临床微生物实验室质量控制及质量保证.pptx
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1、 临床微生物实验室临床微生物实验室 质量控制及质量保证质量控制及质量保证1/8/20221微生物实验室质量控制微生物实验室质量控制 为保证检测结果的准确性、可靠性,临床细菌室为保证检测结果的准确性、可靠性,临床细菌室室内质控需要:室内质控需要: 对人员进行评估对人员进行评估 建立质量控制标准、选择和适的质控物建立质量控制标准、选择和适的质控物 对标本质量进行评价对标本质量进行评价 对试剂、培养基、仪器设备进行监测对试剂、培养基、仪器设备进行监测 对检测过程进行监控对检测过程进行监控 对检测结果和结果的临床应用进行评估对检测结果和结果的临床应用进行评估1/8/20222临床微生物实验室质量控制环
2、节临床微生物实验室质量控制环节标本合格判定标本合格判定培养基、试剂培养基、试剂仪器设备仪器设备结果报告结果报告标本留取运送标本留取运送分析前分析前分析后分析后分析中分析中人员人员1/8/20223人员人员具备相关教育背景,具备相关教育背景,每年接受专业技术及知每年接受专业技术及知识培训,识培训,熟悉微生物实验室操作熟悉微生物实验室操作规程、消毒灭菌及生物规程、消毒灭菌及生物安全知识。安全知识。. 包括新员工培包括新员工培训、老员工的再训、老员工的再培训以及员工工培训以及员工工作能力评估作能力评估人员能力人员能力人员培训人员培训人员资质人员资质包括其对诸如分包括其对诸如分析前、中、后特析前、中、
3、后特定阶段的专业经定阶段的专业经验和熟练试验技验和熟练试验技术术 。并直接参与。并直接参与质控工作质控工作1/8/20224分析前质量控制分析前质量控制1/8/20225分析前质量控制分析前质量控制u建立质量控制标准(建立质量控制标准(SOP)SOP) 制定自检测申请、标本采集开始到发出检测结制定自检测申请、标本采集开始到发出检测结果报告止的全过程的操作和管理程序果报告止的全过程的操作和管理程序u微生物检验标本质量控制微生物检验标本质量控制实验室应给标本采集者提供标本采集和运实验室应给标本采集者提供标本采集和运送的指导手册送的指导手册实验室应持续监测标本采集和运送过程实验室应持续监测标本采集和
4、运送过程实验室应对标本质和量进行评估实验室应对标本质和量进行评估不合格标本拒收不合格标本拒收1/8/20226标本采集和运送标本采集和运送是细菌培养成功的标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的环节最最重要的环节但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的环节,造成的后果是:标本污染、阳性率低标本污染、阳性率低1/8/20227标本收集基本原则标本收集基本原则1 1)在抗菌药物使用前采集标本)在抗菌药物使用前采集标本2 2)采样时严格执行无菌操作)采样时严格执行无菌操作3 3)采样后立即送检)采样后立即送检4 4)棉拭子标本宜用运送培养基)棉拭子标本宜用运送培养基
5、5 5)标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂。)标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂。6 6)送检标本应注明来源和检验目的)送检标本应注明来源和检验目的1/8/20228 标本收集和运送的质量控制标本收集和运送的质量控制 向临床提供标本采集说明向临床提供标本采集说明(sop)(sop) 不同部位标本的采集方法 采集最佳时间、次数 标本采集量正确时间、部位、方法等 对收集和运送标本的容器控制对收集和运送标本的容器控制 无菌、无防腐剂、足够大、安全严密、不易破碎、无菌、无防腐剂、足够大、安全严密、不易破碎、选择合适的运送培养基选择合适的运送培养基 1/8/20229 标本收集和运送的质量控制标本收
6、集和运送的质量控制正确的运送方式正确的运送方式 标本因冷藏及标本因冷藏及pHpH改变或在氧气中暴露,可改变或在氧气中暴露,可能减少很多种细菌的存活时间能减少很多种细菌的存活时间 脑膜炎球菌,淋病奈瑟菌,流感嗜血杆菌,肺炎脑膜炎球菌,淋病奈瑟菌,流感嗜血杆菌,肺炎链球菌,沙门菌,志贺氏菌,霍乱弧菌,空肠弯链球菌,沙门菌,志贺氏菌,霍乱弧菌,空肠弯曲菌及厌养菌曲菌及厌养菌定量评价细菌数量的培养(尿标本)定量评价细菌数量的培养(尿标本)(运送时间)(运送时间)需需进行微生物学检测的所有标本,进行微生物学检测的所有标本,应在收集后应在收集后2小时内送到实验室小时内送到实验室1/8/202210标本标本
7、运送运送贮存温度贮存温度血血血培养瓶血培养瓶室温或室温或3737脓、脑脊液、胸水、心包脓、脑脊液、胸水、心包积液、腹水、滑液关节鼻积液、腹水、滑液关节鼻窦分泌物窦分泌物短时间内运送:标本短时间内运送:标本在带帽的注射器内保在带帽的注射器内保证厌氧条件证厌氧条件长时间内运送:长时间内运送:使用运送培养基使用运送培养基室温室温避免冷藏避免冷藏支气管肺泡液、痰、其他支气管肺泡液、痰、其他分泌物、便等分泌物、便等立刻送检立刻送检2-32-3小时小时冷藏冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直肠、伤口拭子道、直肠、伤口拭子用运送培养基用运送培养基44小时小时室温室温微生物检验标本的运送及贮
8、存条件微生物检验标本的运送及贮存条件1/8/202211 有可靠的标本质量评价方法有可靠的标本质量评价方法分类分类白细胞白细胞鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞门诊或难以门诊或难以取材可培养取材可培养6 6252525252510252510-2510-25不适于培养,不适于培养,重新留取标重新留取标本本3 3252525252 210-2510-2525251 11025251/8/202212 有可靠的标本质量评价方法有可靠的标本质量评价方法1/8/202213不合格标本拒收不合格标本拒收 除非不能再采集的标本,否则不予检测;除非不能再采集的标本,否则不予检测;如果培养或检测,要对结果进行说明。如果
9、培养或检测,要对结果进行说明。1/8/202214样本拒收标准样本拒收标准1)样本上无病患标签或病患标签与检验申请单不符;2)样本以不当的温度、运送培养基及容器运送;3)样本量不足、已被防腐剂固定或运送时间过长;4)样本外漏、容器破损及明显受污染的标本;5)样本的检验项目申请不适合进行;6)特殊的难以再次获得标本,与临床医师联系后再做相应处理1/8/202215分析中质量控制分析中质量控制1/8/202216分析中质量控制分析中质量控制l培养基培养基l主要试剂主要试剂l自制生化鉴定试剂自制生化鉴定试剂l染色液染色液l细菌、酵母菌鉴定系统细菌、酵母菌鉴定系统l药物敏感试验药物敏感试验l仪器设备仪
10、器设备对临床微生物实验室对临床微生物实验室室内质控的基本要求室内质控的基本要求只能满足分析中对主要只能满足分析中对主要培养基、试剂的质控需要培养基、试剂的质控需要是试验室进行相应操作是试验室进行相应操作的应做到或至少要做到的应做到或至少要做到1/8/202217培养基的质量控制培养基的质量控制1/8/202218培养基的质量控制培养基的质量控制 购买有质量保证标准的商品培养基,购买有质量保证标准的商品培养基, 保存制造商质量控制性能合格的证明文件保存制造商质量控制性能合格的证明文件购买无质量保证标准的商品或自制培养基,购买无质量保证标准的商品或自制培养基,每批号产品检测相应的性能,如无菌试验、
11、每批号产品检测相应的性能,如无菌试验、生长试验、生长抑制试验等生长试验、生长抑制试验等1/8/202219 最好使用标准菌最好使用标准菌 ATCC 美国典型菌株保藏中心美国典型菌株保藏中心 NCTC 英国国家典型菌种保藏中心英国国家典型菌种保藏中心1/8/202220培养基质量控制肉眼检查培养基的颜色、均一性、厚度、肉眼检查培养基的颜色、均一性、厚度、气泡等气泡等无菌试验无菌试验 100 100100块则任意选取块则任意选取1010块平板或管装培养基块平板或管装培养基3535,培养,培养2424小时,无菌生长为合格。小时,无菌生长为合格。 生长试验生长试验生长抑制试验(必要时)生长抑制试验(必
12、要时)1/8/202221常用培养基已知菌生长试验常用培养基已知菌生长试验孵育条件孵育条件已知菌株(已知菌株(ATCC)ATCC)预期结果预期结果血琼脂血琼脂 需氧或需氧或COCO2 2,2424小时小时化脓链球菌化脓链球菌1961519615肺炎链球菌肺炎链球菌60356035大肠埃希菌大肠埃希菌2592225922生长,生长, 溶血溶血生长,生长,溶血溶血生长生长巧克力巧克力 琼脂琼脂需氧或需氧或COCO2 2,4848小时小时淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌4306943069流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌1021110211生长生长生长生长SSSS琼脂琼脂需氧,需氧,2424小时小时鼠伤寒沙门菌鼠伤寒沙
13、门菌1402814028福氏志贺菌福氏志贺菌1202212022粪肠球菌粪肠球菌2921229212大肠埃希菌大肠埃希菌2592225922生长生长生长生长部分生长或抑制部分生长或抑制部分生长或抑制部分生长或抑制1/8/202222常用培养基已知菌生长试验常用培养基已知菌生长试验孵育条件孵育条件已知菌株(已知菌株(ATCC)ATCC)预期结果预期结果麦康凯琼脂麦康凯琼脂 需氧,需氧,2424小时小时大肠埃希菌大肠埃希菌2592225922福氏志贺菌福氏志贺菌1202212022金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌2592325923分解乳糖,菌落红色分解乳糖,菌落红色不分解乳糖,菌落无色透明不分解乳糖
14、,菌落无色透明不生长不生长中国蓝琼脂中国蓝琼脂需氧,需氧,2424小时小时大肠埃希菌大肠埃希菌2592225922福氏志贺菌福氏志贺菌1202212022金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌2592325923分解乳糖,菌落蓝色分解乳糖,菌落蓝色不分解乳糖,菌落无色不分解乳糖,菌落无色不生长不生长 营养琼脂营养琼脂需氧,需氧,2424小时小时金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌2592325923生长生长沙保罗琼脂沙保罗琼脂需氧,需氧,2424小时小时大肠埃希菌大肠埃希菌2592225922白色假丝酵母菌白色假丝酵母菌生长生长不生长不生长1/8/202223常用生化反应培养基的质量控制标准常用生化反应培养基的
15、质量控制标准 生化管生化管阳性质控菌株阳性质控菌株阴性质控菌株阴性质控菌株阳性质控结果阳性质控结果靛基质靛基质大肠埃希菌大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 加入吲哚试剂后两者加入吲哚试剂后两者液面接触处由无色变液面接触处由无色变为红色为红色 枸橼酸盐培养基枸橼酸盐培养基 弗劳地枸橼酸杆菌弗劳地枸橼酸杆菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 培养基由淡绿色变为培养基由淡绿色变为深蓝色深蓝色 硝酸盐培养基硝酸盐培养基 大肠埃希菌大肠埃希菌 鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌 将甲液和乙液等量加将甲液和乙液等量加入后培养基由淡灰色入后培养基由淡灰色变为红色变为红色 V-PV-P培养基培养基肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌大肠埃希
16、菌大肠埃希菌将甲液和乙液按将甲液和乙液按3 3:1 1加入后培养基由无色加入后培养基由无色变为红色变为红色质控要求:每批试剂使用前应使用相应质控要求:每批试剂使用前应使用相应阴性和阳性反应(标准)菌株做质控阴性和阳性反应(标准)菌株做质控1/8/202224试剂质量控制试剂质量控制具体要求:具体要求:每批次或使用当每批次或使用当天用相应的标天用相应的标准菌株作阴、准菌株作阴、阳性对照控。阳性对照控。氧化酶试验氧化酶试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验-内酰胺酶内酰胺酶1/8/202225 过氧化氢酶(H2O2)阳性对照:金黄色葡萄球菌阳性对照:金黄色葡萄球菌ATCC 2
17、5923ATCC 25923阴性对照:粪肠球菌阴性对照:粪肠球菌ATCC29212ATCC29212区别链球菌属区别链球菌属/葡萄球菌属,少见葡萄球菌属,少见G-菌、菌、G+菌菌1/8/202226血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验阳性对照:金黄色葡萄球菌ATCC 25923阴性对照:表皮葡萄球菌ATCC12228区别金黄色葡萄球菌区别金黄色葡萄球菌/凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌1/8/202227氧化酶氧化酶阳性对照:绿脓假单胞菌ATCC27853阴性对照:大肠杆菌ATCC25922氧化酶试验氧化酶试验 G-菌区别,菌区别,肠杆菌科肠杆菌科/非发酵菌非发酵菌/弧菌科弧菌科/少见少见G-菌等
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