实验1蛋白质的两性电离和等电点优秀PPT.ppt

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1、【原理】【原理】【目的】验证蛋白质两性电离的性质【目的】验证蛋白质两性电离的性质,测定酪蛋白测定酪蛋白 的等电点。的等电点。碱负酸正碱负酸正【原理】【原理】当蛋白质溶液的当蛋白质溶液的pHpIpHpI时，蛋白质分子带时，蛋白质分子带 电电荷；当蛋白质溶液的荷；当蛋白质溶液的pHpIpHpI时蛋白质分子带时蛋白质分子带 电电荷。在荷。在pHpH值大于或小于值大于或小于pIpI的溶液中，由于存在电的溶液中，由于存在电荷膜的爱护，蛋白质分子不易析出。当溶液荷膜的爱护，蛋白质分子不易析出。当溶液pHpH等等于于pIpI时，溶液的溶解性最低，溶质简洁析出。根时，溶液的溶解性最低，溶质简洁析出。根据酪蛋白

2、在不同据酪蛋白在不同pHpH溶液中的溶解度来视察蛋白质溶液中的溶解度来视察蛋白质的两性电离，并测定其等电点。的两性电离，并测定其等电点。负负正正【试剂】【试剂】1.5g/L1.5g/L酪蛋白乙酸钠溶液酪蛋白乙酸钠溶液 2.0.01%2.0.01%溴甲酚绿（溴甲酚绿（BCGBCG）溶液（指示剂，）溶液（指示剂，pH3.85.4 pH3.85.4）3.0.04 mol/L 3.0.04 mol/L盐酸溶液盐酸溶液 4.0.04 mol/L 4.0.04 mol/L 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 5.1.0 mol/L 5.1.0 mol/L乙酸溶液乙酸溶液 6.0.1 mol/L 6.0.1 mol/

3、L乙酸溶液乙酸溶液 7.0.01mol/L 7.0.01mol/L乙酸溶液乙酸溶液 【器材】【器材】试管试管 试管架试管架 毛滴管毛滴管 记号笔记号笔 蓝蓝 黄黄 pH3.85.4 【实践操作】【实践操作】1.1.取干净大试管取干净大试管1 1支，按表如下操作支，按表如下操作颜色颜色滴数滴数滴数滴数滴数滴数颜色颜色滴数滴数颜色颜色颜色颜色颜色颜色蓝蓝 黄黄 pH3.85.4 【实践操作】【实践操作】2.2.取取3 3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，留支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，留意混匀意混匀加入物体（滴）加入物体（滴）1 1 2 2 3 3 蒸馏水蒸馏水 16 16 3

4、0 30 34 340.01mol/L0.01mol/L乙酸溶液乙酸溶液 6 6 0.1 mol/L0.1 mol/L乙酸溶液乙酸溶液 10 10 1.0 mol/L1.0 mol/L乙酸溶液乙酸溶液 24 24 5g/L5g/L酪蛋白乙酸钠溶液酪蛋白乙酸钠溶液 10 10 10 10 10 10溶液溶液PHPH值值 3.2 4.7 5.9 3.2 4.7 5.9 马上混匀各管，静置马上混匀各管，静置 10 10分钟，分钟，视察各管沉淀状况视察各管沉淀状况 【结果与分析】【结果与分析】沉淀状况沉淀状况 结果分析结果分析沉淀结果用沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。表示并记录于表中。【

5、留意事项】【留意事项】1.1.沉淀符号，沉淀符号，“”表示无沉淀，表示无沉淀，“”表示浑浊无表示浑浊无明显沉淀，明显沉淀，“”有明显沉淀，有小颗粒；有明显沉淀，有小颗粒；“”表示大块沉淀。表示大块沉淀。2.2.四人共用一组试剂，在本座位，依次轮番添加，不四人共用一组试剂，在本座位，依次轮番添加，不行四处走动。行四处走动。3.3.每组派一名代表到前面取一小试管蒸馏水，本组共每组派一名代表到前面取一小试管蒸馏水，本组共用。用。4.4.添加各种试剂留意用相应的毛滴管，不行混用！添加各种试剂留意用相应的毛滴管，不行混用！5.5.留意混匀试管，试验留意混匀试管，试验1 1中添加盐酸和氢氧化钠时留中添加盐

6、酸和氢氧化钠时留意边添加边震荡试管，接近意边添加边震荡试管，接近PIPI时逐滴添加，沉淀消逝时逐滴添加，沉淀消逝后停止添加试剂，在结果一栏记入添加试剂的滴数。后停止添加试剂，在结果一栏记入添加试剂的滴数。6.6.试验试验1 1出现明显沉淀，请老师检查后在试验报告上出现明显沉淀，请老师检查后在试验报告上并签字确认（应两次出现沉淀）。并签字确认（应两次出现沉淀）。7.7.试验试验2 2出现结果后请老师检查确认后赐予试验成果。出现结果后请老师检查确认后赐予试验成果。冒用他人结果，两人成果全部取消，并加倍扣分。冒用他人结果，两人成果全部取消，并加倍扣分。【实践操作】【实践操作】1.1.取干净大试管取干

7、净大试管1 1支，按表如下操作支，按表如下操作蓝色蓝色蓝色浅沉淀蓝色浅沉淀浅黄（白）浅黄（白）浅蓝色沉淀浅蓝色沉淀蓝色蓝色PH=PIPH=PI，达到等电点时，蛋，达到等电点时，蛋白质无电荷膜爱护，彼此白质无电荷膜爱护，彼此聚集，简洁析出。聚集，简洁析出。PHPHPIPI，此时蛋白质带正电荷，此时蛋白质带正电荷，彼此排斥，不简洁析出。彼此排斥，不简洁析出。PHPI，此时蛋白质带负电荷，此时蛋白质带负电荷，彼此排斥，不简洁析出。彼此排斥，不简洁析出。PH=PIPH=PI，达到等电点时，蛋，达到等电点时，蛋白质无电荷膜爱护，彼此白质无电荷膜爱护，彼此聚集，简洁析出。聚集，简洁析出。酪蛋白具有两性电离

8、的性质，酪蛋白具有两性电离的性质，PH=PIPH=PI时蛋白质简洁沉淀，时蛋白质简洁沉淀，PH PHPIPI或或PHPHPIPI时，蛋白质带正电荷或负电荷，彼此排斥，不简洁沉淀。时，蛋白质带正电荷或负电荷，彼此排斥，不简洁沉淀。PHPI，此时蛋白质带负电荷，此时蛋白质带负电荷，彼此排斥，不简洁析出。彼此排斥，不简洁析出。【小测试】【小测试】名词说明名词说明 1.1.蛋白质的等电点蛋白质的等电点 2.2.蛋白质的变性蛋白质的变性请填写下表请填写下表 【实践操作】【实践操作】2.2.取取3 3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，留支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，留意混匀意混匀加入物

9、体（滴）加入物体（滴）1 1 2 2 3 3 蒸馏水蒸馏水 16 16 30 30 34 340.01mol/L0.01mol/L乙酸溶液乙酸溶液 6 6 0.1 mol/L0.1 mol/L乙酸溶液乙酸溶液 10 10 1.0 mol/L1.0 mol/L乙酸溶液乙酸溶液 24 24 5g/L5g/L酪蛋白乙酸钠溶液酪蛋白乙酸钠溶液 10 10 10 10 10 10溶液溶液PHPH值值 3.2 4.7 5.9 3.2 4.7 5.9 马上混匀各管，静置马上混匀各管，静置 10 10分钟，分钟，视察各管沉淀状况视察各管沉淀状况 【结果与分析】【结果与分析】沉淀状况沉淀状况 结果分析结果分析酪

10、蛋白于酪蛋白于PH=4.7时最简洁析出，其等电点为时最简洁析出，其等电点为4.7。沉淀结果用沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。表示并记录于表中。精品课件精品课件！精品课件精品课件！2.2.加入班氏试剂的作用？加入班氏试剂的作用？酪蛋白的等电点是酪蛋白的等电点是4.74.7。【思索题】【思索题】1.1.加入班氏试剂的作用？加入班氏试剂的作用？蛋白质分子中肽链的两个末端，游离的蛋白质分子中肽链的两个末端，游离的羧基羧基可电离成带负电荷的阴离子，游离的可电离成带负电荷的阴离子，游离的氨基可氨基可电离成带正电荷的阳离子，此外多肽链中氨基酸电离成带正电荷的阳离子，此外多肽链中氨基酸残基的侧链中也有可以电离的酸性和碱性集团。残基的侧链中也有可以电离的酸性和碱性集团。