专题2-课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离和计数优秀PPT.ppt

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1、课题背景课题背景尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能干脆被尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能干脆被农作物吸取。农作物吸取。土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成能合成能合成能合成脲酶脲酶脲酶脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+2NH2NH3 3COCO2 2+H2O问：问：问：问：1 1 1 1 尿素如何被利用的呢？尿素如何被利用的呢？尿素如何被利用的呢？尿素如何被利用的呢？2 2 2 2 细菌为什么能分解尿素？细菌为什么能分解尿素？细菌为什么能分解尿素？细菌为什么能分解尿素？土壤中的细菌将尿素土

2、壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。3 3、常见的分解尿素的微生物、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。也能分解尿素。4 4、课题目的、课题目的从土壤中分别出能够分解尿素的细菌从土壤中分别出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌学习目标分解1.知道筛选

3、目的菌株的思路和计数的方法，原理2.驾驭从土壤中分别分解尿素的微生物及进行平板计数的方法.一一.探讨思路探讨思路.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置比照设置比照1 1、实例：、实例：DNADNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应(PCR(PCR技术技术)是一种在体是一种在体外将少量外将少量DNADNA大量复制大量复制的技术，此项技术要求的技术，此项技术要求运用耐高温（运用耐高温（930C930C左右）左右）的的DNADNA聚合酶。聚合酶。.筛选菌株筛选菌株提出的问题提出的问题 如何找寻耐高温的酶？如何找寻耐高温的酶？解决问题的思路解决问题的思路 找寻耐高温环境找寻耐高温环境启示：找寻目

4、的菌种时要依据它对启示：找寻目的菌种时要依据它对生存环境的要求，到相应的环境中生存环境的要求，到相应的环境中去找寻。去找寻。原理原理 高温淘汰其他菌种，选出耐高高温淘汰其他菌种，选出耐高温菌种，温菌种，耐高温菌种提取耐高温酶耐高温菌种提取耐高温酶。阅读阅读P21-23P21-23，思索：，思索：1 1、说出试验室中微生物的筛选原理、说出试验室中微生物的筛选原理2 2、依据本课题所运用的培育基，回答：、依据本课题所运用的培育基，回答：从物理性质看此培育基属于哪类？从物理性质看此培育基属于哪类？该培育基的配方中，为微生物的生长供应碳源该培育基的配方中，为微生物的生长供应碳源 和氮源的分别是什么物质

5、？和氮源的分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？3 3、总结统计菌落数目常用的方法，并据此分析、总结统计菌落数目常用的方法，并据此分析P22 P22 （二）中两位同学的结果是否合理。（二）中两位同学的结果是否合理。4 4、分析、分析P22P22（三）中（三）中A A同学的试验，想想如何对其同学的试验，想想如何对其 结果进行验证结果进行验证要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包括养分、生理、生长条件等，配置合适的培育基。括养分、生理、生长条件等，配置合适的培育基。方法：方法：抑制大多数微生

6、物生长抑制大多数微生物生长造成有利于该菌生长的环境造成有利于该菌生长的环境结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过稀结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培育分别。释涂布平板法等方法对它进行纯化培育分别。2、试验室中微生物的筛选原理：、试验室中微生物的筛选原理：人为供应有利于目的菌株生长的条件人为供应有利于目的菌株生长的条件(包括养包括养分、温度、分、温度、pH等等)，同时抑制或阻挡其他微，同时抑制或阻挡其他微生物生长。生物生长。选择培育基选择培育基15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSO

7、MgSO447H7H2 2O O2.1g2.1gNaHNaH2 2POPO4 41.4g1.4gKHKH2 2POPO4 43 3、本课题所运用的培育基：、本课题所运用的培育基：从物理性质看此培育从物理性质看此培育基属于哪类？基属于哪类？固体培育基固体培育基该培育基的配方中，为该培育基的配方中，为微生物的生长供应碳源和微生物的生长供应碳源和氮源的分别是什么物质？氮源的分别是什么物质？此培育基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？此培育基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？碳源：碳源：葡萄糖葡萄糖氮源：氮源：尿素尿素能。该培育基的唯一氮源为尿素，只有产生脲能。该培育基的唯一氮源为尿素，只有产生脲酶的细

8、菌才能利用尿素作为氮源而生存。酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。试验组试验组比照组比照组培育基培育基类型类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培育基的培育基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培育基培育基是是是是分别分分别分解尿素解尿素的细菌的细菌推断该推断该培育基培育基有无选有无选择性择性只生长分只生长分解尿素的解尿素的细菌细菌生长多生长多种微生种微生物物怎样证明此培育基具有选择性呢？怎样证明此培育基具有选择性呢？1 1、显微镜干脆计数：、显微镜干脆计数：可以利用血球计数板，在显微镜下计算确定容可以利用血球计数板，在显微镜下计算确定容积里样品中微生物的数量。积里样品

9、中微生物的数量。.统计菌落数目：统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；个体小的细菌在显微镜下难以视察个体小的细菌在显微镜下难以视察缺点缺点2.2.间接计数法（间接计数法（活菌计数法）活菌计数法）（1 1）常用方法：）常用方法：每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数(CV)M(CV)M其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长的平代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，均菌落数，V V代表涂布平板时所用的稀释液代表涂布平板时所用的稀释液的体积的体积(ml)(ml)，M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培育基表当

10、样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌。多少活菌。（2）原理：）原理：稀释涂布平板法稀释涂布平板法思索：活菌计数法统计的菌落数是否与活菌实思索：活菌计数法统计的菌落数是否与活菌实际数目吻合？为什么？际数目吻合？为什么？统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只有一个菌落察到的只有一个菌落因

11、此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。来表示。例：两位同学用稀释涂布平板法测定同例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106106的培育基中，得到以下两种统计结果。的培育基中，得到以下两种统计结果。1 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为菌落数为230230。2 2、乙同学在该浓度下涂布了、乙同学在该浓度下涂布了A A、B B、C C三个平板，三个平板，统计的菌落数分别为统计的菌落数分别为2121、212212、2562

12、56，该同学以这三，该同学以这三个平板上菌落数的平均值个平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。你认为这两位同学的做法正确吗？假如有问题，你认为这两位同学的做法正确吗？假如有问题，错在哪？错在哪？甲：没有重复试验（至少涂布甲：没有重复试验（至少涂布3 3个平板）个平板）乙：乙：A A组结果误差过大，不应用于计算平均值组结果误差过大，不应用于计算平均值注：误差太大，须重做或再多设几组注：误差太大，须重做或再多设几组留意事项留意事项为了保证结果精确，一般选择菌落为了保证结果精确，一般选择菌落数在数在3030030300的平板上进行计数。的平板上进行计数。为使结果接近真实值将同一

13、稀释度为使结果接近真实值将同一稀释度至少涂布三个平板作重复组，培育至少涂布三个平板作重复组，培育计算出菌落平均数。计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数低，因此，统计结果一般用菌落数来表示。来表示。每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数(CV)M(CV)M其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，的平均菌落数，V V代表涂代表涂布平板时所用的稀释液的体积布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)，M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。利用选择培育基进行尿素分解菌的分别利用选择培育基进行尿素

14、分解菌的分别过程中，从对应稀释倍数为过程中，从对应稀释倍数为106106的培育基中，的培育基中，A A、B B两同学分别得到以下两种统计结果。两同学分别得到以下两种统计结果。1 1、A A同学筛选出同学筛选出150150个菌落。个菌落。2 2、B B同学筛选出同学筛选出5050个菌落。个菌落。B B认为认为A A的培育基被杂菌污染了，或培育基的培育基被杂菌污染了，或培育基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培育基中生长。素的细菌也能在该培育基中生长。A A确认自己确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。的操作无误，但也拿不出能

15、令人信服的证据。缘由：土样不同培育基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)小结：通过这个事例可以看出，试验结果要有小结：通过这个事例可以看出，试验结果要有劝服力，比照组的设置是必不行少的。劝服力，比照组的设置是必不行少的。方案一：由其他同学用与方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行试验同学相同土样进行试验方案二：将方案二：将A同学配制的培育基在不加土样的状同学配制的培育基在不加土样的状况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是否受到污染。否受到污染。结果预料：结果预料：a.假如结果与假如结果与A同学一样，则证明同学一样，则证明A无误；无误；b.

16、假如结果不同，则证明假如结果不同，则证明A同学存在操作失误或培同学存在操作失误或培育基的配制有问题。育基的配制有问题。设置比照的主要目的是解除试验组设置比照的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度。试验结果的可信度。.设置比照：设置比照：限制变量限制变量设置比照的方法：设置比照的方法：空白比照：不给比照组任何处理因素。空白比照：不给比照组任何处理因素。条件比照：给比照组施以部分试验因素，但不是条件比照：给比照组施以部分试验因素，但不是所要探讨的处理因素。所要探讨的处理因素。自身比照：比照组和试验组都在同一探讨对象上进行。自身比照

17、：比照组和试验组都在同一探讨对象上进行。相互比照：不单设比照组，而是几个试验组相互比照。相互比照：不单设比照组，而是几个试验组相互比照。练习：推断正误：练习：推断正误：1、依据培育皿中菌落数可以精确计算、依据培育皿中菌落数可以精确计算样品中含有的活菌实际数目（样品中含有的活菌实际数目（）2、只有能合成脲酶的微生物才能分解、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素（尿素（）3、筛选分解尿素的细菌应以尿素作为、筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培育基中的唯一氮源（培育基中的唯一氮源（）4、统计样品中的活菌一般用平板划线、统计样品中的活菌一般用平板划线法（法（）【巩巩固固1 1】分分别别土土壤壤中中分分解解尿

18、尿素素的的细细菌菌，对对培培育育基的要求是基的要求是()。加加尿尿素素不不加加尿尿素素加加琼琼脂脂不不加加琼琼脂脂加加葡葡萄萄糖糖不不加加葡葡萄萄糖糖加加硝硝酸酸盐盐不不加硝酸盐加硝酸盐A A B B C C D D 【巩巩固固2 2】用用来来推推断断选选择择培培育育基基是是否否起起到到了了选选择择作作用用，须要设置的比照是须要设置的比照是()。A.A.未接种的选择培育基未接种的选择培育基B.B.未接种的牛肉膏蛋白胨培育基未接种的牛肉膏蛋白胨培育基C.C.接种了的牛肉膏蛋白胨培育基接种了的牛肉膏蛋白胨培育基D.D.接种了的选择培育基接种了的选择培育基 CC阅读阅读P23-26P23-26，思索

19、：，思索：1 1、说出土壤取样的缘由和操作方法、说出土壤取样的缘由和操作方法2 2、说出样品稀释的目的，熟记细菌、放线菌、真菌、说出样品稀释的目的，熟记细菌、放线菌、真菌 的稀释倍数的稀释倍数3 3、熟记细菌、放线菌、霉菌的培育温度和时间、熟记细菌、放线菌、霉菌的培育温度和时间4 4、说明鉴定该种细菌能够分解尿素的方法、说明鉴定该种细菌能够分解尿素的方法二、试验设计：二、试验设计：土壤取样土壤取样制备培养基制备培养基样品稀释样品稀释取样涂布平板取样涂布平板微生物培养、观察微生物培养、观察菌落计数菌落计数二二.试验设计试验设计.土壤取样土壤取样 同其他生物环境相比，土壤中同其他生物环境相比，土壤

20、中的微生物数量最大，种类最多。的微生物数量最大，种类最多。取样要求：先铲去表层土取样要求：先铲去表层土3cm3cm左左右，再取样右，再取样取土样用的小铁铲和盛土样的的取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前都要灭菌。信封在运用前都要灭菌。P25P25.制备培育基：制备培育基：制备以尿素为唯一氮源的选择培育制备以尿素为唯一氮源的选择培育基。基。（三）样品的稀释（三）样品的稀释应在应在火焰旁火焰旁称取土壤称取土壤10g10g。将称好的土。将称好的土样倒入盛有样倒入盛有90mL90mL无菌水的锥形瓶中，塞好无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。棉塞。P25P25 在稀释土壤溶液的过程中，在稀释土壤溶液的过程中

21、，每一步都要每一步都要在火焰旁进行。在火焰旁进行。在实际操作中，通常选用确定稀释范在实际操作中，通常选用确定稀释范围的样品液进行培育。以保证获得菌落围的样品液进行培育。以保证获得菌落数在数在3030300300之间、适于计数的平板。之间、适于计数的平板。细菌稀释度为细菌稀释度为104104、105105、106106 放线菌稀释度为放线菌稀释度为103103、104104、105105 真菌稀释度为真菌稀释度为102102、103103、104104为什么分别不同的微生物要接受不同的稀释度？为什么分别不同的微生物要接受不同的稀释度？缘由：土壤中各类微生物的数量是不同的。缘由：土壤中各类微生物的

22、数量是不同的。结结论论：为为获获得得不不同同类类型型的的微微生生物物，就就须须要要按按不不同同的的稀稀释释度度进进行行分分别别，同同时时还还应应当当有有针对性地供应选择培育的条件。针对性地供应选择培育的条件。测定土壤中细菌的数量一般选用测定土壤中细菌的数量一般选用测定土壤中细菌的数量一般选用测定土壤中细菌的数量一般选用104104、105105和和和和106106倍倍倍倍的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一般选的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一般选的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一般选的稀释液进行平板培育，而测定真菌的数量一般选用用用用102102、103103和和和和1041

23、04倍稀释。其缘由是（倍稀释。其缘由是（倍稀释。其缘由是（倍稀释。其缘由是（）A.A.细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大B.B.细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释，真菌不易稀释C.C.细菌在土壤中的数量比真菌多细菌在土壤中的数量比真菌多细菌在土壤中的数量比真菌多细菌在土壤中的数量比真菌多D.D.随机的，没有缘由随机的，没有缘由随机的，没有缘由随机的，没有缘由C试验时要对培育皿作好标记。注明培育试验时要对培育皿作好标记。注明培育基类型、培育时间、稀释度、培育物等。基类型、培育时间、稀释度、培育物

24、等。.取样涂布取样涂布.微生物的培育与视察微生物的培育与视察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培育时间不足而导致遗漏菌落的数目。培育时间不足而导致遗漏菌落的数目。不同种类的微生物，往往须要不同的培育温度不同种类的微生物，往往须要不同的培育温度和培育时间：和培育时间：细细 菌：菌：303037 37 培育培育1 12d2d放线菌：放线菌：252528 28 培育培育5 57d7d霉霉 菌：菌：252528 28 培育培育3 34d4d一般来说，在确定的培育条件下（

25、相同一般来说，在确定的培育条件下（相同的培育基、温度及培育时间），同种我的培育基、温度及培育时间），同种我微生物表现出稳定的菌落特征。包括菌微生物表现出稳定的菌落特征。包括菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等方落的形态、大小、隆起程度和颜色等方面。面。菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。微生物的培育与视察微生物的培育与视察思索在探讨未知微生物时务必规范操思索在探讨未知微生物时务必规范操作，以防被作，以防被感染，试验后确感染，试验后确定要洗手。定要洗手。致病微生物致病微生物三、操作提示三、操作提示P251、无菌操作、无菌操作2、做好标记、做好标记3、制定支配、制定支

26、配为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先制定支配。当事先制定支配。四四.结果分析与评价结果分析与评价(一）培育物中是否有杂菌污一）培育物中是否有杂菌污染以及选择培育基是否筛选出染以及选择培育基是否筛选出菌落菌落 通过比照试验，若培育物通过比照试验，若培育物有杂菌污染，比照的培育基菌有杂菌污染，比照的培育基菌落数偏高；落数偏高；若培牛肉膏蛋白胨培育基若培牛肉膏蛋白胨培育基的菌落数远大于选择培育基的的菌落数远大于选择培育基的数目，说明选择培育基已筛选数目，说明选择培育基已筛选出一些菌落。出一些菌落。（二）样品的稀释操作是否成功及重复（二）样品的稀释操作是

27、否成功及重复组的结果是否一样组的结果是否一样 提示：假如得到了提示：假如得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数个以上菌落数目在目在3030030300的平板，则说明稀释操作比的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，假犹较成功，并能够进行菌落的计数，假犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，须要重新试验。较大，表明试验不精确，须要重新试验。五五.课外延长课外延长在以尿素为唯一氮源的培育在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂。培育基中加入酚红指示剂。培育某种细菌后，假如某种细菌后，假如PHPH上升，上升，指示剂将变红，说明该细菌

28、指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。能够分解尿素。测定饮水中大肠杆菌数量的方法测定饮水中大肠杆菌数量的方法测定饮水中大肠杆菌数量的方法测定饮水中大肠杆菌数量的方法-滤膜法。是将确定滤膜法。是将确定滤膜法。是将确定滤膜法。是将确定体积的水过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培体积的水过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培体积的水过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培体积的水过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中育，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中大肠杆菌的数量。大

29、肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心 ,有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 本课题学问小结本课题学问小结:1 1下列是关于下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”试验操作的试验操作的叙述，其中错误的是（叙述，其中错误的是（）A A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基，经高温、高用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基，经高温、高压灭菌后倒平板压灭菌后倒平板B B取取104104、105105、106106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 0.1 mLmL

30、，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上C C将试验组和比照组平板倒置，将试验组和比照组平板倒置，37 37 恒温培育恒温培育242448 h48 hD D确定比照组无菌后，选择菌落数在确定比照组无菌后，选择菌落数在300300以上的试验以上的试验组平板进行计数组平板进行计数 实践训练实践训练D D 2.2.推断：推断：利用稀释涂布平板法既能分别微生物也能对微生物进利用稀释涂布平板法既能分别微生物也能对微生物进行计数行计数接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落单个菌落以尿素为唯一氮源且含酚红的培育基可选择和鉴别尿以尿素为唯一氮源

31、且含酚红的培育基可选择和鉴别尿素分解菌素分解菌3 3尿素是一种重要的农业肥料，尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌），培育基成素的细菌（目的菌），培育基成分如表所示，试验步骤如图所示，请分析回答问题：分如表所示，试验步骤如图所示，请分析回答问题：（1 1）培

32、育基中加入尿素的目的是筛选到）培育基中加入尿素的目的是筛选到_，这，这种培育基从功能上属于种培育基从功能上属于_培育基。培育基。（2 2）“目的菌目的菌”生长所需的氮源来自培育基中的生长所需的氮源来自培育基中的_，其同化作用类型是，其同化作用类型是_。目的菌目的菌选择选择异养型异养型尿素尿素15.0g15.0g15.0g15.0g琼脂琼脂琼脂琼脂1.0g1.0g1.0g1.0g尿素尿素尿素尿素10.0g10.0g10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖0.2g0.2g0.2g0.2gMgSOMgSOMgSOMgSO44447H7H7H7H2 2 2 2O O O O2.1g2.1g2.1g

33、2.1gNaHNaHNaHNaH2 2 2 2POPOPOPO4 4 4 41.4g1.4g1.4g1.4gKHKHKHKH2 2 2 2POPOPOPO4 4 4 4将上述物质溶解后，用蒸馏水定将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到容到100mL100mL（3 3）下图是接受纯化微生物培育的两种接种方法接）下图是接受纯化微生物培育的两种接种方法接种后培育的效果图。则获得图种后培育的效果图。则获得图A A效果的接种方法是效果的接种方法是_，图，图B B效果的接种方法是效果的接种方法是_，一同学在纯化土壤中的细菌时，发觉培育基上的菌落一同学在纯化土壤中的细菌时，发觉培育基上的菌落连成一片，最可能的缘由

34、是连成一片，最可能的缘由是_（答（答出一条即可）。出一条即可）。稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法菌液浓度过高菌液浓度过高（4 4）在进行分别分解尿素的细菌试验时，某同学从）在进行分别分解尿素的细菌试验时，某同学从培育基上筛选出大约培育基上筛选出大约150150个菌落，而其他同学只选择个菌落，而其他同学只选择出大约出大约5050个菌落，该同学的试验结果产生的缘由可能个菌落，该同学的试验结果产生的缘由可能有有_（填序号）（填序号）由于土样不同由于土样不同 由于培育基污染由于培育基污染 由于操作由于操作失误失误 没有设置比照没有设置比照4.饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物

35、质，饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸取利用，还影响对其他养分物质的利用。很难被动物吸取利用，还影响对其他养分物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸取若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸取利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分别产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。别产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。(1)培育基中除了添加植酸钙以外，应含有培育基中除了添加植酸钙以外，应含有_、_、水、无机盐等基本养分物质。、水、无机盐等基本养分物质。碳源碳源氮源氮源(2)分别产植酸酶的菌株

36、，需先配制合适的培育基，配分别产植酸酶的菌株，需先配制合适的培育基，配制培育基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的制培育基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是是_和灭菌。对培育基进行灭菌的常用方法是和灭菌。对培育基进行灭菌的常用方法是_。通常每种稀释液需涂布。通常每种稀释液需涂布_个平板，取个平板，取其平均值。若将最终一个试管中的菌液每次吸取其平均值。若将最终一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培育后获得平均值是涂布培育后获得平均值是C，则，则1g土壤中含有土壤中含有此菌的菌株数是此菌的菌株数是_个。个。调整调整pH值值高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌3C106(3)为防止杂菌污染，要对培育基

37、和培育皿等进行为防止杂菌污染，要对培育基和培育皿等进行_，而且须将接种后的培育皿呈，而且须将接种后的培育皿呈_状态放置。状态放置。(4)接种以前进行的一系列操作，目的是在培育皿表面接种以前进行的一系列操作，目的是在培育皿表面形成形成_。依据土壤样品的稀释倍数和接种稀。依据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的释液的体积，统计平板上的_就能大致推想就能大致推想出样品中的活菌数。出样品中的活菌数。灭菌灭菌倒置倒置单个菌落单个菌落菌落数菌落数5微生物与人类关系亲密。虽然有些微生物能使微生物与人类关系亲密。虽然有些微生物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的，请回动植物患病，但多数微生

38、物对人类是有益的，请回答下列有关问题：答下列有关问题：(1)下表为两种微生物的培育基配方。下表为两种微生物的培育基配方。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O 葡萄糖葡萄糖 尿素尿素琼琼脂脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g 15.0 gB培育基：培育基：纤维纤维素粉素粉NaNO3Na2HPO47H2OKH2PO4MgSO47H2OKCl酵母酵母膏膏水解水解酪素酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g 0.5 g0.5 gA培育基：培育基：将上述两种培育基中的物将上述两种培育基中的物质质分分别别溶解后，均用蒸溶解后，均用蒸馏馏水定水定容到容到1 000

39、mL。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O 葡萄糖葡萄糖 尿素尿素琼琼脂脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g 15.0 gB培育基：培育基：纤维纤维素粉素粉NaNO3Na2HPO47H2OKH2PO4MgSO47H2OKCl酵母酵母膏膏水解水解酪素酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g 0.5 g0.5 gA培育基：培育基：(1)假如要假如要进进行土壤中分解尿素的行土壤中分解尿素的细细菌的分菌的分别别，则须则须要要选择选择上上述哪种培育基？述哪种培育基？_，该该培育基能分培育基能分别别尿素分解菌的尿素分解菌的缘缘由由是：是：在在该该培育基中可加入培育

40、基中可加入_指示指示剂剂，依据指示，依据指示剂剂的的颜颜色可色可鉴鉴定定该该种种细细菌能菌能够够分解尿素。分解尿素。从功能上来看，上述两种培育基均属于从功能上来看，上述两种培育基均属于_培育基。培育基。A培育基培育基培育基中尿素培育基中尿素为为唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生生长长繁殖繁殖酚酚红红选择选择(2)把牛肉膏蛋白把牛肉膏蛋白胨胨固体培育基倒入平板，等培育基冷凝后，固体培育基倒入平板，等培育基冷凝后，应应将平板将平板_放置，放置，这样这样做的目的是可防止做的目的是可防止_造成造成污污染。染。(3)微生物接种的方法很多，平板划微生物接种的方法很多

41、，平板划线线法操作法操作结结束束时时，为为什么仍什么仍须须要灼要灼烧烧接种接种环环？_。(4)微生物培育微生物培育过过程中程中还还有什么方法或步有什么方法或步骤骤要防止其他微生物要防止其他微生物污污染？染？_、_、_。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O 葡萄糖葡萄糖 尿素尿素琼琼脂脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g 15.0 gB培育基：培育基：纤维纤维素粉素粉NaNO3Na2HPO47H2OKH2PO4MgSO47H2OKCl酵母酵母膏膏水解水解酪素酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g 0.5 g0.5 gA培育基：培育基：倒倒过过来来皿盖上

42、的水珠落入培育基皿盖上的水珠落入培育基杀杀死接种死接种环环上残留菌种，避开上残留菌种，避开污污染染环环境和感染操作者境和感染操作者培育基培育基灭灭菌菌接种接种环环境境灭灭菌菌接种接种过过程无菌操作程无菌操作6.尿素是一种重要的农业肥料，尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下试验，并成功筛选对尿素是否有分解作用，设计了以下试验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌到能高效

43、降解尿素的细菌(目的菌目的菌)。培育基成分如下表。培育基成分如下表所示，试验步骤如图所示。请分析回答问题：所示，试验步骤如图所示。请分析回答问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖葡萄糖10 g尿素尿素1 g琼琼脂脂15 g将上述物将上述物质质溶解后，用自来水定容到溶解后，用自来水定容到1 000 mL(1)培育基中加入尿素的目的是培育基中加入尿素的目的是_，这这种种培育基属于培育基属于_培育基。培育基。(2)“目的菌目的菌”生生长长所需的氮源和碳源分所需的氮源和碳源分别别来自培育基中来自培育基中的的_和和_，试验须试验须要振要振荡荡培育，培育，缘

44、缘由是由是_。(3)在以尿素在以尿素为为唯一氮源的培育基中加入唯一氮源的培育基中加入_，细细菌合成的菌合成的_将尿素分解将尿素分解为为氨，氨，pH增高，增高，使指示使指示剂变红剂变红。筛选筛选目的菌种目的菌种选择选择尿素尿素葡萄糖葡萄糖为为目的菌供目的菌供应应氧气氧气酚酚红红指示指示剂剂脲脲酶酶7.两位同学用稀两位同学用稀释释涂布平板法涂布平板法测测定同一土壤定同一土壤样样品中的品中的细细菌数。在菌数。在对应对应稀稀释释倍数倍数为为10的培育基中，得到以下两种的培育基中，得到以下两种统计结统计结果：果：A同学涂布了一个平板，同学涂布了一个平板，统计统计的菌落数的菌落数为为230；B同学涂布了三

45、个平板，同学涂布了三个平板，统计统计的菌落数分的菌落数分别为别为21、212和和256，该该同学以同学以这这三个平板上菌落数的平均三个平板上菌落数的平均值值163作作为统计结为统计结果。果。试试回答：回答：当当_时时，培育基表面生，培育基表面生长长的一的一个菌落来源于个菌落来源于样样品稀品稀释释液中的液中的_，此，此时统计时统计平板上的菌落数，就能利用平板上的菌落数，就能利用_公式推想出公式推想出样样品中大品中大约约含有多少活菌。含有多少活菌。为为了保了保证结证结果精确，一般果精确，一般选择选择菌落数菌落数为为_的平板的平板进进行行计计数。数。样样品的稀品的稀释释度足度足够够高高一个活菌一个活

46、菌每克每克样样品中的菌株数品中的菌株数(CV)M303008.幽门螺杆菌（幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分别培育。试验基本步骤如下：行分别培育。试验基本步骤如下：请回答：请回答：（1）在配制培育基时，要加入尿素和酚红指示剂，这）在配制培育基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为是因为Hp含有含有，它能以尿素为氮源；若有，它能以尿素为氮源；若有Hp，则菌落四周会出现，则菌落四周会出现色环带。色环带。（2）步骤）步骤X表示表示。在无菌条件下操作时，先将。

47、在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液菌液稀释，然后将菌液到培育基平面上，菌液稀到培育基平面上，菌液稀释的目的是为了获得释的目的是为了获得菌落。菌落。脲脲酶酶红红接种接种涂布涂布单单8.幽门螺旋菌（幽门螺旋菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分别培育。试验基本步骤如下：行分别培育。试验基本步骤如下：请回答：请回答：（3）在培育时，需将培育皿倒置并放在）在培育时，需将培育皿倒置并放在中。中。若不倒置培育，将导致若不倒置培育，将导致。（4）临床上用）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染呼气试验检测人体是否感染Hp，其，其基本原理是基本原理是Hp能将能将14C标记的标记的分解为分解为NH3和和14CO2。恒温培育箱恒温培育箱无法形成无法形成单单菌落菌落尿素尿素