微生物实验微生物数量和大小测定.ppt
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1、1.1.微生物大小测定微生物大小测定2.2.微生物数量测定微生物数量测定3.3.大肠杆菌生长曲线的测定大肠杆菌生长曲线的测定实验五实验五学习使用学习使用镜台测微尺和目镜测微尺;在显微镜下测定微生镜台测微尺和目镜测微尺;在显微镜下测定微生物大小。物大小。实验实验(一一)微生物大小的测定微生物大小的测定一、目的要求一、目的要求二、实验原理二、实验原理 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般是玻片,一般是l mml mm等分为等分为100100格,每格长格,每格长0.01 mm0.01 mm(即即10 um)10 um),用于校正目镜测微尺每格的相对长
2、,用于校正目镜测微尺每格的相对长度。度。目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片,其中央有精确的等分刻度。玻片,其中央有精确的等分刻度。目镜测微尺每目镜测微尺每小格所代表的实际长度不一样,小格所代表的实际长度不一样,需将其放在接目需将其放在接目镜中的隔板上,测量前,镜中的隔板上,测量前,必须先用镜台测微尺进必须先用镜台测微尺进行校正行校正。目镜测微尺镜台测微尺2.2.2.2.目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格长度(长度(长度(长度(umumumum)两重两重两重两重合线间镜台测微尺合线间镜台测微尺合线间镜台测微尺合线间镜台测微尺格数
3、格数格数格数10/10/10/10/两重合两重合两重合两重合线间目镜测微尺格线间目镜测微尺格线间目镜测微尺格线间目镜测微尺格数数数数三、实验器材三、实验器材 1、菌种:、菌种:酿酒酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)2、器材:、器材:显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺三、实验步骤三、实验步骤 1 1、目镜测微尺的校正、目镜测微尺的校正 镜台测微尺有刻度的一面朝上,置显微镜载物台上,镜台测微尺有刻度的一面朝上,置显微镜载物台上,先用低倍镜观察,将镜台测微尺有刻度的部分移至视先用低倍镜观察,将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央转动目镜使目镜测
4、微尺的刻度与镜台测微尺野中央转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺,使两尺在的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺,使两尺在某一区域内两线完全重合,分别数出两重合线之间镜某一区域内两线完全重合,分别数出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占的格数。先台微尺和目镜微尺所占的格数。先10 x10 x,后,后40 x40 x,分别,分别计算计算10 x,40 x10 x,40 x下目镜测微尺的校正值。下目镜测微尺的校正值。2 2、细胞大小的测量、细胞大小的测量 酵母菌悬液滴在载玻片上,盖上盖玻片,置显微酵母菌悬液滴在载玻片上,盖上盖玻片,置显微镜载物台上。用目镜测微尺测
5、量细胞宽和长。镜载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。三、实验结果三、实验结果 1.1.计算出目镜测微尺校正结果(物计算出目镜测微尺校正结果(物1010和和4040)2.2.酵母菌大小测定酵母菌大小测定酵母菌大小测定酵母菌大小测定,选择选择5-85-8个酵母菌,测定其个酵母菌,测定其4040大小范围。大小范围。四、思考题四、思考题 p51 2(2)1 1、明确血细胞计数板计数的原理。、明确血细胞计数板计数的原理。2 2、掌握使用血细胞计数板进行微生、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。物计数的方法。实验实验(二二)微生物数量的测定微生物数量的测定一、目的要求一、目的要求显微镜直接计数法是
6、将小量待测样品的悬浮显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上玻片上(又称计菌器又称计菌器),于显微镜下直接计数,于显微镜下直接计数的一种方法。用于细胞总数的测定的一种方法。用于细胞总数的测定显微镜直接计数法的优点是直观、快速。缺点是所测得的结显微镜直接计数法的优点是直观、快速。缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克果通常是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点,如结合活菌染色,微室培养等方法来达到只计服这一缺点,如结合活菌染色,微室培养等方法来达到只计数活菌体的目的。数
7、活菌体的目的。二、实验原理二、实验原理血细胞计数板由两条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横血细胞计数板由两条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为八个大方格,中间的大方格即为计数室。计数室是由一个大方格为八个大方格,中间的大方格即为计数室。计数室是由一个大方格分成分成2525个中方格,而每个中方格又分成个中方格,而每个中方格又分成1616个小方格;共计个小方格;共计400400个小个小方格。方格。计数时,通常数五个中方格的总菌数,然后求得每个中方格的平均计数时,通常数五
8、个中方格的总菌数,然后求得每个中方格的平均值,以及大方格中的总菌数,再换算成值,以及大方格中的总菌数,再换算成1 ml1 ml菌液中的总菌数。菌液中的总菌数。个计数室个计数室mmmm包含包含个中方格个中方格个中方格个中方格个小方格个小方格三、实验器材三、实验器材 1 1、菌种:、菌种:酿酒酵母、大肠杆菌酿酒酵母、大肠杆菌 2 2、器材:、器材:显微镜、血球计数板显微镜、血球计数板三、实验步骤三、实验步骤 1 1、在、在1010和和4040下找到计数室。下找到计数室。2 2、盖上盖玻片将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘、盖上盖玻片将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴,让菌液沿缝隙靠毛细渗透
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