标准菌株使用标准操作规程.doc
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1、|标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存,并规范合理的使用流程,保证菌株的性能稳定可靠。2 范围微生物实验室保存的标准菌株。3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。4 术语和定义4.1 标准菌株其特征进行了分类和描述,有明确的来源。ATCC(American Type Culture Collection)美国标准菌株收藏中心。4.2 标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。4.5 质控菌株ATCC 最佳,但当无法获得时可以使用 ATCC 演化
2、的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况,例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。5 保存程序|5.1 标准菌株5.1.1 商业购买的 ATCC 标准菌株干粉,-80低温保存,可以 2 年以上。安瓿真空包装的,-80可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。5.1.2 复苏用 1ml 无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点,接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养 18-24h。酵母菌要求 3 天,形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2 标准储备菌株5.2.1 由复苏后的 ATCC 标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度,必要时进行生化试验检查。刮取培养物上
3、的菌体,用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株,可用 1-2 年。一年 52 周需要 52 支以上。5.2.2 甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于 20%的甘油。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80保存。除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。保存期限1-5 年。5.2.3 全血保存法成分为脱纤维羊血。挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀。苛养菌可以适当增加菌量。-80保存。主要用于保存链球菌、嗜血杆菌及厌氧菌。保存期限 1-5 年。5.2.4 标准储备
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