临床免疫学检验_名词解释&重要知识点_(上).doc
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1、抗原抗体反响:是指抗原与响应抗体在体内或体外发生的特异性联合反响。抗原抗体间的结协力触及静电引力、范德华力、氢键跟疏水作使劲,此中疏水作使劲最强,它是在水溶液中两个疏水基团相互打仗,因为对水分子的排挤而趋势聚拢的力。亲跟性affinity:是指抗体分子上一个抗原联合点与一个响应抗原表位AD之间的联合强度,取决于两者空间构造的互补水平。亲协力avidity:是指一个完好抗体分子的抗原联合部位与假定干响应抗原表位之间的联合强度,它与亲跟性、抗体的联合价、抗原的有效AD数量有关。抗原抗体反响的特色:特异性、可逆性、比例性、阶段性。带景象zonephenomenon:一种抗原-抗体反响的景象。在凝集反
2、响或积淀反响中,因为抗体多余或抗原多余,抗原与抗体联合但不克不及形成年夜的复合物,从而不出现肉眼可见的反响景象。抗体适量称为前带,抗原适量称为后带。免疫原immunogen:是指能引诱机体免疫零碎发生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂immunoadjustvant:简称佐剂,是指某些事后或与抗原同时注入体内,可加强机体对该抗原的免疫应对或改动免疫应对范例的物资。半抗原hapten:又称不完整抗原,是指仅存在与抗体联合的才干(抗原性),而独自不克不及引诱抗体发生无免疫原性的物资。当半抗原与卵白质载体联合后即可成为完整抗原。载体carrier:联合后能赐与半抗原免得疫原性的物资。载体效应:
3、首次免疫与再次免疫时,只要使半抗原联合在统一载体上,才干使机体发生对半抗原的免疫应对,该景象称为。单克隆抗体McAB:将单个B细胞不离出来,加以增殖形成一个克隆群落,该B细胞克隆发生的针对单一表位、构造一样、功用均一的抗体,即。多克隆抗体PcAb:天然抗原分子中常含多种差别抗原特异性的抗原表位,以该抗原物资安慰机体免疫零碎,体内多个B细胞克隆被激活,发生含有针对差别抗原表位的免疫球卵白,即基因工程抗体GEAb:是应用DNA重组及卵白工程技巧,从基因水平对编码抗体的基因停顿改革跟拆卸,经导入恰当的受体细胞后从新表白的抗体。杂交瘤技巧【道理】以聚乙二醇PEG为细胞交融剂,使免疫后能发生抗体的小鼠脾
4、细胞与能在体外临时繁衍的小鼠骨髓瘤细胞交融发生杂交瘤细胞,经过次黄嘌呤、氨基蝶呤跟胸腺嘧啶核苷HAT选择性培育基的感化,只让交融胜利的杂交瘤细胞成长,经重复的免疫学检测挑选跟单个细胞培育克隆化,终极取得性能发生所需单克隆抗体又能临时体外繁衍的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩展培育,接种于小鼠腹腔,可从小鼠腹水中掉掉高效价的单克隆抗体。一小鼠骨髓瘤细胞幻想骨髓瘤细胞的前提:细胞株波动,易于传代培育;细胞株自身不发生免疫球卵白或细胞因子;该细胞是HGPRT或TK的缺点株;能与B细胞交融成波动的杂交瘤细胞;交融率高。现在最常用的是NS-1跟SP2/O细胞株二免疫脾细胞多采纳与骨髓瘤细胞同源的纯系BALB/
5、c小鼠;免疫道路多为腹腔内或皮内多点打针法。假定抗原微量,可用脾脏内直截了当打针法停顿免疫。细胞性抗原不需加佐剂,可溶性抗原需加完整弗氏佐剂。三细胞交融是发生杂交瘤细胞的核心环节。普通用分子量1000D、1500D、4000DPEG作细胞交融剂,浓度3050%之间,根本办法是将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:21:10比例混杂,参加PEG,引诱两种细胞交融,时刻操纵在2min以内,再参加培育液迟缓稀释PEG交融液,直至掉掉交融感化,交融细胞形成存在两个或多个核的异核体,终极发生杂交细胞。四杂交瘤细胞的选择性培育肿瘤细胞剖析DNA有两条道路:一条为生物剖析道路,可被叶酸拮抗物氨基蝶呤阻断;另一条为替换道
6、路,叶酸代谢碰壁时,细胞经过HGPRT跟TK,应用核苷酸前体物剖析核苷酸,进而剖析DNA。HAT培育液含三种身分:次黄嘌呤H、氨基蝶呤A跟胸腺嘧啶核苷T,经HAT培育液挑选后,只要存在两亲本细胞双重特点的杂交瘤细胞能临时生活并发生抗体,成为制作单克隆抗体的细胞源。细胞范例畸形培育细胞TK缺点细胞HGPRT缺点细胞杂交瘤细胞畸形培育基+HAT培育基+-+凝集反响agglutinationreaction:是指细菌跟红细胞或红细胞等颗粒性抗原或外表包被可溶性抗原或抗体的颗粒性载体与响应抗体或抗原特异性联合后,在恰当电解质存鄙人,出现肉眼可见的凝集景象。直截了当:在恰当电解质参加下,细菌、螺旋体跟红
7、细胞等颗粒性抗原直截了当与响应抗体联合后出现肉眼可见的凝集景象,称为。直接:可溶性抗原或抗体先吸附于恰当大小的颗粒性载体如正凡人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等的外表,而后与响应抗体抗原感化,在适合的电解质存在前提下出现特异性凝集景象,称为。其敏感度高于直截了当凝集反响跟积淀反响。正向直接凝集反响:用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。反向直接凝集反响:用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。直接凝集克制反响:用抗原致敏的载体颗粒及响应的抗体作为诊断试剂,检测标本中能否存在与致敏抗原一样的抗原。直接血凝试验:是以红细胞为载体的直接凝集试验,即用曾经明白的抗原或抗体致敏红细胞,与标本中响应
8、的抗体或抗原特异联合,出现红细胞凝集景象。胶乳凝集克制试验LAT:将抗原或抗体致敏胶乳颗粒,直截了当与待检标本中的抗体或抗原发生凝集反响。常用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳直截了当coombs试验:将抗人球卵白试剂直截了当加到外表联合抗体的受检红细胞中,即可见细胞凝集。用于检测吸附于红细胞外表的不完整抗体。如HDN、AIHA直接coombs试验:将受检血清跟存在响应抗原性的红细胞相联合,再参加抗人球卵白抗体即可出现可见的红细胞凝集。用于检测血清中游离的不完整抗体。积淀反响precipitationreaction:是指可溶性抗原与响应抗体在恰当前提下发生特异性联合而出现可见的积淀景象。免疫浊度测定:
9、是运用抗原抗体联合在液体中形成的免疫复合物搅扰光芒可用仪器检测的特色,将古代光学丈量仪器与主动剖析检测零碎相联合运用于积淀反响,对种种液体介质中的微量抗原、抗体跟药物及其余小分子半抗原物资停顿定量测定的技巧。钩状效应highdosehookeffect:免疫浊度测定,抗原适量招致形成的免疫复合物IC分子小,发生再解离,浊度下落,光散射增加。单向免疫分散试验:是先将必定量的抗体混于琼脂凝胶中,使待测的抗原溶液在琼脂内由部分向四周自在分散,在必定地区内形成可见的积淀环。环的直径或面积的大小与抗原含量正相干。常用于IgG/A/M、补体C3/C4等血浆卵白的测定。双向免疫分散试验:是将抗原核抗体加在统
10、一琼脂板的对应孔中,各自向对方分散,在浓度比例恰当处形成积淀线。积淀线濒临抗原孔,阐明抗体浓度较年夜;濒临抗体孔那么阐明抗原浓度年夜。形成的积淀线弯向分子量年夜的一方。待测物为两种抗原两条积淀线相互符合相连,两抗原中存在一样表位;两条积淀线穿插,阐明两抗原完整差别;两条积淀线相切,提醒两抗原之间有部分一样。对流免疫电泳CIEP:本质上是双扩跟电泳的联合。在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中停顿电泳,分子量小、等电点低、带有较多负电荷的Ag泳朝阳极,而Ab球卵白等电点偏高约为6-7,在pH8.6时带负电荷较少,加上分子量较年夜,泳动慢,受电渗指电场中液体对固体支撑物的绝对挪动搅扰后向阴极发展,如斯抗原
11、抗体作绝对活动,在较短时刻内即可相遇,在孔间两者分子比例适合的地点形成积淀线。抗原加在-级,抗体加在+级抗原浓度越高,积淀线越濒临抗体孔,乃至超越抗体孔。本法轻便疾速,敏锐度是双扩的816倍,可检出卵白质浓度达g/ml,常用于Ag/Ab的性子/效价/纯度测定。火箭免疫电泳RIE:本质上是单扩跟电泳的联合。是将抗体混杂于琼脂中,电泳时,抗体不挪动,抗起因负极向正极挪动,并随抗原浓度的下落,抗原泳动的基底区也逐突变窄,抗原抗体免疫复合物形成的积淀西安也越来越窄,形成一个火箭状的不溶性复合物积淀峰。抗体浓度必准时,积淀峰的高度与抗原量呈正相干。其敏锐度可达ng/ml,常用于IgA/G等卵白定量。免疫
12、电泳IEP:将待测标本卵白质抗原置于琼脂凝胶中电泳,样品中各卵白身分因所带电荷、分子量及构型差别,被分红肉眼弗成见的假定干区带。而后沿与电泳偏向开一平行的抗体槽并参加抗血清,置室温或37度使两者分散。18-24h后,各区带卵白与响应的Ab在响应的地位上形成弧形积淀线。Ag越多,积淀线越濒临Ab槽,其积淀线越粗,可做纤细的卵白质组分剖析,仅为定性试验。免疫牢固电泳IFE:本质是区带电泳跟积淀反响相联合。先将血清卵白质置于琼脂凝胶中停顿区带电泳不离,再将牢固剂跟各型免疫球卵白及轻链抗血清加于凝胶外表的泳道上,经过孵育,牢固剂跟抗血清在凝胶内浸透、分散,抗原抗体直截了当发生积淀反响,洗脱游离的抗体,
13、形成的抗原抗体复合物那么保管在凝胶中。经氨基黑,参考泳道跟抗原抗体积淀区被着色,依照电泳挪动间隔不离单克隆组分,可对种种Ig及其轻链停顿分型。最常用于M卵白的判定。喷射性核素:存在喷射性的核素,在天然前提下可发生自发性的转化变为另一种喷射性核素,并同时释喷射线。这一改变进程称为喷射性衰变。喷射化学纯度:指在标记物中联合在抗原或抗体上的喷射活性占该标记物总喷射活性的百分比。比喷射活性:是指单元品质标记物中所含的喷射性活度,或每分子抗原或抗体均匀所联合的喷射性原子数量。喷射免疫剖析RIA:是应用喷射性核素标记抗原与非标记抗原待测/规范抗原同时跟限量特异性抗体停顿竞争性联合反响,经过测定喷射性核素标
14、记抗原与抗体复合物的喷射性活度,经响应的数学函数关联推算待测抗原的含量。免疫喷射剖析IRMA:是应用喷射性标记的抗体来测定样品中抗原的办法,所用的标记抗体是适量的,抗原全体长短标记的。待测抗原与适量标记抗体联合反响形成标记抗体-抗原复合物及游离的标记抗体,测定的是标记抗体-抗原复合物的量.荧光免疫技巧:是将抗原抗体反响与荧光技巧相联合而树破的一种免疫荧光技巧,存在高度特异性、敏理性跟直不雅性。荧光抗体技巧FAT:以荧光素标记抗体对破原停顿定位染色,并借助荧鲜明微镜不雅看标本片上荧光染色的形状,从而推断能否存在待测抗原,这种技巧确实是。荧光抗体染色办法:直截了当法轻便疾速特异性强,但敏理性不如直
15、接法,一种荧光抗体只能检测一种抗原、直接法敏理性比直截了当法高510倍,一种荧光二抗可检测多种抗原/抗体,但轻易发生非特异性荧光、双标记法用于检测统一标本中的两种抗原荧光:荧光物资接收激起光的能量后,使本来处于基态的电子跃迁到激起态,当其复兴至基态时,激起态的电子以发射光的方法开释出能量,这种发射光称为。发射光谱:是指牢固激起光波长,在差别波长下所记载到的样品发射荧光的谱图激起光谱:是指牢固检测发射光荧光波长,用差别波长的激起光照耀样品掉掉的荧光的谱图。荧光效力:是指荧光分子将接收的光能改酿成荧光的百分率,与发射荧光光量子的数值成反比。荧光效力发射荧光的光量分子数荧光强度接收光的光量子数激起光
16、强度荧光猝灭:荧光分子的辐射才干在遭到激起光较长时刻的照耀后会削弱的景象。只要那些能发生分明荧光的无机化合物才干作为荧光色素。stokes位移:即激起光谱跟发射光谱的波长差。镧系元素stokes位移年夜273nm,激起/发射光谱不堆叠,可增加搅扰。酶免疫技巧:是将酶高效催化反响的专注性跟抗原抗体反响的特异性相联合的一种免疫标记检测技巧。是将酶与抗原或抗体结剖析酶标记联合物酶标抗原/抗体,酶标联合物既保管了抗原/抗体的免疫学活性,同时也保管了酶对底物的催化活性。在酶标记抗体抗原与抗原抗体的特异性反响实现后,参加酶感化的响应底物,经过酶催化底物发生显色反响,对破原或抗体停顿定位、定性或定量的测定。
17、常用的酶:辣根过氧化物酶HRP、碱性磷酸酶ALP、-半乳糖苷酶-Gal常用的底物:HRP有邻苯二胺OPD、四甲基联苯胺TMB。ALP为对-硝基苯磷酸酯p-NPP。-Gal为4-甲基伞形酮-D半乳糖苷4MUG常用的标记办法:交联法戊二醛跟直截了当法改进过碘酸钠法固相载体的选择:塑料成品聚苯乙烯、聚氯乙烯、微粒、膜载体包被coating:将抗体或抗原联合在固相载体上的进程。封锁blocking:用1%5%的牛血清卵白或5%20%小牛血清消弭固相载体外表未联合的位点,消弭非特异性吸附的搅扰。酶联免疫吸附试验ELISA【根来源根基理】把抗原或抗体联合到某种固相载体外表并坚持其免疫活性即形成固相抗原或抗
18、体;将抗原或抗体与酶衔接成酶标记抗原或抗体既保管免疫活性又保管酶的活性;在测准时,把受检标本测定此中的抗体或抗原跟酶标抗原或抗体按差其余步调与固相载体外表的抗原或抗体起反响,用洗濯的办法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其余物资离开,最后联合在固相载体上的酶量与标本中受检物资的量有必定的比例,参加酶反响的底物后,底物被酶催化变为有色产品,产品的量与标本中受检物资的量直截了当相干,依照色彩反响的深浅停顿定性或定量剖析。一ELISA检测抗原的办法要紧有:1、双抗体夹心法:实用于至多两个抗原决议簇AD的Ag。先将特异性抗体与固相载体联合,形成固相抗体,参加待测标本并温育,使标本中的抗原与固相抗体充沛
19、反响,形成固相抗体抗原复合物,洗濯去除其余游离身分;而后参加酶标记抗体并温育,使固相抗体抗原复合物与酶标记抗体联合,形成固相抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物,为“双抗体夹心;洗濯去除游离酶标记抗体。参加底物,固相载体联合的酶可催化底物成为有色产品,依照产品的显色水平停顿抗原的定性或定量检测。临床上常用于乙肝外表抗原HBsAg、甲胎卵白AFP、人绒毛膜促性腺激素HCG等工程的检测。2、双位点一步法:该法是针对破原分子上两个差别且空间间隔较远的抗原决议簇,分不制备两种单克隆抗体,在包被时运用一种单抗,酶标记时运用另一种单抗。测准时将含待测抗原标本跟酶标记抗体同时参加反响系统,两种抗体分不与差其余抗
20、原决议簇联合,只停顿一次温育,在洗濯后即可加底物停顿显色反响。担负待测抗原浓渡过高时,可出现钩状效应,乃至出现假阴性后果,须要时可将标本恰当稀释后从新测定。3、竞争法:实用于小分子Ag或半抗原只要一个AD。先用特异性抗体包被固相载体,而后同时参加待测抗原跟酶标记的抗原,待测样本中的抗原与酶标记抗原竞争性的与固相载体上的特异性抗体联合,温育一段时刻后洗濯,参加底物显色。二ELISA检测抗体的办法要紧有:1、直接法:检测Ab最常用的办法。常用酶标记羊抗人IgG。2、双抗原夹心法:敏锐度跟特异性高于直接法,道理相似双抗体夹心法,操纵步调也根本一样,也可采纳一步法,但普通不会出现钩状效应。临床上乙型肝
21、炎外表抗体HBsAb的测定常用此法。3、竞争法:当响应抗原资估中含有难以去除的杂质,不易掉掉充足的纯化抗原或抗原性子不波动时,可采纳此办法。要紧用于测定HBcAb跟HBeAb。道理见下:1HBcAb的竞争法:先将核心抗原包被在固相载体上形成固相抗原,而后参加待测标本跟酶标记的特异性核心抗体,如今待测标本中的HBcAb与酶标记HBcAb竞争性地与固相载体上的核心抗原联合,温育后洗濯,参加底物显色,显色的强弱与待测标本中的HBcAb的含量负相干。2HBeAb的竞争法:先将HBeAb包被在固相载体上形成固相抗体,同时参加待测标本跟中跟抗原HBeAg,如今待测标本中的HBeAb跟固相抗体竞争性地联合中
22、跟抗原HBeAg,温育后洗濯,参加酶标记的HBeAb,酶标记抗体与联合于固相抗体上的特异性抗原联合,温育后洗濯,参加底物显色,显色强弱与待测标本中HBeAb的含量呈负相干。4、捕捉法:又称反向直接法,要紧用于血清中特定Ig类不的测定,最常用于病原体急性沾染诊断中IgM型抗体检测。道理:起首将针对IgM的第二抗体包被于固相载体形成固相抗体,参加待测标本后,标本中一切的IgM特异/非特异即可被固相抗体捕捉。第二步参加特异性抗原,其与固相载体上捕捉的IgM特异性抗体联合,再参加针对特异性抗原的酶标记抗体,形成固相抗人链IgM-抗原-酶标记抗体复合物,最后参加底物显色,即可看待测标本中抗原特异性IgM
23、停顿定性或定量测定。此法临床上常用于病原体急性沾染的试验室诊断,如急性甲肝时可检测HAV-IgM抗体,急性乙型肝炎时可检测抗HBc-IgM抗体。发光免疫剖析CLIA:是将发光剖析跟免疫反响相联合而树破起来的一种检测微量抗原或抗体的新型标记免疫剖析技巧。兼有高敏锐性跟高特异性。发光:分子/原子中的电子接收能量后,由基态较低能级跃迁到激起态较高能级,而后再前往到基态,并施放光子的进程。化学发光:随同化学反响进程所发生的光的发射景象。发光效力:又称化学发光反响量子产率,是指发光剂在反响中的发光分子数与参加反响的分子数之比,取决于天生激起态产品分子的化学激起效力跟激起态分子的发射效力。化学发光免疫技巧
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