实验七培养基的制备及干湿灭菌法.ppt

《实验七培养基的制备及干湿灭菌法.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验七培养基的制备及干湿灭菌法.ppt（15页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实 验 五五培养基配制培养基配制 及干、湿及干、湿热灭菌菌一一.实验目的及要求目的及要求 1.1.了解配制培养基的基本原理，掌握配了解配制培养基的基本原理，掌握配 制方法制方法 2.2.了解并掌握干、湿了解并掌握干、湿热灭菌的原理及方法菌的原理及方法二二.实验原理原理 (一一一一)培养基培养基培养基培养基 培养基是人工配制的适合微生物生培养基是人工配制的适合微生物生培养基是人工配制的适合微生物生培养基是人工配制的适合微生物生长长繁殖或繁殖或繁殖或繁殖或积积累累累累代代代代谢产谢产物的物的物的物的营营养物养物养物养物质质，用以培养、分离、，用以培养、分离、，用以培养、分离、，用以培养、分离、鉴鉴

2、定、保存定、保存定、保存定、保存各种微生物或各种微生物或各种微生物或各种微生物或积积累代累代累代累代谢产谢产物。不同微生物物。不同微生物物。不同微生物物。不同微生物选选用不同培用不同培用不同培用不同培养基，但是，不同种养基，但是，不同种养基，但是，不同种养基，但是，不同种类类的培养基中，一般的培养基中，一般的培养基中，一般的培养基中，一般应应含有水分、含有水分、含有水分、含有水分、碳源、氮源、无机碳源、氮源、无机碳源、氮源、无机碳源、氮源、无机盐盐、生、生、生、生长长因素等。因素等。因素等。因素等。按照配制培养基的按照配制培养基的营养物养物质来源可分来源可分为：天然培养基天然培养基天然培养基天

3、然培养基 ：利用天然的有机物配制而成的培养基。：利用天然的有机物配制而成的培养基。：利用天然的有机物配制而成的培养基。：利用天然的有机物配制而成的培养基。如：牛肉膏蛋白如：牛肉膏蛋白如：牛肉膏蛋白如：牛肉膏蛋白胨胨培养基。培养基。培养基。培养基。半合成培养基：既有天然物半合成培养基：既有天然物半合成培养基：既有天然物半合成培养基：既有天然物质质又含化学又含化学又含化学又含化学试剂试剂的培养基的培养基的培养基的培养基称半合成培养基。如称半合成培养基。如称半合成培养基。如称半合成培养基。如马铃马铃薯蔗糖培养基。薯蔗糖培养基。薯蔗糖培养基。薯蔗糖培养基。合成培养基：采用多种化学合成培养基：采用多种化

4、学合成培养基：采用多种化学合成培养基：采用多种化学试剂试剂配制的，各种成分及配制的，各种成分及配制的，各种成分及配制的，各种成分及其用量都确切知道的培养基。如高氏一号培养基。其用量都确切知道的培养基。如高氏一号培养基。其用量都确切知道的培养基。如高氏一号培养基。其用量都确切知道的培养基。如高氏一号培养基。根据培养基制成后的物理状根据培养基制成后的物理状态可分可分为：液体培养基：呈液体状液体培养基：呈液体状液体培养基：呈液体状液体培养基：呈液体状态态的培养基。的培养基。的培养基。的培养基。固体培养基：外固体培养基：外固体培养基：外固体培养基：外观观呈固体状呈固体状呈固体状呈固体状态态的培养基。的

5、培养基。的培养基。的培养基。半固体培养基：将各种半固体培养基：将各种半固体培养基：将各种半固体培养基：将各种营营养成份按比例配制成养成份按比例配制成养成份按比例配制成养成份按比例配制成营营养液养液养液养液后，加入适量固化后，加入适量固化后，加入适量固化后，加入适量固化剂剂，处处于半固体状于半固体状于半固体状于半固体状态态的培养基。的培养基。的培养基。的培养基。培养基的分类（二）干、湿（二）干、湿热灭菌菌干干干干热灭热灭菌是利用高温使微生物菌是利用高温使微生物菌是利用高温使微生物菌是利用高温使微生物细细胞内的蛋白胞内的蛋白胞内的蛋白胞内的蛋白质质凝固凝固凝固凝固变变性而达到性而达到性而达到性而达

6、到灭灭菌的目的。菌的目的。菌的目的。菌的目的。细细胞内的蛋白胞内的蛋白胞内的蛋白胞内的蛋白质质凝固性与其本身的含水量有关，在菌凝固性与其本身的含水量有关，在菌凝固性与其本身的含水量有关，在菌凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受体受体受体受热时热时，当，当，当，当环环境和境和境和境和细细胞内含水量越大，胞内含水量越大，胞内含水量越大，胞内含水量越大，则则蛋白蛋白蛋白蛋白质质凝固就越快，反凝固就越快，反凝固就越快，反凝固就越快，反之含水量越小，凝固之含水量越小，凝固之含水量越小，凝固之含水量越小，凝固缓缓慢。慢。慢。慢。高高高高压压蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽灭灭菌是将待菌是将待菌是将待菌是将待灭灭菌的物品放

7、在一个密菌的物品放在一个密菌的物品放在一个密菌的物品放在一个密闭闭的加的加的加的加压灭压灭菌菌菌菌锅锅内，内，内，内，通通通通过过加加加加热热，使，使，使，使灭灭菌菌菌菌锅锅隔套隔套隔套隔套间间的水沸的水沸的水沸的水沸腾腾而而而而产产生蒸汽。从而使沸点增高，生蒸汽。从而使沸点增高，生蒸汽。从而使沸点增高，生蒸汽。从而使沸点增高，得到高于得到高于得到高于得到高于100100100100的温度。的温度。的温度。的温度。导导致菌体蛋白致菌体蛋白致菌体蛋白致菌体蛋白质质凝固凝固凝固凝固变变性而达到性而达到性而达到性而达到灭灭菌的目菌的目菌的目菌的目的。的。的。的。三.材料仪器1.1.1.1.药药品：牛

8、肉膏、蛋白品：牛肉膏、蛋白品：牛肉膏、蛋白品：牛肉膏、蛋白胨胨、氯氯化化化化钠钠、可溶性淀粉、可溶性淀粉、可溶性淀粉、可溶性淀粉 、KKKK2 2 2 2HPOHPOHPOHPO4 4 4 4、KHKHKHKH2 2 2 2POPOPOPO4 4 4 4 、蒸蒸蒸蒸馏馏水、水、水、水、琼琼脂、脂、脂、脂、1mol1mol1mol1mol氢氢氧化氧化氧化氧化钠钠、花生油、葡萄、花生油、葡萄、花生油、葡萄、花生油、葡萄糖、溴甲酚紫、中性糖、溴甲酚紫、中性糖、溴甲酚紫、中性糖、溴甲酚紫、中性红红、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇 2.2.2.2.器材：天平、器材：天平、器材：天平、器材：天平、药药匙、瓷缸、玻

9、璃棒、匙、瓷缸、玻璃棒、匙、瓷缸、玻璃棒、匙、瓷缸、玻璃棒、电电炉、炉、炉、炉、PHPHPHPH试纸试纸、试试管、管、管、管、三角瓶、移液管、牛皮三角瓶、移液管、牛皮三角瓶、移液管、牛皮三角瓶、移液管、牛皮纸纸、棉花、棉花、棉花、棉花、线绳线绳、高、高、高、高压锅压锅。四.实验内容及方法 1.1.称量称量按照培养基配方，准确称量各成份放于按照培养基配方，准确称量各成份放于按照培养基配方，准确称量各成份放于按照培养基配方，准确称量各成份放于烧烧杯（液体培养基）杯（液体培养基）杯（液体培养基）杯（液体培养基）或三角瓶（固体培养基）中。或三角瓶（固体培养基）中。或三角瓶（固体培养基）中。或三角瓶（固

10、体培养基）中。2.2.溶解溶解 向上述向上述向上述向上述烧烧杯中加入所需要的水量，杯中加入所需要的水量，杯中加入所需要的水量，杯中加入所需要的水量，搅搅拌，加拌，加拌，加拌，加热热使其溶解。如使其溶解。如使其溶解。如使其溶解。如是配制固体培养基，在是配制固体培养基，在是配制固体培养基，在是配制固体培养基，在琼琼脂的熔化脂的熔化脂的熔化脂的熔化过过程中，需不断程中，需不断程中，需不断程中，需不断搅搅拌，并拌，并拌，并拌，并控制火力不要使培养基溢出或控制火力不要使培养基溢出或控制火力不要使培养基溢出或控制火力不要使培养基溢出或烧烧焦。待完全熔化后，焦。待完全熔化后，焦。待完全熔化后，焦。待完全熔化

11、后，补补足所足所足所足所失水分。失水分。失水分。失水分。培养基的制备过程培养基的制备过程称量称量-溶解溶解-调节调节pHpH值值-过滤过滤-分装及包扎分装及包扎-灭菌灭菌-灭菌后试管灭菌后试管摆放斜面摆放斜面 3.3.3.3.调节调节pHpHpHpH值值 用玻璃棒沾少用玻璃棒沾少用玻璃棒沾少用玻璃棒沾少许许液体，液体，液体，液体，测测量量量量PHPHPHPH值值。用。用。用。用氢氢氧化氧化氧化氧化钠调节钠调节PHPHPHPH。4.4.4.4.过滤过滤用用用用滤纸滤纸或多或多或多或多层纱层纱布布布布过滤过滤，一般无特殊要求可，一般无特殊要求可，一般无特殊要求可，一般无特殊要求可省去。省去。省去。

12、省去。5.5.5.5.分装及包扎分装及包扎分装及包扎分装及包扎 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入根据不同的需要，可将制好的培养基分装入根据不同的需要，可将制好的培养基分装入根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮口塞上棉塞。最后用牛皮口塞上棉塞。最后用牛皮口塞上棉塞。最后用牛皮纸纸将棉塞部分包好。将棉塞部分包好。将棉塞部分包好。将棉塞部分包好。6.6.6.6.灭灭菌：高菌：高菌：高菌：高压压蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽灭灭菌，

13、菌，菌，菌，121121121121灭灭菌菌菌菌20202020分分分分钟钟。7.7.7.7.灭灭菌后菌后菌后菌后试试管管管管摆摆放斜面。放斜面。放斜面。放斜面。需配制的培养基需配制的培养基1 1、牛肉膏蛋白胨培养基（、牛肉膏蛋白胨培养基（、牛肉膏蛋白胨培养基（、牛肉膏蛋白胨培养基（100ml100ml）2 2、马铃薯培养基（、马铃薯培养基（、马铃薯培养基（、马铃薯培养基（200ml200ml）3 3、油脂培养基（、油脂培养基（、油脂培养基（、油脂培养基（100ml100ml）4 4、淀粉培养基（、淀粉培养基（、淀粉培养基（、淀粉培养基（100ml100ml）5 5、伊红美兰培养基（、伊红美兰

14、培养基（、伊红美兰培养基（、伊红美兰培养基（100ml100ml）6 6、蛋白胨水培养基（、蛋白胨水培养基（、蛋白胨水培养基（、蛋白胨水培养基（100ml100ml）7 7、糖发酵培养基（、糖发酵培养基（、糖发酵培养基（、糖发酵培养基（100ml100ml）8 8、葡萄糖蛋白胨水培养基（、葡萄糖蛋白胨水培养基（、葡萄糖蛋白胨水培养基（、葡萄糖蛋白胨水培养基（240ml240ml）9 9、三倍浓缩的乳糖发酵培养基（、三倍浓缩的乳糖发酵培养基（、三倍浓缩的乳糖发酵培养基（、三倍浓缩的乳糖发酵培养基（150ml150ml）1010、普通浓度乳糖发酵培养基（、普通浓度乳糖发酵培养基（、普通浓度乳糖发酵

15、培养基（、普通浓度乳糖发酵培养基（300ml300ml）第一组：第一组：1、3、5、8、9 第二组：第二组：1、2、5、6、10 第三组：第三组：1、4、6、8注意事项注意事项固体培养基直接在三角瓶中配；液体培养固体培养基直接在三角瓶中配；液体培养基在烧杯中配制，后分装于试管中，每管基在烧杯中配制，后分装于试管中，每管10ml称取牛肉膏时，用玻璃棒挑取适量放在小称取牛肉膏时，用玻璃棒挑取适量放在小称量纸上，直接放入三角瓶中，待牛肉膏称量纸上，直接放入三角瓶中，待牛肉膏完全溶化后，取出称量纸（注意：不要将完全溶化后，取出称量纸（注意：不要将玻璃棒插入瓶底）玻璃棒插入瓶底）马铃薯去皮，切成小块（马

16、铃薯去皮，切成小块（1cm1mm）放在）放在白瓷缸（加水白瓷缸（加水300ml）中煮，待水煮沸后）中煮，待水煮沸后继续煮继续煮30分钟，并不停搅拌和补水，然后分钟，并不停搅拌和补水，然后过滤，在加入其它成分过滤，在加入其它成分称取适量可溶性淀粉，加入适量水中，加热使其称取适量可溶性淀粉，加入适量水中，加热使其称取适量可溶性淀粉，加入适量水中，加热使其称取适量可溶性淀粉，加入适量水中，加热使其充分溶化后在加入其它成分。充分溶化后在加入其它成分。充分溶化后在加入其它成分。充分溶化后在加入其它成分。糖发酵培养基（蓝紫色）、三倍浓缩的乳糖发酵糖发酵培养基（蓝紫色）、三倍浓缩的乳糖发酵糖发酵培养基（蓝紫

17、色）、三倍浓缩的乳糖发酵糖发酵培养基（蓝紫色）、三倍浓缩的乳糖发酵培养基（蓝紫色）及普通浓度的乳糖发酵培养基培养基（蓝紫色）及普通浓度的乳糖发酵培养基培养基（蓝紫色）及普通浓度的乳糖发酵培养基培养基（蓝紫色）及普通浓度的乳糖发酵培养基（蓝紫色）配好后，分装于试管中，加入德汉氏（蓝紫色）配好后，分装于试管中，加入德汉氏（蓝紫色）配好后，分装于试管中，加入德汉氏（蓝紫色）配好后，分装于试管中，加入德汉氏小管（倒置）小管（倒置）小管（倒置）小管（倒置）配制固体培养基时，琼脂在调好配制固体培养基时，琼脂在调好配制固体培养基时，琼脂在调好配制固体培养基时，琼脂在调好pHpH值后加值后加值后加值后加调调调

18、调pHpH值时注意慢慢加值时注意慢慢加值时注意慢慢加值时注意慢慢加NaOHNaOH，不要一下子调过头，不要一下子调过头，不要一下子调过头，不要一下子调过头称量要准确，最后一位同学称完药品后，将药勺称量要准确，最后一位同学称完药品后，将药勺称量要准确，最后一位同学称完药品后，将药勺称量要准确，最后一位同学称完药品后，将药勺取出来，盖好瓶盖取出来，盖好瓶盖取出来，盖好瓶盖取出来，盖好瓶盖,收好砝码收好砝码收好砝码收好砝码含葡萄糖及乳糖的培养基在含葡萄糖及乳糖的培养基在含葡萄糖及乳糖的培养基在含葡萄糖及乳糖的培养基在115115摄氏度灭菌，其余摄氏度灭菌，其余摄氏度灭菌，其余摄氏度灭菌，其余在在在在

19、121121摄氏度灭菌摄氏度灭菌摄氏度灭菌摄氏度灭菌每组同学需完成的工作每组同学需完成的工作第一小组配制五种培养基第一小组配制五种培养基第二小组配制五种培养基第二小组配制五种培养基第三小组配制四种培养基，准备第三小组配制四种培养基，准备1个装个装45ml水带玻璃珠的三角瓶、准备水带玻璃珠的三角瓶、准备10支支1ml移液管、移液管、准备准备9支装支装9 ml水的试管、准备土样水的试管、准备土样三组同学准备其它样品三组同学准备其它样品n n加水至外筒内，被加水至外筒内，被加水至外筒内，被加水至外筒内，被灭灭菌物品放入内筒。盖上菌物品放入内筒。盖上菌物品放入内筒。盖上菌物品放入内筒。盖上灭灭菌器菌器

20、菌器菌器盖，盖，盖，盖，拧紧拧紧螺旋使之密螺旋使之密螺旋使之密螺旋使之密闭闭。通。通。通。通电电加加加加热热，同，同，同，同时时打开排气打开排气打开排气打开排气阀门阀门，排，排，排，排净净其中冷空气。其中冷空气。其中冷空气。其中冷空气。n n待冷空气全部排出后（即水蒸气从排气待冷空气全部排出后（即水蒸气从排气待冷空气全部排出后（即水蒸气从排气待冷空气全部排出后（即水蒸气从排气阀阀中中中中连续连续排排排排出出出出时时），关），关），关），关闭闭排气排气排气排气阀阀。继续继续加加加加热热，待，待，待，待压压力表力表力表力表渐渐渐渐升升升升至所需至所需至所需至所需压压力力力力时时(一般是一般是一般是

21、一般是，即，即，即，即15151515磅磅磅磅/英寸英寸英寸英寸2 2 2 2，温度，温度，温度，温度为为121.3)121.3)121.3)121.3)，开始，开始，开始，开始计时计时，维维持持持持15-30min15-30min15-30min15-30min。灭灭菌菌菌菌时间时间到到到到达后，停止加达后，停止加达后，停止加达后，停止加热热，待，待，待，待压压力降至零力降至零力降至零力降至零时时，慢慢打开排气，慢慢打开排气，慢慢打开排气，慢慢打开排气阀阀，排除余气，开盖取物。切不可在，排除余气，开盖取物。切不可在，排除余气，开盖取物。切不可在，排除余气，开盖取物。切不可在压压力尚未降低力尚

22、未降低力尚未降低力尚未降低为为零零零零时时突然打开排气突然打开排气突然打开排气突然打开排气阀门阀门，以免，以免，以免，以免灭灭菌器中液体菌器中液体菌器中液体菌器中液体喷喷出。出。出。出。高高压蒸汽蒸汽灭菌器使用方法菌器使用方法n手提式高手提式高压蒸汽蒸汽灭菌器示意菌器示意图作业：1.1.在配制培养基的操作在配制培养基的操作过程中程中应注意些什么注意些什么问题？为什么？什么？2.2.你配制的高氏一号培养基有沉淀你配制的高氏一号培养基有沉淀产生生吗？说明明产生或未生或未产生的原因。生的原因。3.3.高高压蒸气蒸气灭菌开始之前，菌开始之前，为什么要将什么要将锅内内冷空气排尽？冷空气排尽？灭菌完菌完毕后，后，为什么待什么待压力力降低降低为“0”“0”时才能打开排气才能打开排气阀，开盖取物，开盖取物？