营养水平对妊娠早期母猪免疫状况及胚胎存活的影响.docx

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1、畜牧兽医学报 2009,40(6) ：846 854Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica营养水平对妊娠早期母猪免疫状况及胚胎存活的影响李勇，吴德收糖日期：2008-04-21基金项目：教育部创新团队计划(IRT0555)；国家自然科学基金(30471257)作者简介:李 勇(1981-),男，四川自贡人，硕士，主要从事动物营养与饲料科学研究，E-mail：liyongl9810202yahoo. com. cn 通讯作者：吴E-mail：pig2pigsina. com，郭海燕，郑爱荣，张果(四川农业大学动物营养研究所教育部动物抗病营养重点实验室，雅安6

2、25014)摘 要：选用63头长白X大白杂交初产母猪，研究营养水平对初产母猪妊娠早期血清免疫球蛋白、子宫和胚胎干 扰素-a(IFN-a)、干扰素-p(IFN-|3)、干扰素-y(IFN)、抗病毒蛋白(Mxl) .Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-10(IL- 10)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)mRNA表达及胚胎存活的影响。将配种后的母猪随机分到高、中、低3个营养水平组 (采食量水平分别为2. 73.1.64和0. 82 kg(T】)。在妊娠第12.25和35天屠宰母猪收集血清、子宫组织及胚胎， 利用免疫散射比浊法测定血清免疫球蛋白含量，利用实时荧光定量RT-PCR方法检测目的基因在

3、子宫和胚胎中的 表达量。结果表明：高、中营养水平组母猪血清免疫球蛋白含量显著高于低营养水平组(PV0.05),高、中水平组 间差异不显著(P0. 05)；中水平组IFN-aJFN-pJFN-y,MxkTLR4jL-10在子宫和胚胎中的基因表达量显著 高于低水平组(P0.05),但低水平组TNF-a基因表达量显著高于中水平组(P0. 05)；妊娠第12天，中水平组胚胎存活率显著高于高水平组(P0. 05)；妊娠第25和35天，中水平组胚胎存活率显著高于高、低水平组(PV0. 05),高、低水平组间差异不显著(P 0. 05) o结论，高、中营养水平有利于妊娠早期母体对胚胎的免疫保护,严重限饲则显

4、著降低母猪体液免疫水平， 并下调子宫和胚胎中免疫相关基因表达，从而减弱母体对胚胎的免疫保护作用，不利于胚胎存活。关键词：营养水平;初产母猪扌胚胎存活，免疫相关基因；体液免疫中图分类号；S828；S815.4文献标识码：A文章编号：0366-6964(2009)06084609Effects of Feed Intake Level on the Immunity States andEmbryonic Survival during Early Pregnancy in GiltsLI Yong, WU De* ,GUO Hai-yan, ZHENG Ai-rong, ZHANG Guo(Ke

5、y Laboratory for Animal Disease Resistance Nutrition of the Ministry of Education ofChina, Institute of Animal Nutrition , Sichuan Agricultural University , Ya an 625014, China)Abstract: Sixty three crossbred gilts (Landrace X Yorkshire) were used to investigate the effects of feed intake level on m

6、aternal immunoglobulins concentration in serum and interferon-a (IFN- a), interferon-p(IFN-p), interferon-y(IFN-y), myxo-virus resistance(Mxl) , Toll-like receptor 4 (TLR4), interleukin-10 (IL-10), tumor necrosis factor-a (TNF-a ) mRNA expression in uterus and embryonic survival during early pregnan

7、cy. The gilts were randomly allocated into three feed intake levels (High(H) : 2. 73 kg cT】；Medium(M) : 1. 64 kg d_1 ；Low(L): 0. 82 kg , d_1) after mating. Gilts were slaughtered on dl2, 25 and 35 o pregnancy, serumf uterus and embryos were collected. The maternal immunoglobulin concentration in ser

8、um was determined by Nephelometry, and real time-quantitative RT-PCR was applied to determine the genes expression difference in uterus and embryos. The results showed：Maternal immunoglobulins concentrations in serum were higher in H and M than that in L (FV0 05) and no significant difference betwee

9、n H and M groups (P0. 05).IFN-a, IFN-p, IFN-y, Mxl, TLR4 and IL-10 genes expression in u- terus and embryo were increased in M group compared to that in L group(P0. 05). Embryonic survival rate on dl2 were higher in M group than that in H group (PVO. 05) and no significant difference between M and L

10、 groups (F 0. 05), and embryonic survival rate on d25, 35 were elevated in M group and no significant difference between H and L groups (P0. 05). It was concluded that high and medium feed intake levels improved the maternal and embryonic immunoprotection during early pregnancy,low feed intake level

11、 significantly decreased the maternal immunoglobulins and down regulated the expression of immune-related genes in uterus and embryos and may had detrimental effects on the survival of embryo.Key words: feed intake level；gilt；embryonic survival；immune-related gene;humoral immunity母猪妊娠早期约有30%50%的胚胎损失

12、， 给养猪生产带来巨大的经济损失。早期胚胎存活有 赖于母猪的免疫状况和胚胎附植及发育过程中的局 部免疫保护环境。免疫相关基因IFNp、IFN-B、 IFN-t、Mxl、TLR4、IL-10、TNF-a 在人和动物妊娠 早期的子宫内膜、胚胎或胎盘等组织均有表达，它们 除参与各种免疫反应外，还可能在调节或维护对胚 胎存活有利的免疫保护的过程中发挥重要作用。营 养调控技术是提高早期胚胎存活率的重要途径之 一。研究表明，妊娠早期给予母猪适宜的营养水 平有利于胚胎存活，过度饲养和严重限饲均会导 致早期胚胎存活率降低。进步研究发现，营养 水平影响母体血液中激素分泌,一些代谢激素（如瘦 素和孕酮）分泌过高或

13、过低均对胚胎发育不利可。 然而，营养水平能否通过影响母猪的免疫状况进而 影响胚胎存活，有待深入研究。因此,本试验考察不 同营养水平对妊娠早期母猪体液免疫、子宫和胚胎 中免疫相关基因mRNA表达以及胚胎存活的影响， 从免疫角度探讨营养影响早期胚胎存活的可能机 理，以求为初产母猪妊娠早期合理饲养、提高胚胎存 活率提供指导。1材料与方法1.1试验设计釆用单因子试验设计，母猪按体质量随机分到 高、中、低3个营养水平组（采食量分别为2. 73、 1.64和0. 82 kg d1）中，即通过维持需要的2倍、 1.2倍、0.6倍确定母猪每天不同水平的釆食量，维 持需要的采食量由维持需要的消化能和每千克饲粮

14、消化能含量之比确定。维持需要的消化能计算公式 为：DEm=460 （MJ kgT）X BW075,其中,BW = 配种时体质量+ 1/2妊娠预期体增质量，妊娠期预 期体增质量为45 kg。试验母猪饲喂同种饲粮 （表 1）。表1试验饲粮组成及营养水平Table 1 Composition and nutrient level of experimental diets原料 Ingredient含量/% Content营养指标 Nutrition index营养水平 Nutrient level玉米Corn70. 00消化能 DE/(MJ kg1)13.38豆粕 Soybean meal11.20

15、粗蛋白CP/%13.10麦埶 Wheat bran14. 40赖氨酸Lys/%0. 60鱼粉 Fish meal1.60蛋氨酸Met/%0. 20磷酸氢钙CaHPO,1.10钙 Ca/%0.75碳酸钙CaCO30.16磷P/%0. 60食盐Salt0. 40有效磷AP/%0.37氯化胆碱 Chline chloride0.10粗纤维CF/%3.30多维Vitamin premix0. 04矿添11 Mineral premix1.00合计Total100.00a. The vitamin premix per kg include； VA 4 000 IU, VD3 200 lU, VE 44

16、 IU, VK 0. 000 5 mg,VB】1 mg, VB2 3. 75 mg, VBi20. 015 mg * niacin 10 mg, pantothenic acid 12 mg*olacin 1. 3 mg； b. The mineral premix per kg include： Fe 8 g,Cu 0. 5 g,Zn 5 g.Mn 2 g,Se 0. 015 g,I 0. 014 g1.2试验动物处理选取血源相同、日龄和体质量相近的长白X大 白二元杂交初产母猪63头，母猪第3个情期出现 “静立反射”后12 h实施人工授精，配种后试验猪按 体质量随机分到3个采食水平组，每组2

17、1头母猪, 按常规饲养方式进行管理。母猪分别在妊娠第12、 25和35天时屠宰，共计屠宰46头(63头中有5头 疾病,7头未能配种,5头体质量不符合要求被淘汰， 每个处理和水平的具体屠宰头数见表3)。1.3样品采集及测定方法1.3.1血样收集及血清免疫球蛋白含量测定分 别在母猪妊娠第12、25和35天时，早08：00由前腔 静脉取血10 mL于离心管中，静置10 min后，离心 (3 000 r min-1,20 min),收取血清，一20 笆冰箱 保存待测。血清中免疫球蛋白含量采用免疫散射比 浊法测定(Nephelometry, Behring Nephelometer 100 Analyz

18、er)。1.3.2子宫组织和胚胎样品釆集 妊娠12 d组， 每侧子宫用100 mL PBS分3次冲洗，收集胚胎，在 距离子宫颈连接处2. 5-3. 5 cm沿子宫系膜背侧纵 向切开子宫角壁，剪取子宫角处的子宫组织；妊娠 25,35 d组，同妊娠12 d组的方法切开子宫角壁，将 胚胎从胎膜内取出后剪取子宫组织，计算胚胎存活 率(存活胚胎占黄体总数的百分比)。随后将子宫和 胚胎样品转入一80 C冰箱保存待侧。1.3.3总RNA的提取和cDNA的合成 子宫组 织和胚胎总RNA的提取按试剂盒说明操作。用无 RNase的DNase I处理,消除总RNA中痕量DNA 的污染，核酸蛋白检测仪检测RNA的浓度

19、和纯度。 采用10必 反转录反应体系：5X Prime scriptTM Buffer 2 卩L、Prime scriptTMRT Enzyme Mix I 0. 5 ptL、Oligo dT Primer(50 ptmol , L1) 0. 5 ptL、 Random 6 mers (100 卩mol L_1) 0. 5 卩L、Total RNA 4 RNase Free dH2O 2. 5 MLO 反转录反 应参数：37 C 15 min,85 C 5 s0反应结束后立即 进行PCR反应或一20 C保存备用。1.3.4 Real-time PCR反应 实时荧光定量PCR 釆用 25 pL

20、的反应体系:TaKaRa SYBR Premix Ex TaqTM (2 X ) 12.5 ML, 、下游引物各(10 ptmol , L_1 )0. 5 fzL, cDNA 模板 2 “L, ddH2 O 9. 5 mL0 利用 NCBI 在线资源,Primer5. 0 与 Oligo6. 0 进行引物设计，由Invitrogen公司合成，引物序列见 表2。反应程序：95C预变性lmin；95P变性5 s, 退火温度退火30 s,72 C 30 s,共40个循环。融解 曲线用于确定扩增产物的特异性，融解曲线反应程 序：95 C 0 s；50 C 30 s；95 C 0 s(温度变化速率为 0

21、. 5 C sT)。H2A为内参基因。表 2 Mxl、TLR4、IFN-a、IFN-p、IFN-Y、IL-10、TNF-a 和 H2A 的引物序列Table 2 Primers used for Real-time PCR of Mxl, TLR4, IFN-a, IFN-p, IFN-丫，IL-10,TNF-a and H 2A目的基因引物序列(5-3)扩增片段大小/bp基因库编号GenePrimer sequenceSize of amplified fragmentGenBank accession numberMxlF： GTGGACCCCGAAGGAGACAR： GCCCCTGCAC

22、TTGACAATC144M65087IFN-aF： GGCTCTGGTGCATGAGATGR： GGTCCCTGAGCTGCTGATC125M28623IFN-pF： TACCAACAAAGGAGCAGCAATR： GCATCTCGTGGATAATCAATAC166S41178TLR4F： ACAACATCCCCACATCAGTCAR: AAAAGGCTCCCAGGGCTAAAC219AJ628O65IFN-yF： CAGAGCCAAATTGTCTCCTTCR： TTCAGTTTCCCAGAGCTACCA134S63968IL-10F： AAATCTGCTCCAAGGTTCCR： CACAGA

23、GAGGCTCGGTAAATA130L20001TNF-aF: ACTCACCCCTCCCTCTTTGTR： GCTGATGGTGTGAGTGAGGA224AT572787H2AF： GTGGCAAACAAGGAGGAAAGR： ATGCGGGTCTTCTTGTTGTC226BP4596331.4数据处理与分析每个处理(高、中、低)每个阶段(12,25,35 d)所 有屠宰母猪的血清免疫球蛋白含量和胚胎存活率全 部进行统计分析，目的基因的相对表达量用2-s 值方法计算，每个处理和每个阶段至少重复3次;数 据采用SPSSU.0统计软件进行方差分析(ANO- VA),并用Duncan法进行多重比较

24、。试验结果用 平均数士标准差表示。2结果的影响由表3可知，营养水平显著影响胚胎存活率和 母猪血清免疫球蛋白含量。妊娠12 d,中水平组胚 胎存活率显著高于高水平组(P0. 05)?妊娠25和35 d,中水 平组胚胎存活率显著高于高、低水平组(PV0. 05), 高、低水平组间差异不显著(P0. 05) 0妊娠12、25 和35 d,高、中水平组母猪血清免疫球蛋白含量显著 (FV0. 05)或极显著(P 0. 01)高于低水平组，高、 中水平组间差异不显著。2.1营养水平对胚胎存活率和血清免疫球蛋白含衰3营养水平对胚胎存活率和血清中免疫球簣白含的影响Table 3 Effects of feed

25、 intake levels on embryo survival and immunoglobulin concentration in serum妊娠时间/d高营养水平中营养水平低营养水平Days of pregnancyHigh nutrition level Medium nutrition level Low nutrition level屠宰母猪数/头Number of sows slaughtered125542556535655胚胎存活率/%Embryonic survival rate1270. ll10.89b84.343.90*74.535.65“2565. 20土 11

26、. 531180. 239. 92162. 389. 85b3562.766.3砂78.4510.10,62.319.62bIgG/(g L-1)1214.600. 98-15.250.41*12.440.75Bb2514.410. 69a14.63土0.65*12.240.69B3514.850.80A15.410.61A7.940.66BIgA/(g. L-1)122. 050. 092.160. 48a1, 280.27b251.990. 18a2.200. 22a1.230.12b352.030.19A2.160.15A0.930.12BIgM/(g- L-1)123.080. lla

27、2.970,45*2. 330.29b252. 910.16*2. 950. 22*2. 200. 35b352.930. 12A3.050.32A1.390.37B同行肩标不同小写字母表示差异显著(P0. 05),不同大写字母表示差异极显著(P0.01),下同Means with different small letters in the same line are significant (PV0. 05) , with different capital letters are extremely significant (PV0. 01) the same as below2.2营养

28、水平对子宫和胚胎Mxl、TLR4、IFN-a、 IFN-IJ、IFN-yJL-10、TNF-a 基因表达的影响由表4和表5可知，子宫和胚胎Mxl基因的相 对表达量在妊娠12,25 d,中水平组显著高于低水平 组(PV0.05),妊娠25 d时，高水平组胚胎Mxl基 因表达量显著高于低水平组(FV0. 05),妊娠35 d, 高、中水平组显著高于低水平组(PV0. 05)；IFN-a 基因的相对表达量在妊娠12 d,中水平组显著高于 低水平组(PV0. 05),同时高水平组子宫IFN-a基 因表达量也显著高于低水平组(P0. 05)，妊娠25、 35 d,高、中水平组极显著高于低水平组(P 0.

29、01),并且在妊娠25 d时，中水平组子宫IFN-a基 因表达量显著高于高水平组(P0. O5)；IFN-(3基因 相对表达量在妊娠12 d,中水平组显著高于低水平 组(FV0. 05),同时高水平组胚胎IFN屮基因表达 量也显著高于低水平组(FV0. 05),妊娠25 d,高、 中水平组显著高于低水平组(FV0.05),妊娠35 d, 高、中水平组极显著高于低水平组(PV0.01);TLR4基因相对表达量在妊娠12 d,中水平组显著 高于低水平组(P0. 05),妊娠25,35 d,高、中水平 组显著高于低水平组(FV0. 05)；子宫IFN-y基因 相对表达量在妊娠12,25 d,中水平组

30、显著高于低水 平组(P0. 05),妊娠35 d,高、中水平组极显著高 于低水平组(FV0.01),而胚胎IFN-y基因相对表 达量在妊娠12,25和35 d,高、中水平组显著高于低 水平组(P0. 05);IL-10基因相对表达量在妊娠 12 d,中水平组显著高于低水平组(PV0. 05),同时 高水平组胚胎IL-10基因表达量也显著高于低水平 组(PV0.05),妊娠25,35 d,高、中水平组显著高于 低水平组(P0. 05),并且在妊娠35 d,中水平组子 宫IL-10基因表达量显著高于高水平组(PV 0. 05)。TNF-a基因相对表达量在妊娠12、25和35 d, 低水平组显著高于

31、中水平组(P0. 05),同时在妊 娠35 d时,高水平组子宫TNF-a基因表达量也显 著高于中水平组(P0. 05).表4 营养水平对子宫MxkTLR4JFN-aJFN-pjFN-yJL-10和TNF-a mRNA表达的影响Table 4 Effects of feed intake levels on Mxl, TLR4, IFN-a, IFN-p, IFN-y, IL-10 and TNF-a mRNA expression in uterus妊娠时间/dDays of pregnancy高营养水平High nutrition level中营养水平Medium nutrition lev

32、el低营养水平Low nutrition level121.000. 101. 170. 16a0. 850.12bMxl250. 980.071.120. 09*0. 780. 20b350. 95 0. 10A1.080. 15a0. 54 0. 06B121.000. 08a1.200. 090. 75 士 0.15*IFN-a250. 990.08Ab1.160. 05心0. 680.12B350. 950.18A1.130. 03A0. 230. 02B121.000.081.190.10a0. 920. llbIFN-p250.990. 05a1.150. ll0. 740.11B

33、k351. 030. 23A1. 100, 10A0.290.02B121.000, 051.090. 09*0. 890.09bTLR425i.o3o.ir1.080.030.730.14削350. 97O. 07A1. ll0.07A0. 490.05B121.000.141. 190. 02*0.930.09bIFN-y250,970.101. 100.04a0. 82 土 0.09B350. 920.15A1.080. 18A0.440.05B121.000. 060. 860.12B1.14 士 0. 06ATNF-a250. 990.150.790. 08bl.ll0.17-351

34、.000. 050. 720.18b1.040.13a121,01+0. 161. 130. 1480. 820.07bIL-10250. 970. 12A1. ll0. 06a0. 680.05b350. 940. 08Ab1.060. 02Aa0. 310,03b3讨论3.1营养水平对妊娠早期初产母猪血清免疫球蛋 白含的影响本研究发现，低营养水平组母猪血清免疫球蛋 白含量显著下降，表明严重限饲可能损害了母猪的 体液免疫功能。这与Franci等的研究结果一致, 限饲会抑制B淋巴细胞分化，而B淋巴细胞可生成 各种免疫球蛋白，介导体液免疫。在附植过程中，胚 胎抗原性对妊娠母体的刺激可能提高了母体

35、的免疫 功能，以使妊娠母体能够抵抗外源不利因素的影 响故严重限饲可能引起母猪体液免疫功能下降 而不利于胚胎存活。高、中营养水平组母猪的体液 免疫状况可能有利于母体对胚胎的免疫保护。据报 道口七在鼠胚胎的每道防线上，膜抗原脱落的发生 要通过与母体免疫球蛋白的相互作用来实现。膜抗 原脱落释放的抗原-抗体复合物可抑制母体淋巴细 胞反应性，也可与胚胎滋养层细胞上的丙种球蛋白表5营养水平对胚胎MxkTLR4JFN-a3FN-pjFN-yJL-10和TNF-a mRNA表达的影响Table 5 Effects of feed intake levels on Mxl, TLR4, IFN-a, IFN-f

36、, IFN-y, IL-10 and TNF-a mRNA expression in embryo妊娠时间/dDays of pregnancy高营养水平High nutrition level中营养水平Medium nutrition level低营养水平Low nutrition level121.000. 051.080. 07a0. 940. 05bMxl251.020.08*1.080. 09*0. 820. 08m351.040. 21a1. 120. 0910. 720. 03b121.000.121.060. 09fl0. 84 0.12kIFN-a251.020. 05A1

37、.090. 08A0. 750.09b351. 020.09a1.130.11A0.45 士 0.04b121.000. 07,1.07士 0. 09*0. 780. IOIFN-p251.030.20a1. 090. 08a0.710. 12b351.080.12A1. ll0. 11A0. 620. 07B121.000. 051.080. 02*0. 900. llbTLR4251.030. 08*1.120. 09*0. 840. 05*351.020. 06*1. 100. 120.77o. oe8612lt000. 08B1. 100. 03M0. 830. 08IFN-y251.

38、010.12a1. ll0. 09Aa0. 780. 03區351.060. 03A1.150. 08A0. 70 0. 09B121.000. 020.81 士 0. 13b1. 160. 13ATNF-a251.010t160. 85 0. 08b1. llio.ll-350. 950. 070. 860. 09b1.120. 108121.000. lla1.040. 04a0. 840. 05bIL-10251.020. 05a1.090.17a0. 780. 04b351.060. 07A1. 140.05a0. 670.16B受体结合而引起胚胎滋养层细胞发生抗原掩蔽作 用。此外，免

39、疫球蛋白对细胞毒素的抵抗作用也可 能促进胚胎抗原的低水平表达，而胚胎组织抗原性 越低，可能受母体的排斥作用越小而有利于胚胎存 活叫3.2营养水平对子宫和胚胎中干扰素基因表达的 影响本研究中，严重限饲显著下调子宫和胚胎中 IFN-aJFN-p基因表达，与Barry S的研究结果一 致。而IFN-aJFN-p介导非特异性免疫，是机体抵 御感染的第一道防线，故严重限饲可能影响了母猪 和胚胎的非特异性免疫功能；中营养水平上调IFN- a、IFN-|3基因表达，可能对胚胎存活有利。Bennett 等皿报道,IFN-aJFN-p高水平表达可能保护胚胎 免受母体免疫排斥和抑制病毒传播。人子宫IFN-a 表达

40、量上升和鼠胚胎附植区域产生IFN-a的免疫 细胞增多，表明IFN-a可能对附植具有重要调节作 用5九此外,IFN-a对IRG1 （干扰素调节基因1）和 P27（干扰素可诱导基因）的激活机制可能涉及信号 传导与转录活化因子（STATs）3K。另据报道，胚 胎IFN-p产生量下降可引起母体对胚胎的接受作用 减弱而导致妊娠失败5人本试验中严重限饲显著 下调IFN-y基因表达，可能影响了母猪和胚胎的特 异性免疫功能。Tayade等歩报道，妊娠早期母猪 子宫内膜淋巴细胞IFN-y表达量上升。胚胎大量 分泌IFN-y可能在建立非侵袭性上皮绒毛膜胎盘 的过程中起积极作用。胚胎IFN-y还可能是子宫 腔上皮去

41、极化的直接调节者，去极化作用引起子宫 组织的重建，对胚胎附植是必需的停。同时，胚胎 IFN-y可能刺激子宫内膜淋巴细胞的募集并激活其 功能，在调节对胚胎生长发育至关重要的子宫内膜 血管生成过程中发挥枢纽作用。因此，严重限饲 引起IFN-y基因表达量显著下调可能对胚胎存活 不利。3.3营养水平对初产母猪妊娠早期子宫和胚胎中 Mxl、TLR4、IL10和TNF-a基因表达的影响本研究中，中营养水平有上调Mxl基因表达量 的趋势。研究表明，母羊妊娠早期子宫基质和肌 层以及外周血淋巴细胞的Mx表达量显著升 高。初产母猪妊娠早期子宫Mx的表达量也上 调约。Mxl除参与子宫内膜抗病毒的免疫反应外， 还可能

42、作为妊娠识别时子宫内膜分泌作用或子宫重 建的一个重要调节者。本研究还发现，在母猪妊 娠12和25 d,营养水平对Mxl基因表达的影响与 对IFN-y的影响一致，表明初产母猪妊娠早期Mx 基因表达的调节可能与IFN-y有关，这与Hicks 等的报道一致。TLR4是一种重要的模式识别受体，在连接特 异性免疫和非特异性免疫方面起桥梁作用。本研究 表明，中营养水平有上调子宫和胚胎TLR4基因表 达的趋势。Juan等拔报道，妊娠鼠子宫TLR4的 mRNA表达量显著升高可能阻止子宫感染。同时， TLR4还可能防止激活胚胎附植过程中的炎症性过 程而抑制母体对胚胎的免疫排斥，这对胚胎附植顺 利进行很重要眾入据

43、报道，TLR4参与IFN叩基因 的启动26. IFN-p可诱导IRF7（干扰素调节因子 7）转录,IRF7被磷酸化后又可诱导IFN-a基因的表 达启动。同时，IFN-a反馈调节TLR4,从而诱导 IRF3（干扰素调节因子3）的激活，可引起细胞中 IFN-B基因表达量上升273, IFN-a也能通过上调 TLR4的表达量来增强TLR的反应性。严重限饲下调子宫和胚胎IL-10基因表达量， 这与Kuvibidila和Dai等”队可的报道一致。营养不 良会引起辅助性T细胞（Th细胞）减少而使细胞免 疫受损旳，而Th细胞分泌IL-10JFN-y等细胞因 子。IL-10是成功妊娠中最重要的细胞因子之一，

44、可保护胚胎免受母体免疫排斥七同时，子宫IL- 10对子宫细胞微环境中产生的有害细胞因子具有 反馈抑制作用网。Shaun等网研究还表明,IL-10 基因缺失鼠发生胚胎吸收及胚胎生长受阻现象。而 胚胎IL-10产生不足将导致病理妊娠状态七故 严重限饲引起IL-10基因表达量显著下调可能对胚 胎存活不利。本研究中，严重限饲显著上调TNF-a基因表 达,这与营养不良会损害TNF-a产生的一些研究结 果不一致山，W ,这可能是IL-10对TNF-a的抑制作 用引起的。据报道，人妊娠早期绒毛膜有高水平的 IL-10基因表达，而TNF-a基因表达量相对较 低口吼Robertson等报道JL-10通过下调TN

45、F- a等致炎细胞因子来调节抵抗炎症刺激的作用，进 而在胚胎附植过程中对胚胎起保护作用而抑制炎症 引起的病状。TNF-a上升会导致不良的妊娠结果， TNF-a可促进子宫细胞中的促凝血作用，降低附植 区血流量而影响胚胎附植，最终可能导致胚胎死 亡逐入Tayade等口句也报道，猪胚胎非健康附植区 域的TNF-a表达量升高。可见，在猪妊娠早期， TNF-a基因表达上调可能不利于胚胎存活。本试验中，高营养水平组子宫和胚胎IFN-a, IFN-p、IFN-y、Mxl、TLR4、IL-10 基因表达量略低 于中水平组，但未达显著水平。这可能有两方面原 因，一方面可能由于高营养水平造成的机体免疫损 伤,据报道，高营养水平可引起鼠的巨噬细胞痢、淋 巴细胞技的数量或成熟率降低，IFN-a、】FN-B,IL-