以含锰超氧化物歧化酶基因表达评价肉鸡对不同形态锰源的生物学利用率.docx

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1、第 33 卷 第 6 期2004 年 11 月卫 生 研 究J0URNAL 0F HYCIENE REsEARCHVo1 . 33 No. 6 Nov.2004 681=文章编号：1000-802（0 2004）06-0681-06论著.以含锰超氧化物歧化酶基因表达评价肉鸡对不同形态锰源的生物学利用率罗绪刚李素芬1刘彬卜友泉邝霞余顺祥中国农业科学院畜牧研究所，北京 100094达能营养中心DAN0NE INsTITUTE CHINA青年科学工作者论坛.Young scientists/ Forum摘要：目的 通过两个试验研究确定心肌细胞线粒体中 Mns0D 的基因表达指标是否能更快、更敏感、更

2、恒定地监测出肉仔鸡对不同形态锰源间生物学利用性的差异。方法 试验（一）将 546 只商品代 1 日龄 AA 肉公鸡按 4 x 4 两因子安排的完全随机设计分为 13 个处理组，每组 6 个重复笼，分别饲喂不添加锰的食用玉米- 豆粕型基础饲粮（对照组）或以无机硫酸锰、弱络合强度的蛋氨酸锰 E、中等络合强度的复合氨基酸锰 B 及强络合强度的复合氨基酸锰 C 形式添加 0、60、120、180mg/kg 锰的试验饲粮，试验期 21 天。21 日龄每个重复笼选取 3 只与平均体重相近的鸡屠宰，立即取出心脏、左侧腿跖骨，分析组织锰浓度、心肌细胞线粒体中Mns0D 活性及其基因表达。试验（二）将 270

3、只商品代 1 日龄 AA 肉公鸡随机分为 5 个处理组，每组 6 个重复 笼，分别饲喂不添加锰的食用玉米 - 豆粕型基础饲粮（对照组）及分别在对照组饲粮中添加 120mg/kg 锰的 4 种锰源试验饲粮。分别于第 7、14、21 日龄用与试验一相同的方法进行屠宰、组织样品的采集与制备及分析。结果 试验（一）中 21 日龄肉鸡的跖骨灰锰含量、心肌锰含量和心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性均受到饲粮添加锰水平的显著影响（ P = 0. 0001），根据这三项指标与饲粮添加锰进食量的多元线性回归斜率比法进行计算，不同络合强度有机锰源间及有机锰源与无机锰源间均无显著差异，而 21 日龄肉鸡心肌细胞线粒

4、体中Mns0D mRNA 水平受到添加锰源（ P 0. 10）和锰水平（ P = 0. 0001）的显著影响，以心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平为评价指标，弱、中等和强络合强度有机锰源相对于硫酸锰（如设为 100% ）的生物学利用率分别为 99% 、133% 和 113%。其中中等络合强度 Mn-AA B 的相对生物学利用率明显高于硫酸锰和弱、强络合强度有机锰源（ P 0. 05）。试验（二）中饲粮添加中等络合强度 Mn-AA B 组鸡 7 日龄时心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平就明显高于添加硫酸锰组和弱络合强度的 Mn-Met E 组（ P 0. 02），且在 14

5、日及 21 日龄恒定高于其它添加锰源组（ P 0. 05），而跖骨灰锰含量和心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性等指标则明显不如 Mns0D 基因表达指标敏感。结论 饲粮锰在转录水平上显著影响心肌细胞线粒体中 Mns0D 的基因表达；心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平早在雏鸡出壳后 7 天即可比其酶活性等所有其它指标更快、更敏感、更恒定地监测出肉鸡对不同形态锰源间生物学利用性的差异；有机锰源的络合强度与其对肉鸡的生物学利用率 间有密切相关，中等络合强度有机锰源的相对生物学利用率明显最高；采用基因表达这一功能性指标，可以 大大缩短试验期，减少试验动物数量，因而是未来研究锰源对鸡生物学活性

6、的新方法。关键词：含锰超氧化物歧化酶 基因表达 不同形态锰源 生物学利用率 肉鸡中图分类号：R155. 55 058 s831. 5 0554文献标识码：ABioavailabilities of manganese sources base4 on heart manganese.containing superoxi4e 4ismutase gene expression for broilersIuo xugang，Ii sufen，Iiu Bin，Bu Youquan，et al .Institute of Anima1 sciences，Chinese Academy of Agri

7、cu1tura1 sciences，Beijing 100094，ChinaAbstract：0bjective Two experiments were conducted to determine whether heart manganese-containing superoxide dismutase（ Mns0D） gene expression cou1d detect the differences in bioavai1abi1ities of Mn sources more quick1y， sensitive1y and constant1y than other ind

8、ices. Metho4s In experiment 1，a tota1 of 546 day-o1d commercia1 ma1e Arbor Acres（AA）broi1ers were random1y assign to each of thirteen treatments with six cage rep1icates according to a comp1ete1y基金项目：国家杰出青年科学基金（No . 39925028）；北京市自然科学基金（No . 6992022）作者简介：罗绪刚，博士后，博士生导师，研究员1 河北科技师范学院682卫生研究第 33 卷random

9、ized design involving a 4 4 factorial arrangement. Each group of birds was fed Mn-unsupplemented corn-soybean meal basal diets（Control）or basal diets supplemented with 60，120 or 180 mg/kg Mn as either Mn sulfate，Mn-Met E， Mn-AA B or Mn-AA C for 21days. At 21 day of age，three birds from each cage wer

10、e selected according to average bodyweight of the cage and ki1led. Heart and left leg were excised immediately. Mn concentrations in tissues，Mns0D activity and gene expression of Mns0D in heart were analyzed. In experiment 2，two hundreds and seventy day-old AA commercial male broilers were randomly

11、allotted to one of five treatments with six cage replicates in a completely randomized design，and fed a Mn-unsupplenented com-soybean meal basal diet（Control）or the basal diet supplemented with 120mg/kg Mn as each of the four Mn sources in experiment 1 for 21 days. The methods in experiment 1 were u

12、sed to select and slaughter birds from each cage on the 7th，14th or 21th day. The tissues were collected and analyzed as well. Results （1）In experiment 1，ash Mn content，heart Mn content，and Mns0D activity in heart mitochondria on the 21th day were affected（ P = 0. 0001）by dietary added Mn level. Bas

13、ed on slope ratios from multiple linear regressions of these three indices on dietary added Mn intake，the relative bioavailabilities of organic Mn sources did not differ from that of Mns04（ P 5 0. 14）. Heart Mos0D mRNA level on the 21th day was affected by both Mn source（ P 0. 10）and Mn level（ P = 0

14、. 0001）. Based on slope ratios from the multiple linear regression of heart Mns0D mRNA level on dietary added Mn intake，if 100% was set for Mn sulfate，the relative bioavailabilities of organic Mn sources with weak， moderate，and strong chelation strengths were 99. 0% ，132. 3% and 112. 7% ，respectivel

15、y . The organic Mn source with the moderate chelation strength was more available（ P 0. 05）than Mn sulfate and organic Mn sources with the weak or strong chelation strengths；（2）In experiment 2，the seven day- old chicks fed on the diet supplemented with the organic Mn source with the moderate chelati

16、on strength showed a higher（ P 0. 02）Mns0D mRNA level than those fed on the diets supplemented with Mn sulfate and the organic Mn source with the weak chelation strength，and the same tendency wasobserved on the 14 day or 21 da（y P 0. 05）. Ash Mn content and heart Mns0D activity were less sensitive i

17、n detectingthe differences among Mn sources in bioavailability than Mns0D mRNA level. Conclusion The results indicate that dietary Mn significantly affected heart Mns0D gene expression pretranslationally，and heart Mns0D mRNA level as early as on the 7th day could detect differences in bioavailabilit

18、ies of Mn sources more quickly，sensitively and constantly than all other indices. There was a close correlativity between chelation strengths of these organic Mn sources and their relative bioavailabilities for broilers，in which the organic Mn source with the moderate chelation strength was the most

19、 available. The estimation of relative bioavailabilities of Mn sources based on heart Mns0D mRNA level could request a shorter time of experimental period and smaller number of animals，and thus could be a new method for a quick and effective assessment in bioassays of Mn sources for broilers.Key wor

20、ds：Mns0D，gene expression，Mn sources，bioavailability，broilers近年来出现的有机锰源已受到畜禽饲料业的广泛关注。 但是，对有机锰源作用效果的研究报道间却存在很大差异1。 造成这些差异的原因可能主要与不同报道中所用有机锰源产 品的质量及评价指标不同有密切关系。前人在评价有机锰源 利用率时多以 21 日龄雏鸡骨灰锰含量为指标来评价的。而锰和其它微量元素一样，在动物体内主要是通过构成酶的必 需组分或激活因子而参与一系列重要生化反应，而酶蛋白的 合成受其基因表达的调控，其中转录水平上的调控是整个基 因表达调控的第一步，故用关键酶活性及其基因在转录

21、水平 上的表达状况可能比骨灰锰含量能更快、更敏感地反映出机 体锰营养状况的变化以及不同锰源间生物学利用率的差异。 目前已知 Mns0D 是动物体内最重要的含锰关键酶，本实验室的前期研究已发现心肌是肉鸡体内 Mns0D 活性反应的最敏 感部位，心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性是评价肉鸡锰营养状况及锰营养需要量的特异性敏感指标2；并对肉鸡心肌细胞线粒体中 Mns0D 基因进行了克隆及测序研究，获得了鸡Mns0D cDNA 全序列3，并已在国际权威的 GenBank 中注册（注册号为 AF329270），为进一步研究心肌细胞线粒体中Mns0D 的基因表达奠定了基础。但是，关于能否用心肌细胞线粒体中

22、 Mns0D 活性来评价肉鸡等动物对不同锰源的生物学利用率，锰是否在转录水平上影响肉鸡心肌细胞线粒体中Mns0D 的基因表达，以及含锰关键酶 Mns0D 基因表达这一分子生物学指标是否能更快、更敏感地反映肉鸡对不同形态锰 源间生物学利用性的差异，在国内外现有文献中均尚未见报 道。因此，本研究旨在探讨饲粮锰是否能在转录水平上影响 心肌细胞线粒体中 Mns0D 的基因表达，心肌细胞线粒体中Mns0D 活性及其基因表达功能性指标是否比骨灰锰含量能更快、更敏感地监测出肉鸡对不同形态锰源间生物学利用率 的差异，以及有机锰源产品络合强度与其在肉鸡体内生物学 利用率之间的相关性，从而为肉鸡生产中科学研制开发

23、和应 用适宜络合强度的新型高效有机锰源添加剂提供科学的试验 依据。l 材料与方法l. l 动物和饲粮及样品制备l. l. l 试验（一） 依据 Holwerda 等提出的有机微量元素络合强度的测定及划分方法4，络合强度低于 10 的为弱络合强度，络合强度介于 10 100 的为中等络合强度，络合强度介于100 1000 的为强络合强度，本实验室测得的 Mn-Met E、Mn- AA B 及 Mn-AA C 的络合强度分别为 3. 2、45. 3 和 115. 4，分别属于弱、中等和强络合强度有机锰源。采用 4 4 两因子安排第 6 期罗绪刚，等. 以含锰超氧化物歧化酶基因表达评价肉鸡对不同形态

24、锰源的生物学利用率683的完全随机设计，4 种锰源分别为硫酸锰、弱络合强度蛋氨酸锰 E（Mn-Met E）、中等络合强度复合氨基酸锰 B（Mn-AA B）及强络合强度复合氨基酸锰 C（Mn-AA C），4 个添加锰水平分别为 0、60、120、180mg/kg，共组成 13 个处理组，其中 4 种锰源共用一个 0 添加锰水平的食用玉米-豆粕型基础饲粮（基础饲粮组成见表 1）对照组。将 546 只 1 日龄商品代 AA 肉公鸡随机分成 13 组，每组 6 个不锈钢镀塑笼饲养，每笼 7 只，分别饲喂试验处理安排中的一种饲粮。参照美国 NRC 家禽营养需要量中肉仔鸡的相应营养建议量而配制基础饲粮（基

25、础饲粮营养水平见表 2）5，通过添加合成赖氨酸和蛋氨酸来平衡所有处理组饲粮中的赖氨酸和蛋氨酸含量至同一水平。鸡均按AA 肉鸡饲养管理手册进行饲养管理，每周末以重复笼为单元称鸡空腹体重和耗料 量，并统计腿病发生率。21 日龄每个重复笼选取 3 只与平均体重相近的鸡屠宰，立即取出心脏、左侧腿跖骨。部分心脏（约 0. 2 克）液氮冻存， 以备分析心肌细胞 Mns0D mRNA 水平，其余心脏 - 20冻存，以备分析心肌锰含量和心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性。跖骨- 20冻存。将跖骨先用去离子水冲洗干净后，煮沸，剥除外层附着物，再用去离子水冲洗干净，于 600 下灰化至恒重，制备跖骨灰。每个重复笼

26、屠宰的 3 只鸡的组织合并为一个样品进行分析。配合试验饲粮时现场采样，研磨过 200 目筛后置于塑料瓶中低温保存以备分析。1. 1. 2 试验（二） 采用完全随机设计，试验处理为不添加锰的实用玉米- 豆粕型基础饲粮（见表 1）对照组及分别在对照组饲粮中添加 120mg/kg 锰的 4 种锰源处理组（所用 4 种锰源同于试验一），共 5 个处理组。将 270 只商品代 1 日龄 AA 肉公鸡随机分为 5 个处理组，每组分 6 个不锈钢镀塑笼饲养，每笼 9 只鸡，分别饲喂试验处理安排中的一种饲粮。基础饲粮组成及营养水平见表 1 和表 2。饲养管理方法同于试验（一）。分别于第 7、14、21 日龄从

27、每个重复笼抽取 3 只与平均体重相近的试鸡屠宰，按试验（一）中所述方法采集 和制备分析样品。表 1 肉鸡基础饲粮组成Table 1 Composition of basal diet for broilers%试验玉米豆粕进口鱼粉大豆油磷酸氢钙（1）碳酸钙（1）氯化钠（1）蛋氨酸微量成分（2）试验一52.3337.004.003.401.351.150.300.200.27试验二54.5435.003.503.401.601.150.300.200.31注：（1）试验一中为饲料级，试验二中为分析纯；（2）每千克饲粮中添加：VA 15000IU，VD3 3900IU，VE 30IU，VK3 3m

28、g，VB1 2.4mg，VB2 9mg，B6 4.5mg，B12 0.021mg，泛酸钙 30mg，尼克酸 45mg，叶酸 1.2mg，生物素 0.18mg，胆碱 700mg，Cu（Cus045H2 0）8mg，Zn（Zns047H2 0）40mg，Fe（Fes047H2 0）80mg，I（KI）0.35mg，se（Na2 se03 ）0.15mg表 2 肉鸡基础饲粮营养水平Table 2 Nutrient level of basal diet for broilers%（MJ/kg）（%）（%）（%）（%）（%）（%）（mg/kg）试验一12.4723.091.220.580.921.17

29、0.4723.00试验二12.5123.701.150.560.901.070.4515.87营养指标代谢能粗蛋白（1）赖氨酸蛋氨酸蛋氨酸 胱氨酸钙（1）非植酸磷锰（1）注：（1）实测值1.2 2 样品分析饲粮、跖骨灰及心肌均用浓硝酸和高氯酸湿消化后，用ICAP-9000 等离子体发射光谱仪分析其中的含锰量。称取心脏 0. 4000g 两份，加 4m1 生理盐水在冰水浴中匀浆5min 后，用超声波细胞破碎仪处理 1min，4 离心机中 3000r/ min 离心 15min。取上清液用去离子水做 50 倍稀释后，用亚硝酸盐形成法测定心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性6。用 Trizo1 试剂一

30、步抽提法提取心肌细胞中的总 RNA。用U1trospec紫外- 可见分光光度计测其 a260 、a280 ，其 a260 ：a280 比值均在 1. 8 以上。用 0. 8% 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测总 RNA 的完整性。按照 superscriptTM First-strand synthesis system for RT-PCR 试剂盒（购自 CIBC0 公司）使用说明，合成cDNA 模板。扩增引物设计合成由上海生物工程公司完成。引物序列分别为：Mns0D primer：upper：5/-CACTCTTCCTCACCTCCCTTAC-3/， 1ower：5/-TACACCTCCCTCC

31、TCCTTATTA-3/；-actin primer：upper：5/-CACCTACCTTCCTCATCAACCC-3/， 1ower：5/-CAACAAACATCCCTCCAACACC-3/。扩增产物长度分别为 400bp 和 648bp。扩增条件为：94变性 3min，94，1min58，45s72，1min，完成 20 个循环后，72延伸 10min。反应产物经 1. 2% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色后，用 A1phaImagerTM 2200 & 1220 凝胶成像系统扫描成像，并对电泳条带进行光密度定量，心 肌细胞线粒体中Mns0D mRNA 水平以同一体系中 Mns0D 与-act

32、in 条带灰度的相对比值（ R）来表示。每个样品重复进行两次反转录和PCR 反应，以两次 PCR 反应的凝胶电泳分析结果的平均值作为该样品的观察值进行统计分析。1.3 3 数据统计分析用 sAs 6. 0（3 1998）软件中 CIM 程序对试验数据进行方差分析7，差异显著者，以 IsD 法比较平均数间的差异显著性；以多元线性回归斜率比法计算有机锰源相对于硫酸锰的生物学利用率7。以差异显著性检验水平 0. 10 为本研究中各项数据的差异显著性检验水平8。2 结果2.1 1 添加锰源及锰水平对 21 日龄肉鸡组织锰含量、心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性及其基因表达的影响添加锰源、锰水平及锰源与

33、锰水平互相作用对肉鸡生长684卫生研究第 33 卷性能及腿病发生率均无显著影响。由于本次研究和所有其它 研究报道均表明，鸡的生长性能及腿病发生率均不是评价鸡机锰源相对于硫酸锰（设为 100%）的生物学利用率分别为95% 、96% 和 93% ；以心肌锰含量（y ，g/g 鲜样）为指标拟合的锰营养状况和对不同锰源生物学活性差异的特异性敏感指多元线性回归方程为：y= 0. 5769 0. 0224 x1 0. 0250 x2 标。0. 0288 x3 0. 0255 x（4 P = 0. 0001，R2 = 0. 8049），弱、中等及强由表 3 可见，跖骨灰锰含量、心肌锰含量和心肌细胞线粒体中

34、Mns0D 活性均未受到添加锰源及锰源与锰水平互相作用的影响，但受到添加锰水平的显著影响（ P = 0. 0001）。以络合强度有机锰源相对于硫酸锰（设为 100%）的生物学利用率分别 110% 、127% 和 114% ；以心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性（y ，NU/g 鲜样）为指标拟合的多元线性回归方程为：y =x1 、x2 、x3 和 x4 代表添加 Mns04H2 0、Mn-Met E、Mn-AA B 和1167 25. 66 x1 24. 91 x2 33. 06 x3 28. 70 x（4P = 0. 0001，R2Mn-AA C 处理组的饲粮添加锰进食量mg（/只日），则以跖

35、= 0. 6732），弱、中等和强络合强度有机锰源相对于硫酸锰（设骨灰锰含量（y ，g/g 骨灰）为指标拟合的多元线性回归方程为 100%）的生物学利用率分别为 97% 、129% 和 112% ，有机为：y= 6. 6332 0. 7836 x1 0. 7419 x2 0. 7501 x3 锰源间及有机锰源与无机锰源间均无明显差异（ P 5 0. 14）。0. 7239 x（4P = 0. 0001，R2 = 0. 8881），弱、中等及强络合强度有表 3 添加锰源及锰水平对 21 日龄肉鸡组织锰含量、心肌细胞线粒体 Mns0D 活性及 Mns0D mRNA 水平的影响（试验一）添加锰源添加

36、锰水平（mg/kg）骨灰锰（g/g）心肌锰（g/g）Mns0D 活性（NU/g）Mns0D mRNA（ R）对照组05.51 + 0.600.535 + 0.0381054 + 320.955 + 0.030Mns04H2 0609.02 + 0.440.698 + 0.0201253 + 441.047 + 0.04612011.17 + 0.890.702 + 0.0131322 + 471.096 + 0.07018012.63 + 0.910.728 + 0.0241364 + 581.195 + 0.036Mn-Met E（弱）608.77 + 0.480.682 + 0.05512

37、71 + 561.036 + 0.03412011.13 + 0.960.714 + 0.0701270 +1021.089 + 0.08018012.12 + 1.050.760 + 0.0431373 + 561.198 + 0.127Mn-AA B（中）609.11 + 0.250.732 + 0.0421306 + 931.096 + 0.07712010.68 + 0.780.733 + 0.0451350 +1051.117 + 0.07718012.49 + 0.660.783 + 0.0441413 + 581.325 + 0.083Mn-AA C（强）608.95 + 0.6

38、60.699 + 0.0811307 + 591.051 + 0.08512010.03 + 0.770.730 + 0.0561334 + 571.138 + 0.08218012.63 + 1.050.752 + 0.0421370 + 531.164 + 0.031Mns04H2 09.58 + 2.880.666 + 0.0811248 +1291.075 + 0.101（2）添加锰源Mn-Met E（弱）9.40 + 2.690.673 + 0.1031241 +1341.070 + 0.108（2）Mn-AA B（中）9.46 + 2.660.695 + 0.1051280 +15

39、71.123 + 0.104（1）Mn-AA C（强）9.32 + 2.600.679 + 0.0981266 +1361.077 + 0.084（2）添加锰水平05.51 + 0.60（4）0.535 + 0.038（3）1054 + 32（4）0.955 + 0.030（4）608.96 + 0.46（3）0.703 + 0.054（2）1284 + 70（3）1.057 + 0.062（3）12010.75 + 0.92（2）0.720 + 0.050（2）1319 + 78（2）1.110 + 0.072（2）18012.47 + 0.89（1）0.756 + 0.042（1）1380

40、 + 55（1）1.222 + 0.057（1）P 值锰源0.64680.15890.12840.0996锰水平0.00010.00010.00010.0001锰源 锰水平0.35730.89290.78510.3766Tab1e 3 Effect of dietary Manganese source and 1eve1 on tissue manganese content，heart Mns0D activity and Mns0D mRNA 1eve1 in broi1ers at 21 day（Experiment 1）（ S，T = 6）注：（1），（2），（3），（4）同一列中具

41、有不同上标的数值间差异显著（ P 0.07）21 日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平的凝胶电泳图见图 1。心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平未受到添加锰源与锰水平互相作用的显著影响，但受到添加锰水平的影响（ P = 0. 0001）。添加锰源对 21 日龄肉鸡心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平有显著影响（ P 0. 10）。以心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平（ y ，鲜样）为指标拟合的多0. 05），强络合强度 Mn-AA C 也有高于硫酸锰和弱络合强度 Mn-Met E 的趋势，但弱络合强度 Mn-Met E 与硫酸锰间很接近。2.2 2

42、不同形态锰源及锰水平对不同日龄肉鸡组织锰含量、心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性及其基因表达的影响不同处理组间肉仔鸡生长性能无显著差异。元线性回归方程为：y= 0. 9619 0. 0294 x1 0. 0288 x2 由于试验一的结果已表明，只有心肌细胞线粒体中0. 0386 x3 0. 0328 x（ P = 0. 0001，R2 = 0. 7071），弱、中等和强Mns0D mRNA 水平这一基因表达功能性指标才能敏感地监测4络合强度有机锰源相对于硫酸锰（设为 100%）的生物学利用率分别为 99% 、132% 和 113% ，其中中等络合强度 Mn-AA B 的生物学利用率明显高于硫酸

43、锰与其它两种有机锰源（ P 出 21 日龄肉仔鸡对不同形态锰源间生物学利用率的明显差异，故试验二的主要目的是进一步研究肉鸡心肌细胞线粒体 中 Mns0D mRNA 水平这一基因表达功能性指标是否还能更第 6 期罗绪刚，等. 以含锰超氧化物歧化酶基因表达评价肉鸡对不同形态锰源的生物学利用率685早、更快、更敏感、更恒定地监测出肉仔鸡对不同锰源间生物 学利用性的差异。各日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平的凝胶电泳图见图 2。由表 4 可见，添加锰水平显著影响各日龄肉鸡跖骨灰锰含量（ P = 0. 0001）、心肌细胞线粒体中 Mns0D活性（ P 0. 01）、心肌锰含量（ P

44、 0. 01）和心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平（ P 0. 01），其中未添加锰的对照组鸡上述四指标均明显低于各添加锰源组鸡（ P 0. 06），但各添加锰源组间跖骨灰锰含量和心肌细胞线粒体中 Mns0D 活性无显著差异。第 1 泳道：对照组。第 2、7、12 泳道：分别为以 Mns04 形式添加 60、120 或 180 mg/kg 锰组肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平； 第 3 、8、13 泳道：分别为以 Mn-Met E 形式添加 60、120 或 180 mg/kg 锰组肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平； 第 4、9 、14 泳道：分别为以

45、 Mn-AA B 形式添加 60、120 或 180 mg/kg 锰组肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平；第 6、11、16 泳道：分别为以 Mn-AA C 形式添加 60、120 或 180 mg/kg 锰组肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平；图 1 不同形态锰对 21 日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体中 Mns0D mRNA 水平的影响Fig. 1 Effect of different Manganese source and 【ele【 on heart Mns0D mRNA 【ele【 in broi【ers at 21 day第 1 泳道：对照组；第 2 _ 5 泳道：以 Mns04 、Mn-Met E、Mn-AA B、Mn-AA C 形式添加 120mg/kg 锰组7 日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平；第 6 _ 10 泳道：以 Mns04 、Mn-Met E、Mn-AA B、Mn-AA C 形式添加 120mg/kg 锰组 14 日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平； 第 11 _ 15 泳道：以 Mns04 、Mn-Met E、Mn-AA B、Mn-AA C 形式添加 180mg/kg 锰组 21 日龄肉仔鸡心肌细胞线粒体 Mns0D mRNA 水平。图 2 不同形态锰对不同周