动物体细胞融合与单克隆抗体.ppt

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1、不同不同DNADNA的的两个细胞两个细胞有丝分裂有丝分裂两个完整的两个完整的杂交细胞杂交细胞灭灭活活的的病病毒毒动物细胞融合过程示意图动物细胞融合过程示意图思考题思考题1.1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？2.2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？3.3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？4.4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？其他方法？动物细胞融合能利用上述两类方法吗？其他方法？5.5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合

2、再进行组织植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？种动物个体吗？6.6.你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？动物细胞融合的概念动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。单核细胞称为杂交细胞。动物细胞融合主要为获得杂交瘤细胞。

3、动物细胞融合主要为获得杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的培养主要是生产单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养主要是生产单克隆抗体。主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种抗体吗能分泌多种抗体吗？3.3.抗原侵入机体之后，引起机体

4、免疫反应产生抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种？的抗体只有一种？4.4.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？5.5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？6.6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？7.7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这怎样解决这个问题？个问题？单克隆抗体的相关问题单克隆抗体的相关问题免疫小鼠免疫小鼠培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白选择培养基上培养选择培养基上培养专一抗体检

5、验阳性专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养单克隆抗体单克隆抗体克隆杂克隆杂交细胞交细胞分开不同杂交细胞，克隆专分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体制备过程示意图单克隆抗体制备过程示意图3.单克隆抗体的应用：在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性强、灵敏度高等优越性。生物导弹教学反馈1.1.动物细胞融合技术最重要的用途是动物细胞融合技术最重要的用途是 （）A.A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体C.C.培育新物种培育新物种 D.D.

6、生产杂种细胞生产杂种细胞B2.2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）淋巴细胞淋巴细胞 淋巴细胞淋巴细胞 C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D.D.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 D3.3.（多选）（多选）19751975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是克隆抗体的制备有关的是（）A.A.效应效应B B细胞细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C DB B体外培养体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞

7、群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：_(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_。(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。(5).C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代501.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细

8、胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.C.D.C2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ()A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D细胞质酶的活性 A一.选择题3.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （）APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心A二.简答题1.淋巴细胞是由动物体-中的-细胞分化发育而来的。2.杂交瘤细

9、胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓造血干主动运输三三.思考与探究思考与探究1.1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？2.2.制备单克隆抗体时，为什么要选用制备单克隆抗体时，为什么要选用B B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？形成杂交瘤细胞？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。

10、融合。哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B B淋巴细胞，淋巴细胞，B B淋巴细胞淋巴细胞 能分能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B B淋淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的该单一抗体的B B淋巴细胞大量增殖。淋巴细胞大量增殖。B B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养

11、条件下无限增不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种殖，但不能产生抗体。因此，把一种B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。1.1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？已成功的动物细胞融合实例还有哪些？生物种类生物种类 细胞来源细胞来源 成功年代成功年代 酵母菌酵母菌鸡鸡 原生质体原生质体血红细胞血红细胞 1

12、975年年人人胡萝卜胡萝卜 腹水癌细胞腹水癌细胞原生质体原生质体 1976年年人人小鼠小鼠 纤维肉瘤细胞纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞畸胎瘤细胞 1978年年要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。2.为什么不用两个而要用多个细胞进为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？行动物细胞间的融合？就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%100%。仅。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合

13、细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个百万种以上，但是每一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含如果仅取一个脾细胞（含B B淋巴细胞）和一个

14、瘤细胞杂交，淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。3.3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌

15、所需抗体的细胞，通常用的细胞，通常用“有限稀释法有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3 34 4次，次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。交瘤细胞的克隆化培养。