《CR实验教程》PPT课件.ppt
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1、实验二实验二 质粒质粒DNA的提取及电泳的提取及电泳检测检测 一、一、实验目的实验目的了解并掌握质粒了解并掌握质粒DNA的原理和方法的原理和方法n 通常用的质粒通常用的质粒DNA 分离方法有分离方法有2种:种:1、碱裂解法、碱裂解法 2、煮沸法、煮沸法本实验介绍的是本实验介绍的是碱裂解法小量提取质粒碱裂解法小量提取质粒DNA。二、实验原理二、实验原理二、实验原理二、实验原理n 在在碱碱性性溶溶液液中中,双双链链DNA氢氢键键断断裂裂,DNA双双螺螺旋旋结结构构遭遭破破坏坏而而发发生生变变性性,但但由由于于质质粒粒DNA分分子子量量相相对对较较小小,且且呈呈环环状状超超螺螺旋旋结结构构,即即使使
2、在在高高碱碱性性pH条条件件下下,两两条条互互补补链链也也不不会会充充分分分分离离,当当加加入入中中和和缓缓冲冲液液调调时时,变变性性质质粒粒DNA又又恢恢复复到到原原来来的的构构型型;而而线线性性的的大大分分子子量量细细菌菌染染色色体体DNA则则不不能能复复性性,与与细细胞胞碎碎片片、蛋蛋白白质质、SDS等等形形成成不不溶溶性性复复合合物物。通通过过离离心心沉沉淀淀,细细胞胞碎碎片片、染染色色体体DNA及及大大量量蛋蛋白白质质等等可可被被除除去去,而而质质粒粒DNA及及小小分分子子量量的的RNA则则留留在在上上清清液液中中。混混杂杂的的RNA可可以以用用RNA酶酶清清除除。再再用用酚酚/氯仿
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