《培养基及其制备》PPT课件.ppt

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1、第六章第六章 培养基及其制备培养基及其制备6 Medium and its preparation提纲提纲培养基的成分培养基的成分能源物能源物质碳源物碳源物质氮源物氮源物质无机无机盐微量元微量元素和生素和生长因子因子水水前体物前体物质促促进剂和抑制和抑制剂淀粉水解糖的制淀粉水解糖的制备：酸解法、酸解法、酶解法、解法、酶酸酸结合法合法营养物养物质的的调节不同碳源的利用速度不同碳源的利用速度氮源利用及与碳源利用的关系氮源利用及与碳源利用的关系碳、氮比例的碳、氮比例的调节前体的控制前体的控制补料料培养基的培养基的类型型培养基的培养基的优化化举例例第一节、培养基的成分第一节、培养基的成分天然培养基天然

2、培养基 这是一种利用是一种利用动、植物或微生物体或其提取物制成的培、植物或微生物体或其提取物制成的培养基，人养基，人们无法确切知道其中成分。无法确切知道其中成分。M培养基培养基(1L)：Na2HPO4 6g，KH2PO4 3g，NH4Cl 1g，MgSO4.7H2，CaCl2，葡萄糖，葡萄糖 2-10g,pH 7.0 培养大肠杆菌常用培养基培养大肠杆菌常用培养基合成培合成培养基养基按培养基的成分和目的按培养基的成分和目的 1、选择性培养基性培养基：就是根据某种微生物的特殊就是根据某种微生物的特殊营养要求或其养要求或其对某化某化学、物理因素的抗性而学、物理因素的抗性而设计的培养基。的培养基。其功

3、能是从混合菌其功能是从混合菌样本中的本中的选取取优势菌，从而提高菌，从而提高该菌的菌的筛选效率。效率。1)加富性加富性选择培养基：培养基：用作加富的用作加富的营养物主要是一些特殊的碳源或氮源，如甘露醇、养物主要是一些特殊的碳源或氮源，如甘露醇、纤维素、石蜡油、糖液等。素、石蜡油、糖液等。2)抑制性抑制性选择培养基：培养基：选择性抑制性抑制剂有染料、抗生素、脱氧胆酸有染料、抗生素、脱氧胆酸钠、叠氮化、叠氮化钠等。等。用于用于选择性的其他理化因素性的其他理化因素还有温度、氧、有温度、氧、pH和渗透和渗透压等。等。三、按培养基的成分和目的三、按培养基的成分和目的2、鉴别性培养基性培养基 培养基中加有

4、能与某一菌的无色代培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物物发生生显色反色反应的指示的指示剂，从而达到只，从而达到只须用肉眼辨用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。找出目的菌菌落的培养基。最常最常见的的鉴别性培养基是性培养基是伊伊红美美蓝乳糖乳糖培养基培养基，即，即EMB 培养基。培养基。培养基的成分培养基的成分 一、能源物质一、能源物质微生物的一切行微生物的一切行为都需要能源都需要能源光能自养微生物：光能光能自养微生物：光能 如：螺旋藻生如：螺旋藻生产单细胞蛋白胞蛋白 化能自养微生物：化能自养微生物：氢、硫、氨、硫、氨、亚硝酸硝酸 盐、亚铁盐等无机物

5、等无机物 如：如：细菌菌炼铜，铁硫杆菌硫杆菌异养微生物：碳水化合物、石油、天然异养微生物：碳水化合物、石油、天然 气及石化气及石化产品品工业菌种绝大多数为化能异养型工业菌种绝大多数为化能异养型二、碳源物质二、碳源物质碳源物碳源物质是培养基主要成分；是培养基主要成分；占占细胞干物胞干物质的的50左右，提供能源、碳架、代左右，提供能源、碳架、代谢产物。物。碳源物碳源物质 葡萄糖（葡萄糖（单）：淀粉加工制）：淀粉加工制备 蔗糖、麦芽糖、乳糖蔗糖、麦芽糖、乳糖（双）：（双）：糖蜜、乳清糖蜜、乳清 糊精、淀粉：糊精、淀粉：其他碳源物其他碳源物质：脂脂类（霉菌、放（霉菌、放线菌）：充分通氧菌）：充分通氧

6、有机酸、醇、石油有机酸、醇、石油产品：品：谷谷 氨氨 酸酸 和和 味味 精精 生生 产产 工工艺艺 就目前的状况而言，发酵工业所用的原料作以淀粉或糖质为主，而许多微生物并不能直接利用淀粉。例如，在以糖质为原料发酵生产氨基酸过程中，几乎所有的氨基酸生产菌都不能直接利用（或只能微弱地利用）淀粉和糊精。同样在酒精发酵过程中，酵母菌也不能直接利用淀粉或糊精，这些淀粉或糊精必须经过水解制成淀粉糖以后才能被酵母菌所利用。此外，在抗生素、有机酸、有机溶剂以及酶制剂发酵过程中，大都也要求对淀粉进行加工处理以提供给微生物可利用的碳源。当然有些微生物能够直接利用淀粉作原料，但这一过程必须在微生物分解出胞外淀粉酶类

7、以后才能进行，过程非常缓慢，致使发酵过程周期过长，实际生产上无法被采用。玉米淀粉、谷物、马铃薯、木薯淀粉淀粉蓝糊精红糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖（C6H10O5)n+nH2O n C6H12O6酸或酶淀粉水解糖的制备淀粉水解糖的制备一、淀粉水解糖的制备方法 葡萄糖值葡萄糖值-DE值值 工业上用DE值（也称葡萄糖值）表示淀粉糖的糖组成。糖化液中的还原糖含量（以葡萄糖计算）占干物质的百分率 还原糖含量DE值 =100%干物质含量 用于制备淀粉的原料主要有薯类、玉米、小麦、大米等富含淀粉的农产品。根据原料淀粉的性质及采用的催化剂不同，淀粉水解为葡萄糖的方法有酸解法、酶解法以及酸酶结合法等三种。1、酸水解

8、法原理、酸水解法原理 淀粉蓝糊精红糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖水解过程：水解过程中存在三大化学反应：复合二糖 复合低聚糖 水解淀粉 葡萄糖 5-羟甲基糖醛 有机酸、有色物质132酶解法是利用专一性很强的淀粉酶及糖化酶将淀粉水解为葡萄糖的方法。酶解法可分为两步：第一步，利用-淀粉酶将淀粉液化；第二步，利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解转化为葡萄糖。生产上这两步分别称为液化和糖化。由于在该过程中淀粉的液化和糖化都是在酶的作用下进行的。因此酶解法又称为双酶法或多酶法。2、酶解法、酶解法 缺点酶解法是在酶的作用下进行的，反应条件较温和，不需要耐高温高压或 而酸腐蚀的设备；酶作为催化剂的特点是专一性强，副反

9、应少，故水解糖液纯度高，淀粉转化率高；可在较高的淀粉乳浓度下水解。如酸解法一般使用10-12Bx（含18%-20%淀粉）的淀粉乳，而酶解法可用2023Bx（含34%-40%淀粉）的淀粉乳，并且可以采用粗原料。用酶解法制得的糖液较纯净、颜色浅、无苦味、质量高，有利于糖液的充分利用。酶解法反应时间较长，设备要求较多，且酶是蛋白质，易引起糖液过滤困难。当然，随着酶制剂生产及应用技术的提高，酶解法制糖将逐渐取代酸解法制糖。优点3、酸酶结合法、酸酶结合法 酸酶结合法是集中了酸解法和酶解法制糖的优点而采用的生产方法，它又可分为：酸酶法 酶酸法酶酸酸结合法之一，酸合法之一，酸酶法法反反应原理：原理：淀粉淀粉

10、糊精、低聚糖糊精、低聚糖 葡萄糖葡萄糖优点：点：产品品质量高，反量高，反应时间较短（短（糊精、低聚糖糊精、低聚糖 葡萄糖葡萄糖优点：点：反反应时间短（短（2hrs），），产品品质量量较好好对原料要求原料要求较低，淀粉乳低，淀粉乳浓度度较高。高。淀粉酶淀粉酶酸水解酸水解30min30min淀粉水解糖的制备淀粉水解糖的制备三、氮源物质三、氮源物质氮源物氮源物质是培养基的主要成分之一。是培养基的主要成分之一。提供菌体提供菌体结构物构物质，能源（少），含氮代，能源（少），含氮代谢产物，物，补充碳源。充碳源。有机氮源：有机氮源：豆豆饼粉、花生粉、花生饼粉、棉子粉、棉子饼粉、酵粉、酵 母粉、麦麸、母粉、麦

11、麸、鱼粉、玉米粉、玉米浆、蛋白、蛋白胨、尿素等。、尿素等。成分复成分复杂，除含蛋白，除含蛋白质、多、多肽、氨基酸外，、氨基酸外，还含糖、脂、无含糖、脂、无机机盐、维生素及其他生生素及其他生长因子，因子，对菌体生菌体生长非常有利。非常有利。无机氮源：无机氮源：氨水、氨水、铵盐、硝酸、硝酸盐 被吸收、利用快，但成分被吸收、利用快，但成分单一，常作一，常作辅助氮源。助氮源。品种、产地、加工方法对有机氮源质量的品种、产地、加工方法对有机氮源质量的影响影响黄豆粉：全脂黄豆粉（含油脂黄豆粉：全脂黄豆粉（含油脂18%）、低）、低脂黄豆粉（脂黄豆粉（9%以下）、脱脂黄豆粉（以下）、脱脂黄豆粉（2%以以下）下）

12、棉籽粉：低温提取油脂后加工品棉籽粉：低温提取油脂后加工品（pharmamedia）、高温（）、高温（proflo）玉米浆：玉米淀粉副产物，干玉米浆、液玉米浆：玉米淀粉副产物，干玉米浆、液态玉米浆、（国际知名品牌态玉米浆、（国际知名品牌solulys L）三、氮源物质三、氮源物质三、氮源物质三、氮源物质质量不稳定，引起发酵水平波动质量不稳定，引起发酵水平波动无机氮源：铵盐、硝酸盐无机氮源：铵盐、硝酸盐(NH4)SO4 2NH3+H2SO4NaNO3+4H2 NH3+H2O+NaOH代谢后产生酸性物质的营养成分叫生理酸代谢后产生酸性物质的营养成分叫生理酸性物质，反之叫生理碱性物质。性物质，反之叫生

13、理碱性物质。注意溶液注意溶液PH变化。变化。三、氮源物质三、氮源物质四、无机盐和微量元素四、无机盐和微量元素1)无机无机盐 成成为菌体的菌体的组分或菌体内分或菌体内酶的的调节剂、维持培养基一定的离子持培养基一定的离子强度。度。对微生物的作用呈微生物的作用呈浓度相关度相关无机磷：无机磷：菌体、核酸菌体、核酸组成成分成成分AMP，ADP，以及，以及ATP合成合成酶或中或中间代代谢产物的修物的修饰剂某些某些酶的的调节剂有利于糖代有利于糖代谢，菌体生，菌体生长，但不利于代，但不利于代谢产物合成物合成铁离子离子为细胞色素、胞色素、细胞色素氧化胞色素氧化酶和和过氧化氧化氢酶的的组成成分。成成分。一般不必加

14、入。一般不必加入。在有些品种的在有些品种的发酵中有害，如青霉素、四酵中有害，如青霉素、四环素、麦迪霉素、素、麦迪霉素、柠檬酸、啤酒等。檬酸、啤酒等。钙离子离子作作为微生物体内微生物体内酶的激活的激活剂，碳酸，碳酸钙还可以作可以作为控制控制发酵液酵液pH的的缓冲冲剂。镁离子离子作作为微生物体内微生物体内酶的激活的激活剂。硫硫为蛋白蛋白质的的组成成分，有成成分，有时为某些代某些代谢产物的物的组成成成成分。分。钠、钾离子离子调节渗透渗透压和微生物和微生物细胞的通透性，胞的通透性，调节某些某些酶的催的催化活性。化活性。2)微量元素微量元素锌、钴、锰、铜、硼等、硼等作作为酶的的辅基或基或调节剂一般而言不

15、必另外加入一般而言不必另外加入l3)无机无机盐及微量元素使用注意点及微量元素使用注意点A.对于其它渠道有可能于其它渠道有可能带入的入的过多的某种无机离多的某种无机离子和微量元素在子和微量元素在发酵酵过程中必程中必须加以考加以考虑。例：例：铁离子离子青霉素青霉素发酵中，酵中，铁离子的离子的浓度要小于度要小于20g/ml 发酵罐必酵罐必须进行表面行表面处理。理。B、使用、使用时注意注意盐的形式（的形式（pH的的变化）化）从广从广义上上讲，凡是微生物生，凡是微生物生长不可缺少的微量的有不可缺少的微量的有机物机物质，如氨基酸、，如氨基酸、嘌呤、呤、嘧啶、维生素等均称生生素等均称生长因子。因子。在合成培

16、养基中需要在合成培养基中需要补充充在复合培养基中一般不在复合培养基中一般不须加入加入在某些特定的情况下需要加入一种或数种生在某些特定的情况下需要加入一种或数种生长因子因子营养缺陷型菌种，如谷氨酸养缺陷型菌种，如谷氨酸发酵中使用的菌种酵中使用的菌种为生物素缺陷型生物素缺陷型 五、生长因子五、生长因子六、前体物质六、前体物质前体物前体物质(Precursor)：最最终所需的代所需的代谢产物物的前身或其的前身或其结构中的一部分。构中的一部分。在生物合成中直接在生物合成中直接结合到合到产物分子中，自身物分子中，自身结构构变化不大，能化不大，能显著提高著提高产量的小分子物量的小分子物质。抗生素抗生素(A

17、ntibiotin)发酵中常用的前体物酵中常用的前体物质：抗生素抗生素前前 体体 物物 质质青霉素青霉素苯乙酸（或在发酵中生成苯乙酸的物质）苯乙酸（或在发酵中生成苯乙酸的物质）链霉素链霉素肌醇、精氨酸、甲硫氨酸肌醇、精氨酸、甲硫氨酸红霉素红霉素丙酸、丙醇、丙酸盐、乙酸盐丙酸、丙醇、丙酸盐、乙酸盐青霉素G青霉素V六、前体物质六、前体物质影响前体物影响前体物质效力的因素效力的因素菌种的特性菌种的特性前体物前体物质的投入量的投入量(Inoculation concentration)前体物前体物质的毒性的毒性(Toxicity)苯乙酸用量（）苯乙酸用量（）青霉素产量（单位青霉素产量（单位/ml)青霉

18、素比例（）青霉素比例（）0.157.30.273.00.390.60.495.6七、七、促进剂和抑制剂促进剂和抑制剂促促进剂Accelerator（刺激（刺激剂Stimulant）并非前体或并非前体或营养物，可影响正常代养物，可影响正常代谢或中或中间代代谢物物积累、或提高次累、或提高次级代代谢物的物的产量的一量的一类刺激因子。刺激因子。作用原理：作用原理：改改变细胞的渗透性，或胞的渗透性，或“启启动”微生物体内的生微生物体内的生产部位，否部位，否则这些部位是被阻遏的，因此促些部位是被阻遏的，因此促进剂的添加的添加可以大大提高可以大大提高产量。量。常用促常用促进剂：各种表面活性各种表面活性剂Su

19、rfactant（洗（洗涤剂、吐、吐温温80、EDTA、植酸等）、大豆油提、植酸等）、大豆油提炼物、甲醇等。物、甲醇等。Org.Biomol.Chem.,2009,7,17531760|1753七、七、促进剂和抑制剂促进剂和抑制剂七、促进剂和抑制剂七、促进剂和抑制剂抑制抑制剂(Inhibitor)的作用原理：的作用原理：通通过抑制抑制某些合成其它某些合成其它产物的途径物的途径而使而使所需所需产物物的合成的合成得到加得到加强。抗生素生抗生素生产中的抑制中的抑制剂：抗生素抗生素被抑制的产物被抑制的产物抑制剂抑制剂链霉素链霉素甘露糖链霉素甘露糖链霉素甘露聚糖甘露聚糖四环素四环素金霉素金霉素溴化物、硫

20、脲等溴化物、硫脲等头孢霉素头孢霉素C头孢霉素头孢霉素NL-蛋氨酸蛋氨酸利福霉素利福霉素B其它利福霉素其它利福霉素巴比妥药物巴比妥药物八、水分八、水分细胞的重要胞的重要组分；分；细胞内一切生化反胞内一切生化反应的介的介质优良溶良溶剂；（物；（物质进出出细胞）胞）维持大分子持大分子结构的构的稳定；定；重要的物理性重要的物理性质：如：高比如：高比热；高汽化；高汽化热；高沸点；冰的密度小于水等，保高沸点；冰的密度小于水等，保证 生命活生命活动的正常的正常进行。行。其其质量量对产品品质量影响很大。量影响很大。九九 消沫剂消沫剂工业中利用消沫剂消除发酵中产生的泡沫：工业中利用消沫剂消除发酵中产生的泡沫：防

21、止逃液和染菌防止逃液和染菌植物、动物油脂（豆油、玉米油、猪油）、植物、动物油脂（豆油、玉米油、猪油）、化学合成的高分子化合物化学合成的高分子化合物第二节、营养物质的调节第二节、营养物质的调节培养基中各培养基中各营养物的养物的浓度和比例很度和比例很严格。直接影格。直接影响菌体的繁殖和响菌体的繁殖和产物的物的积累。尤其是碳氮比。累。尤其是碳氮比。（维持正常渗透持正常渗透压，节约原料也必需）。原料也必需）。1.不同碳源的利用速度不同碳源的利用速度 2.氮源利用及碳源利用的关系氮源利用及碳源利用的关系 3.碳氮比例的碳氮比例的调节 4.前体的控制前体的控制 5.补料料培养基的种类培养基的种类（一）孢子

22、培养基：形成孢子。基质浓度（一）孢子培养基：形成孢子。基质浓度（有机氮源）低，适当无机盐（有机氮源）低，适当无机盐（二）种子培养基：孢子发芽、菌体生长。（二）种子培养基：孢子发芽、菌体生长。快速碳氮源、氮源和维生素含量高快速碳氮源、氮源和维生素含量高（三）发酵培养基：菌体生长繁殖、合成大（三）发酵培养基：菌体生长繁殖、合成大量产物量产物一、不同碳源的利用速度一、不同碳源的利用速度不同菌能利用的碳源不同，同一菌种不同菌能利用的碳源不同，同一菌种对不同碳源利用速度不同。不同碳源利用速度不同。如：青霉素如：青霉素产生菌利用葡萄糖快（生菌利用葡萄糖快（30-40小小时），），利用乳糖速度慢（利用乳糖速

23、度慢（6天）。天）。一般情况：一般情况：单糖比双糖快；双糖比多糖糖比双糖快；双糖比多糖快；快；纯多糖比多糖比杂多糖快。多糖快。快者快者为速效碳源速效碳源，慢者，慢者为迟效碳源效碳源。速效碳源速效碳源(快速利用碳源快速利用碳源)与与迟效碳源效碳源(缓慢慢利用碳源利用碳源)的搭配使用。的搭配使用。控制控制浓度，度，生生长期期利用速效碳源，利用速效碳源，产物合成物合成期期利用利用迟效碳源。效碳源。二、氮源利用及与碳源利用的关系二、氮源利用及与碳源利用的关系不同氮源的利用速度也不同。不同氮源的利用速度也不同。如：如：铵盐比硝基氮更容易利用。比硝基氮更容易利用。简单的无菌氮源和氨基酸的无菌氮源和氨基酸为

24、速效氮源速效氮源，复，复杂的有机氮源的有机氮源为迟效氮源效氮源。氨及氨及铵盐等氮源的利用速度常随碳源的利用等氮源的利用速度常随碳源的利用速度而速度而变。糖代糖代谢中中间产物是氨基酸的前体。物是氨基酸的前体。速效氮源速效氮源与与迟效氮源迟效氮源的搭配使用类似于碳源的情况的搭配使用类似于碳源的情况三、碳氮比例的调节三、碳氮比例的调节碳氮比碳氮比能直接影响微生物的生能直接影响微生物的生长和和发酵酵产品品的的积累。累。碳氮比碳氮比严格格讲指元素比，但通常指原料比。指元素比，但通常指原料比。一般情况：一般情况：产物不含氮，物不含氮，细菌，；酵母菌，菌，；酵母菌，100:20；霉菌，；霉菌，100:10。

25、如：酒精。如：酒精发酵酵产物含氮，碳氮比物含氮，碳氮比较高。高。如：谷氨酸生如：谷氨酸生产，100:15-21。四、前体的控制四、前体的控制同前体同前体对不同菌作用不同；不同菌作用不同；不同前体不同前体对同种菌作用不同；同种菌作用不同；同前体，同种菌，使用不同，效果不同。同前体，同种菌，使用不同，效果不同。一般前体越多，增一般前体越多，增产越多；越多；但大多毒性也增大。但大多毒性也增大。青霉素青霉素G：苯乙：苯乙酰胺胺（），多次（），多次（1次次/12小小时）。同）。同时要注意前体物要注意前体物质被作被作为营养物养物质利用。利用。五、补料五、补料补料解决的料解决的问题：菌体早衰；料粘，菌体早衰

26、；料粘，搅拌能耗高，消泡拌能耗高，消泡难，溶氧降低，溶氧降低，渗透渗透压高。高。补料的目的和方法：料的目的和方法：限制生限制生长速度；速度；仅维持呼吸，半持呼吸，半饥饿状状态，利于，利于产物合成；物合成；补足足发酵液体酵液体积；控制好控制好时间、速率和配比。、速率和配比。抗生素的生抗生素的生产：中：中间补料量达到基料量达到基础料的料的1-3倍。倍。生产上多用丰富培养基提高产量生产上多用丰富培养基提高产量红霉素发酵基本培养基：玉米浆、黄豆饼红霉素发酵基本培养基：玉米浆、黄豆饼粉、蔗糖，菌体生长达到高峰。粉、蔗糖，菌体生长达到高峰。补加蔗糖，红霉素合成重新开始。补加蔗糖，红霉素合成重新开始。五、补

27、料五、补料 目前目前还不能完全从生化反不能完全从生化反应的基本原理来的基本原理来推断和推断和计算算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、化学、细胞生物学、微生物学等的基本理胞生物学、微生物学等的基本理论，参，参照前人所使用的照前人所使用的较适合某一适合某一类菌种的菌种的经验配方，配方，再再结合所用菌种和合所用菌种和产品的特性，采用品的特性，采用摇瓶、玻璃瓶、玻璃罐等小型罐等小型发酵酵设备，按照一定的，按照一定的实验设计和和实验方法方法选择出出较为适合的培养基。适合的培养基。第三节第三节 发酵培养基的设计和优化发酵培养基的设计和优化 当培养基成分确定后

28、，剩下的当培养基成分确定后，剩下的问题就是各成分最适就是各成分最适 的的浓度，由于培养基成分很多，度，由于培养基成分很多，为减少减少实验次数常采次数常采 用一些合理的用一些合理的实验设计方法。方法。正交法、均匀分布法、响正交法、均匀分布法、响应面法面法 根据前人的根据前人的经验和培养基成分确定和培养基成分确定时一些必一些必须考考虑 的的问题，初步确定可能的培养基成分；，初步确定可能的培养基成分；通通过单因子因子实验最最终确定出最确定出最为适宜的培养基成分；适宜的培养基成分；培养基设计的步骤培养基设计的步骤类胡萝卜素高产菌类胡萝卜素高产菌Y11Y11的培养基的优化的培养基的优化郭秒郭秒,食品与工

29、业发酵，食品与工业发酵，20042004类胡萝卜素的作用：色素、营养保健类胡萝卜素的作用：色素、营养保健三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤原培养基原培养基:三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤 通过单因子实验确定适宜的培养基成分通过单因子实验确定适宜的培养基成分(以碳源为例以碳源为例)考虑到成本：乙酸钠是较为合适的碳源进一步：乙酸钠的浓度0.2%比较好三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤结果：碳源：乙酸钠 0.2%氮源：氯化铵 0.2%酵母膏0.03%无机盐:复合无机盐0.05%三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤 正交设计确定优化的配方三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤改进后培养基原培养基改进后培养基的发酵结果改进后培养基的发酵结果三、培养基设计的步骤三、培养基设计的步骤本章知识结构本章知识结构培养基的成分培养基的成分不同碳、氮源的利用速度不同碳、氮源的利用速度营养物质的调节方法营养物质的调节方法碳氮比例的调节碳氮比例的调节 培养基的类型培养基的类型培养基的设计与优化培养基的设计与优化