酶的降解;(六)拓扑异构酶(六)拓扑异构酶拓扑异构酶:解除超螺旋拓扑异构酶:解除超螺旋二、二、DNADNA的复制的复制半保留复制方式半保留复制方式Old strandNew strandThe hypothesis ofsemiconservativereplication proposed by
9、Watson and Crickin 1953.大肠杆菌培养在大肠杆菌培养在15N培养基中培养基中转到转到14N培养基中,第一代培养基中,第一代(50分钟左右)分钟左右)第二代第二代wDNADNA复制合成的复制合成的子代子代DNADNA分子中,分子中,一条来自亲代一条来自亲代DNADNA分子,另一分子,另一条是新合成的,条是新合成的,所以称为所以称为半保留半保留复制。复制。二、二、DNADNA的复制过程的复制过程起始、延伸、终止起始、延伸、终止(2)(2)模板模板DNADNA解除高级结构解除高级结构 解螺旋酶把双螺旋解开成单链,解螺旋酶把双螺旋解开成单链,SSBSSB立即立即结合单链。拓扑异构
10、酶解开复制叉前方的超结合单链。拓扑异构酶解开复制叉前方的超缠现象。缠现象。(3 3)RNARNA引物的形成引物的形成 由引发酶以单链由引发酶以单链DNADNA为模板,按为模板,按5533合合成引物成引物。1.1.起始起始 (1 1)辨认起始点)辨认起始点 DNA DNA复制有固定的起始点复制有固定的起始点(富含(富含ATAT)。DNADNA双链复制起始点双链复制起始点 dnaAdnaAdnaB/dnaCdnaB/dnaCDNADNA双链解开成双链解开成单链单链DNADNASSBSSB引物酶引物酶引物酶引物酶RNARNA引物引物/3-OH/3-OHDNADNADNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶
11、dNTPdNTP和和3-OH3-OH形成形成3535磷酸二酯键磷酸二酯键解旋酶解旋酶SSBSSB33335555引发体引发体解旋酶解旋酶解旋酶解旋酶拓扑异构酶拓扑异构酶拓扑异构酶拓扑异构酶w原核生物原核生物w双向复制双向复制(型复制)型复制)w特定起始点:特定起始点:oriCoriCw真核生物真核生物w多个复制单位多个复制单位(复制泡)(复制泡)(复制起始点(复制起始点+复制叉)复制叉)w多个起始点多个起始点复制的方向复制的方向原原核核生生物物复复制制时时,DNA从从起起始始点点(origin)向向两两个个方方向向解解链链,形形成成两两个个延延伸伸方方向向相相反的复制叉,称为反的复制叉,称为双
12、向复制双向复制。DNA DNA的起点和方式的起点和方式复制中的放射自显影图像复制中的放射自显影图像基因组能独立进行复制的单位称为基因组能独立进行复制的单位称为复制子复制子。每个复。每个复制子都含有控制复制起始的起点(制子都含有控制复制起始的起点(originorigin),可能),可能还含有终止复制的终点(还含有终止复制的终点(terminusterminus)。)。A.环状双链环状双链DNA及复制起始点及复制起始点B.复制中的两个复制叉复制中的两个复制叉C.复制接近终止点复制接近终止点(termination,ter)oriterA B C真真核核生生物物每每个个染染色色体体有有多多个个起起
13、始始点点,是是多多复复制制子子的的复复制制。习习惯惯上上把把两两个个相相邻邻起起始始点点之之间间的的距距离离定定为为一一个个复复制制子子(replicon)。复复制制子子是是独独立完成复制的功能单位。立完成复制的功能单位。53oriorioriori5353oriorioriori535533553复制复制3 在在RNARNA引物上,由引物上,由DNADNA聚合酶聚合酶催化,在引物催化,在引物3 3-OH-OH每掺入一个核苷酸,从底物每掺入一个核苷酸,从底物dNTPdNTP切下切下一个焦磷酸。一个焦磷酸。体内仅存在体内仅存在5 35 3的的DNADNA聚合酶聚合酶2.2.延伸延伸 在在RNAR
14、NA引物上,由引物上,由DNADNA聚合酶聚合酶催化,催化,体内仅存在体内仅存在5 35 3的的DNADNA聚合酶聚合酶55533335555333355553333 前导链前导链前导链前导链随从链随从链随从链随从链岗崎片段岗崎片段岗崎片段岗崎片段前导链(前导链(leading strandleading strand):):DNADNA复制复制时,一股以时,一股以3 53 5方向的方向的母链作为母链作为模板模板,新合成的链以,新合成的链以5 35 3方方向向连续连续合成的链称为前导链。合成的链称为前导链。(复制方向与解链方向一致)(复制方向与解链方向一致)滞后链(滞后链(lagging st
15、rand):lagging strand):DNADNA复制复制时,一股以时,一股以5 35 3方向的方向的母链作为母链作为模板模板,新合成链沿,新合成链沿5 35 3合成合成1000-20001000-2000个核苷酸个核苷酸不连续的小片段不连续的小片段称为滞称为滞后链。后链。(复制方向与解链方向相反(复制方向与解链方向相反)冈崎片段冈崎片段(OkazakiOkazaki)岗崎片段由岗崎片段由DNADNA连接酶连成一条完整的新链连接酶连成一条完整的新链 DNADNA半不连续复制:半不连续复制:3 53 5方向母链为方向母链为模板模板,新链,新链5 35 3方向方向连连续续合成合成5 35 3
16、方向母链为方向母链为模板模板,新链,新链5 35 3方向合成许多方向合成许多不连续不连续的片段(冈崎片段)的片段(冈崎片段)这种复制方式称之为半不连续复制。这种复制方式称之为半不连续复制。w去除去除RNARNA引物引物w补充空缺补充空缺w连接连接 wDNADNA聚合酶聚合酶的小片段的小片段 5 35 3外切酶外切酶wDNADNA聚合酶聚合酶的大片段的大片段 3 53 5外切酶外切酶 5 3 5 3聚合酶聚合酶wDNADNA连接酶连接酶3.3.终止终止 当复制叉到分子末端,复制即终止。当复制叉到分子末端,复制即终止。w严格的碱基配对规律严格的碱基配对规律w聚合酶的选择作用聚合酶的选择作用w复制时
17、有即时的校读功能复制时有即时的校读功能 3 53 5外切酶功能外切酶功能wDNADNA损伤的修复损伤的修复三、保证高保真度复制的机制三、保证高保真度复制的机制四、逆转录作用四、逆转录作用w以以RNARNA为模板合成为模板合成DNADNA的过程。的过程。w逆转录酶(依赖于逆转录酶(依赖于RNARNA的的DNADNA聚合酶)聚合酶)。逆转录酶性质逆转录酶性质 催化三种反应:催化三种反应:RNA指导的指导的DNA合成合成 RNA水解水解 DNA指导的指导的DNA合成合成病毒病毒病毒病毒 RNA RNARNARNA DNA(-)DNA(-)DNA(-)DNA(-)DNA(-)DNA(-)DNA(+)D
18、NA(+)指导指导指导指导DNADNA合成合成合成合成水解水解水解水解指导指导指导指导DNADNA合成合成合成合成逆转录酶的作用逆转录酶的作用逆转录酶的作用逆转录酶的作用w自发因素自发因素自发因素自发因素w物理因素物理因素物理因素物理因素w化学因素化学因素化学因素化学因素w紫外线损伤紫外线损伤紫外线损伤紫外线损伤w电离辐射损伤(电离辐射损伤(电离辐射损伤(电离辐射损伤(X X X X线线线线/线)线)线)线)w亚硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐 C U C U C U C Uw5-5-5-5-溴尿嘧啶溴尿嘧啶溴尿嘧啶溴尿嘧啶 5-BU A 5-BU A 5-BU A 5-BU A w氮芥类氮芥类
19、氮芥类氮芥类 烷化剂烷化剂烷化剂烷化剂w羟胺羟胺羟胺羟胺 C-A C-A C-A C-A GG羟胺羟胺羟胺羟胺1.1.1.1.造成损伤的原因造成损伤的原因造成损伤的原因造成损伤的原因五、五、DNADNA的损伤、修复与突变的损伤、修复与突变2.DNA2.DNA损伤修复损伤修复w光修复光修复w切除修复切除修复w重组修复重组修复光复活光复活/光修复光修复光复活酶识别光复活酶识别TT TT 与之形成复合物与之形成复合物吸收光能吸收光能使使TTTT解开成为单体解开成为单体酶从复合物中释放酶从复合物中释放仅作用于仅作用于UVUV形成的产物形成的产物切除修复发生在复制之前切除修复发生在复制之前限制性内切酶:
20、限制性内切酶:主要降解外源主要降解外源DNADNA具有严格的碱基序列专一性具有严格的碱基序列专一性EcoREcoR第一个字母为大肠杆菌第一个字母为大肠杆菌属名属名;coco为为种名种名的头两个字母;的头两个字母;第四个字母第四个字母R R表示大肠杆菌的表示大肠杆菌的菌株菌株;最后一个罗马数字表示该细菌中已分离出的最后一个罗马数字表示该细菌中已分离出的这一类这一类酶的编号酶的编号。3 3、DNADNA突变突变第第2 2节节 RNA RNA的生物合成的生物合成w基因转录基因转录:以以DNADNA为模板的为模板的RNARNA聚合酶的催化聚合酶的催化下,按照碱基配对原则,以四种下,按照碱基配对原则,以
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