仪器分析紫外-可见分光光度法.ppt

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1、 第一章第一章 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法v 掌握掌握紫外紫外-可见分光光度法的基本原可见分光光度法的基本原理理 及其方法应用；及其方法应用；v 熟悉熟悉紫外紫外-可见分光光度计的结构；可见分光光度计的结构；教学目标教学目标（一）、知识目标（一）、知识目标v 熟练操作各种型号的熟练操作各种型号的紫外紫外-可见分光光度计；可见分光光度计；v 能应用能应用紫外紫外-可见分光光度法进行样品的可见分光光度法进行样品的 定性、定量分析。定性、定量分析。（二）、能力目标（二）、能力目标 利用物质对利用物质对紫外紫外-可见光可见光的的选择性吸收选择性吸收，用用紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度

2、计测定物质对紫外测定物质对紫外-可可见光的吸收程度并进行见光的吸收程度并进行定性、定量定性、定量分析。分析。紫外紫外-可见分光光度法简介可见分光光度法简介1 1、光的波粒二象性、光的波粒二象性波动性波动性粒子性粒子性一、光的基本性质一、光的基本性质 波长波长 ：两个相邻波峰或波谷间的距离（：两个相邻波峰或波谷间的距离（nmnm）频率频率 ：单位时间里通过一固定点处波的数目（：单位时间里通过一固定点处波的数目（S S-1-1）光的波动性光的波动性光以波的形式传播，可用波长、频率来表示。光以波的形式传播，可用波长、频率来表示。=c/=c/c=310 c=31010 10 cm/scm/s返回 E=

3、h E=h =h=hc/c/h h为普朗克常数为普朗克常数 1010-34-34光的粒子性光的粒子性光由光子组成，具有能量。光由光子组成，具有能量。E E越大，越大，越小。越小。E E越小，越小，越大。越大。根据根据E=hc/E=hc/可知可知能能 量量 小小大大紫、蓝、青、绿、黄、橙、红紫、蓝、青、绿、黄、橙、红可见光波长范围可见光波长范围400-760400-760nmnm波波 谱谱 分分 区区书上书上P5光光 谱谱 分分 区区能能 量量 小小200nm400nm760nm 大大波波 长长光谱区域光谱区域紫外光区紫外光区可见光区可见光区中红外中红外分析方法分析方法紫外紫外可见分光光度法可见

4、分光光度法25um红外光谱法红外光谱法紫、蓝、青、绿、黄、橙、红各种可见光的波长各种可见光的波长颜颜 色色波波 段（段（nmnm）紫紫蓝蓝青蓝青蓝青青绿绿黄绿黄绿黄黄橙橙红红4004504004504504804504804804904804904905004905005005605005605605805605805806005806006006506006506507606507602、单色光、复合光与光的互补、单色光、复合光与光的互补 复合光：复合光：由不同波长的单色光按一定比例由不同波长的单色光按一定比例 组成的光，如白光。组成的光，如白光。单色光单色光：具有单一波长的光。：具有单一波

5、长的光。若两种光可组成白光，则它们为互补光。若两种光可组成白光，则它们为互补光。光的互补：光的互补：互互 补补 光光 示示 意意 图图 物质对光的吸收过程（物质对光的吸收过程（P7P7）二、溶液对光的选择性吸收二、溶液对光的选择性吸收 物质对光的吸收具有选择性物质对光的吸收具有选择性完全吸收完全吸收完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光复合光复合光溶液对光的吸收与溶液颜色的关系溶液对光的吸收与溶液颜色的关系1）若溶液透明、均匀，人眼看到的溶液颜色是若溶液透明、均匀，人眼看到的溶液颜色是由透射光的波长决定的。由透射光的波长决定的。2）当入色光为白

6、光（复合光），溶液吸收的光与当入色光为白光（复合光），溶液吸收的光与透射的光互补。透射的光互补。光的互补：蓝光的互补：蓝 黄黄结论：结论：溶液的颜色溶液的颜色（透射光）（透射光）吸收光吸收光颜颜 色色波波 段（段（nmnm）黄绿黄绿黄黄橙橙红红紫红紫红紫紫蓝蓝青蓝青蓝青青紫紫蓝蓝青蓝青蓝青青绿绿黄绿黄绿黄黄橙橙红红400450400450450480450480480490480490490500490500500560500560560580560580580600580600600650600650650760650760n溶液颜色与吸收光颜色和波段的关系溶液颜色与吸收光颜色和波段的关系三

7、、紫外三、紫外-可见分光光度法的基本原理可见分光光度法的基本原理v 朗伯朗伯比耳定律（光吸收定律）比耳定律（光吸收定律）布格布格(Bouguer)(Bouguer)和朗伯和朗伯(Lambert)(Lambert)先后于先后于17291729年年和和17601760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。系。A A b b 18521852年比耳年比耳(Beer)(Beer)又提出了光的吸收程度和吸又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。收物浓度之间也具有类似的关系。A A c c 二者的结合称为朗伯二者的结合称为朗伯比耳定律比耳定律。T-T-透

8、过率透过率A-吸光度吸光度 b-b-液层厚度（光程长度）液层厚度（光程长度）c-c-被测物浓度被测物浓度k-k-吸光系数吸光系数 吸光度吸光度A：表征物质对光吸收程度的量。：表征物质对光吸收程度的量。A=lgI0/It=-lgT =kbc1、朗伯、朗伯比耳定律比耳定律注意注意k的符号与的符号与c的的对应关系对应关系 关于关于关于关于K K K K：BK K 的物理意义：单位厚度、单位浓度溶液对一定波的物理意义：单位厚度、单位浓度溶液对一定波长光的吸光度。长光的吸光度。B与溶液性质、温度和入射光波长有关。与溶液性质、温度和入射光波长有关。BK K越大，吸收能力越强，灵敏度越高。越大，吸收能力越强

9、，灵敏度越高。BK K与浓度单位之间的变化关系（与浓度单位之间的变化关系（P9P9）c c的单位的单位K K的单位的单位名称名称符号符号mol/Lmol/LL/L/（molcmmolcm）摩尔吸光系数摩尔吸光系数 g/Lg/LL/L/（gcmgcm）质量吸光系数质量吸光系数 摩尔吸光系数摩尔吸光系数-吸光物质的特征常数；在最大吸收波长吸光物质的特征常数；在最大吸收波长 maxmax处，常以处，常以 maxmax表示表示 。-在温度和介质条件一定时，在温度和介质条件一定时，仅与吸光物质的结构与性质有关，仅与吸光物质的结构与性质有关，可作为定性鉴定的参数；可作为定性鉴定的参数；-不随浓度不随浓度c

10、 c 和光程长度和光程长度b b 的改变而改变：的改变而改变：A/b cA/b c。-在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1 mol/L1 mol/L、液层厚度为、液层厚度为1cm1cm时该溶液在某时该溶液在某一波长下的吸光度。一波长下的吸光度。-吸光能力与测定灵敏度的度量；吸光能力与测定灵敏度的度量；maxmax越大表明该物质的吸光能力越大表明该物质的吸光能力越强，测定的灵敏度越高。越强，测定的灵敏度越高。10105 5：超高灵敏：超高灵敏 =(6=(610)1010)104 4：灵敏：灵敏 10104 4：不灵敏：不灵敏例例：用用1,10-二二氮氮菲菲光光度度法法测测定定铁铁，已已知知Fe

11、2+浓浓度度为为，比比色色皿皿厚厚度度2厘厘米米，在在=508nm测测得得配合物吸光度，求配合物吸光度，求 。已知已知MFe=55.84g/mol（1.1104-1.cm-1）2 2、应用朗伯、应用朗伯比耳定律时应注意的问题比耳定律时应注意的问题入射光为平行单色光，且垂直照射；入射光为平行单色光，且垂直照射；吸光质点之间无相互作用；吸光质点之间无相互作用；吸光度具有加和性吸光度具有加和性（A总总=A1+A2+）。）。v 吸收曲线吸收曲线（吸收光谱）（吸收光谱）v 标准（工作）曲线标准（工作）曲线3 3、朗伯、朗伯比耳定律的应用比耳定律的应用 绘绘制制方方法法：在在c c、b b固固定定的的情情

12、况况下下,测测定定某某一一浓浓度度的的标标准准溶溶液液在在各各个个波波长长下下的的吸吸光光度度，作作A-A-图。图。吸吸 收收 曲曲 线线吸光度随波长变化的曲线吸光度随波长变化的曲线（P6P6）XXXXXX的吸收曲线的吸收曲线400500600(nm)图例：图例：吸收曲线的绘制练习吸收曲线的绘制练习试验溶液：试验溶液：试验溶液：试验溶液：（nm）480490500505510 A0.1930.2250.3380.3850.405（nm）515520525530540 A0.3900.3070.3270.2820.143XXX的吸收曲线实验数据表的吸收曲线实验数据表吸收曲线的特点吸收曲线的特点同

13、一物质同一物质 不同的物质不同的物质因其结构不同而具有不同的吸收曲线；因其结构不同而具有不同的吸收曲线；浓度不同，其吸收曲线的形状和浓度不同，其吸收曲线的形状和max的的位置不变，但在同一波长下吸光度随浓位置不变，但在同一波长下吸光度随浓度的增大而增大。度的增大而增大。连续光谱（宽谱带）连续光谱（宽谱带）吸收曲线的意义吸收曲线的意义v为定量分析选择测量波长；为定量分析选择测量波长；v 定性分析。定性分析。返回返回 在在、b b固固定定的的情情况况下下,测测定定一一系系列列不不同同浓浓度的标准溶液的吸光度，作度的标准溶液的吸光度，作A-cA-c图。图。标准（工作）曲线标准（工作）曲线 绘制方法绘

14、制方法：吸光度随浓度变化的曲线吸光度随浓度变化的曲线注意浓度的不同表示方法注意浓度的不同表示方法铁的标准曲线铁的标准曲线标准（工作）曲线的绘制练习标准（工作）曲线的绘制练习标准系列：标准系列：标准系列：标准系列：浓度浓度（mg/Lmg/L）0.100.200.300.400.500.60吸光度吸光度A A0.0970.2000.3040.4080.5100.613XXX的标准曲线实验数据表的标准曲线实验数据表浓度（浓度（mg/Lmg/L）吸吸光光度度A A为何有些点偏低？为何有些点偏低？有些点偏高？有些点偏高？朗伯朗伯比耳定律的偏离比耳定律的偏离吸光度吸光度A浓度浓度 c 正偏离正偏离负偏离负

15、偏离偏离原因偏离原因非单色光引起的偏离：非单色光引起的偏离：LB定律要求入射光定律要求入射光为单色光，但目前仪器提供的入射光是由波为单色光，但目前仪器提供的入射光是由波长范围较窄的光带组成的复合光。长范围较窄的光带组成的复合光。非平行入射光引起的偏离非平行入射光引起的偏离介质不均匀引起的偏离介质不均匀引起的偏离化学因素引起的偏离：化学因素引起的偏离：高浓度时引起溶液中高浓度时引起溶液中吸光粒子之间相互作用上升，使吸光能力发吸光粒子之间相互作用上升，使吸光能力发生变化；化学反应引起的偏离。生变化；化学反应引起的偏离。如何评价？如何评价？标准曲线的线性标准曲线的线性如何保证？如何保证？-线性相关系

16、数线性相关系数-仪器、仪器、浓度范围、浓度范围、基本操作基本操作通过人眼比较溶液颜色深浅来测定其中待测物质含量通过人眼比较溶液颜色深浅来测定其中待测物质含量比色管架1、目视比色法目视比色法四、紫外四、紫外-可见分光光度法分类可见分光光度法分类（1 1）优点：设备简单、操作快速、灵敏度较高。）优点：设备简单、操作快速、灵敏度较高。（2 2）缺点：准确性差，主观误差约达）缺点：准确性差，主观误差约达5-20%5-20%。（3 3）适用于准确度要求不高的常规样品分析，）适用于准确度要求不高的常规样品分析，如钢铁炉前分析、水质分析中的色度分析。如钢铁炉前分析、水质分析中的色度分析。目视比色法的优缺点目

17、视比色法的优缺点2 2、分光光度法、分光光度法 通过仪器测定被测溶液对某一波长光的通过仪器测定被测溶液对某一波长光的吸收而确定其中物质的含量。吸收而确定其中物质的含量。1 1、灵敏度高：、灵敏度高：试样中试样中1%-0.001%微量成分微量成分2 2、准确度高：、准确度高：相对误差相对误差2%-5%（1%-2%）3 3、仪器结构简单、操作简便、性价比高、仪器结构简单、操作简便、性价比高4 4、应用广泛：、应用广泛：几乎所有的无机离子及许多有机物几乎所有的无机离子及许多有机物紫外紫外-可见分光光度法的特点可见分光光度法的特点五、紫外五、紫外-可见分光光度计可见分光光度计 1、仪器结构框图、仪器结

18、构框图工作原理及仪器结构示意图工作原理及仪器结构示意图光源光源光源光源碘碘碘碘钨钨钨钨灯灯灯灯氘氘氘氘灯灯灯灯单色器单色器单色器单色器测量池测量池测量池测量池参比池参比池参比池参比池样品池样品池样品池样品池光光光光电电电电倍倍倍倍增增增增管管管管数据处理和仪器控制数据处理和仪器控制数据处理和仪器控制数据处理和仪器控制2、紫外、紫外-可见分光光度计的类型可见分光光度计的类型 单波长单光束（单波长单光束（P15）单波长双光束单波长双光束双波长双波长3 3、紫外、紫外-可见分光光度计可见分光光度计 主要部件主要部件v 光源光源 在仪器工作的波长范围内，提供在仪器工作的波长范围内，提供连续连续、有足够

19、发、有足够发射射强度强度和良好和良好稳定性稳定性的复合光，而且发射光的强度随的复合光，而且发射光的强度随波长的变化应尽可能小。波长的变化应尽可能小。可见区：钨丝灯或碘钨灯，波长范围可见区：钨丝灯或碘钨灯，波长范围320-3200nm320-3200nm。紫外区：氢灯或氘灯，波长范围紫外区：氢灯或氘灯，波长范围200-375nm200-375nm。基本要求基本要求常用光源常用光源紫外光源紫外光源-氘灯氘灯(185-375 nm)(185-375 nm)可见光源可见光源-钨灯钨灯(320-1000nm)(320-1000nm)v 单色器单色器单色器作用：单色器作用：从光源发出的复合光中分出从光源发

20、出的复合光中分出所需要的单色光。所需要的单色光。单色器组成：单色器组成：由入射狭缝、准光器（透镜由入射狭缝、准光器（透镜或凹面反射镜使入射光成平行光）、色散或凹面反射镜使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狭缝等组成。元件、聚焦元件和出射狭缝等组成。单色器的核心部分是单色器的核心部分是色散元件色散元件（如玻璃棱（如玻璃棱镜和光栅），起镜和光栅），起分光分光的作用。的作用。吸收池用于盛放分析试样；吸收池用于盛放分析试样；可见光区可用玻璃吸收池，可见光区可用玻璃吸收池，紫外区用石英吸收池；紫外区用石英吸收池；吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向；吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向；吸收池要

21、配对。因为吸收池材料本身吸光吸收池要配对。因为吸收池材料本身吸光 特征以及吸收池的光程长度的精度等对特征以及吸收池的光程长度的精度等对 分析结果都有影响。分析结果都有影响。v 吸收池吸收池 检测器的功能：检测器的功能：检测透射光强度、将光学检测透射光强度、将光学 信号转变成电信号。信号转变成电信号。常用的检测器有光电池、光电管和常用的检测器有光电池、光电管和 光电倍增管等。光电倍增管等。v 检测器检测器功能：功能：放大信号、显示或记录信号。放大信号、显示或记录信号。常用的检测器有数字显示、自动记录仪等。常用的检测器有数字显示、自动记录仪等。v 信号处理及显示系统信号处理及显示系统各部件作用及材

22、料各部件作用及材料光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器材料材料氢灯氢灯/氘氘灯灯钨丝灯钨丝灯棱镜（玻璃、棱镜（玻璃、石英）石英）光栅光栅比色皿（玻比色皿（玻璃、石英）璃、石英）光电管光电管光电池光电池光电倍增管光电倍增管作用作用发出连续发出连续光源光源将复合光分为将复合光分为单色光单色光盛放盛放溶液溶液 将光信号转变为将光信号转变为电信号电信号型号型号波长波长/nm/nm分光器件分光器件数据处理数据处理指示指示产地产地721721340-1000340-1000光栅光栅微机微机数显数显上海天普上海天普722722325-1000325-1000光栅光栅微机微机数显数显上海天普上海天普S

23、22PCS22PC 34034010001000光栅光栅微机微机数显数显 上海棱光上海棱光 755B 755B 190-1100190-1100光栅光栅微机微机/打印打印数显数显上海天普上海天普T6T6系列系列 190-1100 190-1100光栅光栅微机微机/打印打印数显数显北京普析北京普析 UV2300 UV2300 200800200800光栅光栅微机微机液晶显示器液晶显示器 上海天美上海天美 U1800U1800190-1100190-1100光栅光栅微机微机液晶显示器液晶显示器 日本日立日本日立UV2450 UV2450 190190900900衍射光栅衍射光栅 微机微机/打印打印

24、液晶显示器液晶显示器 日本岛津日本岛津 常用紫外可见分光光度计常用紫外可见分光光度计721型分光光度计型分光光度计722型分光光度计型分光光度计4 4、分光光度计的使用、分光光度计的使用 预热预热20min。调节调节T=0。调节调节T=100%（A=0）。）。测定溶液的吸光度测定溶液的吸光度A。六、紫外六、紫外-可见分光光度法的应用可见分光光度法的应用n 无机物、有机物吸收光谱的特点无机物、有机物吸收光谱的特点一、定性分析一、定性分析n 定性分析的方法定性分析的方法定性分析的方法定性分析的方法n 纯物质对照纯物质对照n 与标准谱图对照与标准谱图对照返回back标准吸收光谱谱图标准吸收光谱谱图B

25、SadtlerSadtler.SdandardSdandard Spectra(Ultraviolet).Spectra(Ultraviolet).HeydenHeyden,London,1978.London,1978.共收集了共收集了4600046000种化合物的紫外吸收光谱种化合物的紫外吸收光谱BR.A.R.A.FriedelFriedel and M.and M.OrchinOrchin,Ultraviolet Spectra of,Ultraviolet Spectra of Aromatic Compounds,Aromatic Compounds,Wiley,New York,1

26、951.Wiley,New York,1951.共收集了共收集了579579种芳香化合物的紫外吸收光谱种芳香化合物的紫外吸收光谱BKenzoKenzo.Hirayama,.Hirayama,Handbook of Ultraviolet and Visible Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds,Absorption Spectra of Organic Compounds,New York,New York,Plenum,1967Plenum,1967BM.J.M.J.Kaml

27、etKamlet,Organic Electronic Spectra Data,Organic Electronic Spectra Data,Vol.Vol.1,19461952,1,19461952,InterscienceInterscience，19601960返回返回有机化合物的紫外吸收特性有机化合物的紫外吸收特性常用术语常用术语1）、）、生色团生色团：能吸收近紫外光、可见光引：能吸收近紫外光、可见光引起电子跃迁的基团。起电子跃迁的基团。如：含如：含 键的基团（三键、双键）键的基团（三键、双键）2）、）、助色团助色团：能使有机物吸收峰向长波方：能使有机物吸收峰向长波方向移动并使吸收

28、强度增强的基团。向移动并使吸收强度增强的基团。如：含有孤电子对的氧、氮、卤素等基团如：含有孤电子对的氧、氮、卤素等基团注意：注意：对对“色色”的理解的理解3）、）、紫（蓝）移紫（蓝）移和和红移红移：因取代基的变更：因取代基的变更或溶剂的改变使或溶剂的改变使吸收峰波长发生移动吸收峰波长发生移动。红移红移：波长变长：波长变长 蓝（紫）移蓝（紫）移：波长变短：波长变短几类有机化合物的紫外吸收特性几类有机化合物的紫外吸收特性1、饱和烃类及其衍生物、饱和烃类及其衍生物 烷烃烷烃（-*，在，在远紫外区产生吸收，一般远紫外区产生吸收，一般作溶剂）作溶剂）卤代烷烃卤代烷烃（n-n-*，因助色团的作用，吸收因助

29、色团的作用，吸收光谱红移，在远紫外和近紫外区产生吸收）光谱红移，在远紫外和近紫外区产生吸收）v2、不饱和烯烃及共轭烯烃、不饱和烯烃及共轭烯烃 简单烯烃（远紫外区）简单烯烃（远紫外区）共轭烯烃共轭烯烃（含多生色团，近紫外区及可见（含多生色团，近紫外区及可见区产生吸收，且强度强，有实际意义）区产生吸收，且强度强，有实际意义）化合物化合物溶剂溶剂 maxmax/nm/nm maxmax L/molcm L/molcmN=1N=1己烯己烯气气 体体1621621000010000N=2N=21,3-1,3-丁二烯丁二烯 己己 烷烷 2172172090020900N=3N=31,3,5-1,3,5-己

30、三烯己三烯 异辛烷异辛烷 2682684270042700N=4N=41,3,5,7-1,3,5,7-辛四烯辛四烯 环己烷环己烷 304304共轭多烯烃的吸收共轭多烯烃的吸收共轭多烯烃的吸收共轭多烯烃的吸收醛、酮醛、酮3、羰基化合物（、羰基化合物（-*，n-n-*）羧酸类及其衍生物（羧酸类及其衍生物（210nm）4、芳香族化合物、芳香族化合物（-*）苯（三个特征吸收峰）苯（三个特征吸收峰）取代苯（吸收峰红移或紫移）取代苯（吸收峰红移或紫移）杂环化合物杂环化合物 （1）五元杂环（两个吸收峰）五元杂环（两个吸收峰）（2）六元杂环（三个吸收峰）六元杂环（三个吸收峰）化合物化合物 1max/n1max

31、/nmm 1max 1max L/mol.cmL/mol.cm 2max/2max/nmnm 2max 2max L/mol.cmL/mol.cm 3max/3max/nmnm 3max 3max L/mol.cmL/mol.cm苯苯184184600006000020420479007900256256200200萘萘22022011000011000027527556005600312312289289蒽蒽25225220000020000037537579007900菲菲25225250000500002952951300013000330330250250芘芘2402408900089

32、0003343345000050000352352630630丁苜丁苜2782781300001300004734731100011000苯和一些多芳香烃化合物的吸收光谱数据苯和一些多芳香烃化合物的吸收光谱数据苯和一些多芳香烃化合物的吸收光谱数据苯和一些多芳香烃化合物的吸收光谱数据 温度温度 溶剂溶剂 pH值值n影响紫外吸收光谱的因素影响紫外吸收光谱的因素A230250270290310pH=7pH=2胞苷三磷酸在胞苷三磷酸在pH=2pH=2和和pH=7pH=7的吸收光谱的吸收光谱（nm）紫外紫外-可见分光光度法的应用可见分光光度法的应用二、检查物质的纯度二、检查物质的纯度n 无紫外无紫外-可

33、见吸收的物质（溶剂）中可见吸收的物质（溶剂）中 杂质组分杂质组分的检查的检查紫外紫外-可见分光光度法的应用可见分光光度法的应用三、定量分析三、定量分析n 单组分定量分析的方法单组分定量分析的方法n 多组分定量分析的方法多组分定量分析的方法标准（工作）曲线的应用标准（工作）曲线的应用配制标准系列溶液配制标准系列溶液配制标准系列溶液配制标准系列溶液配制未知样品溶液配制未知样品溶液配制未知样品溶液配制未知样品溶液测定某水样中微量铁含量测定某水样中微量铁含量0.60 0.60 (mg/L)(mg/L)在在、b b固定的固定的情况下，情况下，选择选择使用分光光度使用分光光度计测标准系列、计测标准系列、未

34、知样品的吸未知样品的吸光度光度A A。浓度浓度（mg/Lmg/L）0.100.200.300.400.500.60标准系列标准系列吸光度吸光度A A0.097 0.2000.304 0.408 0.5100.613未知样未知样吸光度吸光度A A0.348记录实验数据记录实验数据 绘制标准曲线绘制标准曲线 查出测定液的浓度并计算查出测定液的浓度并计算浓度浓度（c c）吸吸光光度度A AGoback数据处理数据处理?设工作曲线方程为设工作曲线方程为y=a+y=a+bxbx?x x为标准溶液的浓度；为标准溶液的浓度；y y为相应的吸光度；为相应的吸光度；a a、b b称称回归系数。回归系数。?可以通

35、过计算公式直接得到可以通过计算公式直接得到a a、b b与与 的数值。的数值。?相关系数接近相关系数接近1 1，说明工作曲线线性好。，说明工作曲线线性好。测定时，为避免使用时出差错，所作工作曲线上必须标明标准曲线的名称、所测定时，为避免使用时出差错，所作工作曲线上必须标明标准曲线的名称、所用标准溶液（或标样）名称和浓度、坐标分度和单位、测量条件（仪器型号、入用标准溶液（或标样）名称和浓度、坐标分度和单位、测量条件（仪器型号、入射光波长、吸收池厚度、参比液名称）以及制作日期和制作者姓名。射光波长、吸收池厚度、参比液名称）以及制作日期和制作者姓名。数据处理数据处理使用工作曲线法的要点使用工作曲线法

36、的要点为保证测定准确度，标样与试样溶液的组成应保持一致，为保证测定准确度，标样与试样溶液的组成应保持一致，待测试液的浓度应在工作曲线线性范围内，最好在工作曲待测试液的浓度应在工作曲线线性范围内，最好在工作曲线中部。线中部。工作曲线应定期校准，如果实验条件变动（如更换标准溶工作曲线应定期校准，如果实验条件变动（如更换标准溶液、所用试剂重新配制、仪器经过修理、更换光源等情况）液、所用试剂重新配制、仪器经过修理、更换光源等情况），工作曲线应重新绘制。，工作曲线应重新绘制。如果实验条件不变，那么每次测量只需带一个标样，校验如果实验条件不变，那么每次测量只需带一个标样，校验一下实验条件是否符合，就可直接

37、用此工作曲线测量试样一下实验条件是否符合，就可直接用此工作曲线测量试样的含量。的含量。曲线绘制不当的比例曲线绘制不当的比例Axy12以两组分为例以两组分为例1 1、当吸收光谱不重叠即、当吸收光谱不重叠即a a）1 1 处处x x 组分有吸收组分有吸收 y y 无吸收无吸收b b）2 2处处y y 组分有吸收组分有吸收 x x 无吸收无吸收则分别在两波长下测定则分别在两波长下测定x x、y y互不干扰。互不干扰。2 2、若吸收光谱重叠，即、若吸收光谱重叠，即 1 1、2 2下下x x、y y均有吸收。均有吸收。通过解方程求通过解方程求CxCx、Cy Cy A A1 1=x1x1bcbcx x+y

38、1y1bcbcy y A A2 2=x2x2bcbcx x+y2y2bcbcy y x1x1、y1 xy1 x、y y的纯溶液分别在的纯溶液分别在 1 1处测得处测得 x2x2、y2 xy2 x、y y的纯溶液分别在的纯溶液分别在 2 2处测得处测得12A公式见公式见P20-21七、紫外七、紫外-可见分光光度法测定条件的选择可见分光光度法测定条件的选择1、反应条件：、反应条件：2、测量条件、测量条件：测量波长测量波长测量的吸光度范围测量的吸光度范围测量参比测量参比pH、温度、试剂用量、温度、试剂用量化化 合合 物物取代基取代基 *n n *maxmax maxmax maxmax maxmax

39、甲基乙烯基甲酮甲基乙烯基甲酮无无2192193 6003 6003243242424甲基异丙烯基酮甲基异丙烯基酮单基单基2182188 3008 3003193192727亚乙基丙酮亚乙基丙酮单基单基2242249 7509 7503143143838丙炔醛丙炔醛无无210210-3283281313巴豆醛巴豆醛单基单基21721715 65015 6503213211919宁檬醛宁檬醛双基双基23823813 50013 5003243246565-环宁檬醛环宁檬醛三基三基2452458 3008 3003283284343 某些不饱和醛酮的吸收特性某些不饱和醛酮的吸收特性某些不饱和醛酮的吸

40、收特性某些不饱和醛酮的吸收特性返回返回苯在乙醇中的紫外吸收光谱苯在乙醇中的紫外吸收光谱苯在乙醇中的紫外吸收光谱苯在乙醇中的紫外吸收光谱 （nmnmnmnm）返回返回化合物化合物烯键带烯键带 max/nmax/nmm max max L/molcmL/molcm甲苯甲苯20720770007000间二甲苯间二甲苯-氯苯氯苯21021076007600苯酚苯酚21121162006200苯胺苯胺23023086008600苯乙烯苯乙烯2442441200012000某些苯衍生物的特征吸收带某些苯衍生物的特征吸收带某些苯衍生物的特征吸收带某些苯衍生物的特征吸收带返回返回K K2 2CrCr2 2OO7 7 和和KMnOKMnO4 4溶液的吸收曲线溶液的吸收曲线返回返回返回返回XXXXXX的吸收曲线的吸收曲线400500600(nm)Gobackmax浓度（浓度（mg/Lmg/L）吸吸光光度度A A请评价请评价该曲线的线性该曲线的线性 浓度浓度（mg/Lmg/L）0.100.200.300.400.500.60吸光度吸光度A A0.0970.2000.3040.4080.5100.613Go