《高级生化作业答案》PPT课件.ppt
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1、1.欲从一种真菌中分离苹果酸脱氢酶,现将培养好的欲从一种真菌中分离苹果酸脱氢酶,现将培养好的菌体加入缓冲液,通过超声波法破碎细胞,过滤得到菌体加入缓冲液,通过超声波法破碎细胞,过滤得到含酶的抽提液。假设已建立该酶活力测定的方法,请含酶的抽提液。假设已建立该酶活力测定的方法,请设计一个硫酸铵分级沉淀获得该酶的方法,写出具体设计一个硫酸铵分级沉淀获得该酶的方法,写出具体步骤,并计算分级沉淀时硫酸铵的加入量。步骤,并计算分级沉淀时硫酸铵的加入量。1)20%饱和度硫酸铵沉淀饱和度硫酸铵沉淀 取取100 ml 酶抽提液置冰浴。根据硫酸铵饱和度表,查酶抽提液置冰浴。根据硫酸铵饱和度表,查出应称取固体硫酸铵
2、,每次缓慢加入少许硫酸铵,边加出应称取固体硫酸铵,每次缓慢加入少许硫酸铵,边加边搅拌,同时检测溶液边搅拌,同时检测溶液pH值,如果值,如果pH呈酸性可加少量呈酸性可加少量NaOH维持酶抽提液的维持酶抽提液的pH值。置冰箱值。置冰箱4 h,离心,沉淀置,离心,沉淀置冰箱用于测酶活力,上清液测量体积。冰箱用于测酶活力,上清液测量体积。2)30%饱和度硫酸铵沉淀饱和度硫酸铵沉淀 假如上清液体积为假如上清液体积为98 ml,根据表计算称取固体硫,根据表计算称取固体硫酸铵为,其他操作同上。酸铵为,其他操作同上。3)40%-80%饱和度硫酸铵沉淀饱和度硫酸铵沉淀 根据上清液体积计算称取固体硫酸铵量见下表根
3、据上清液体积计算称取固体硫酸铵量见下表上清液体积上清液体积 硫酸铵饱和度硫酸铵饱和度 固体硫酸铵(固体硫酸铵(g)95 40%5.3290 50%5.2285 60%5.180 70%4.9675 80%4.884)将不同饱和度获得的硫酸铵沉淀用少量缓冲液溶解,将不同饱和度获得的硫酸铵沉淀用少量缓冲液溶解,测酶活力。以不同饱和度硫酸铵为横坐标,酶活力为测酶活力。以不同饱和度硫酸铵为横坐标,酶活力为纵坐标作图,见下图。纵坐标作图,见下图。0 20%30%40%50%60%70%80%酶活力 硫酸铵饱和度1020304050(酶活力单位 U/ml)5)根据上图向酶抽提液加根据上图向酶抽提液加40%
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