动物实验基本操作优秀PPT.ppt
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1、动物试验的基本操作动物试验的基本操作和操作技术和操作技术刘承武刘承武第一节第一节 常用的试验动物常用的试验动物 试验动物?试验动物?是指经人工饲育,对其携带的微生物、是指经人工饲育,对其携带的微生物、寄生虫实行限制,遗传背景明确或来寄生虫实行限制,遗传背景明确或来源清晰的,用于科学探讨、教学、鉴源清晰的,用于科学探讨、教学、鉴定及其他科学试验的动物。定及其他科学试验的动物。n试验动物必需具备试验动物必需具备4 4个条件:?个条件:?n敏感性敏感性n均一性均一性n易获得性易获得性n稳定性稳定性n动物试验:?动物试验:?n是以试验动物为试验对象的科学试验,包括是以试验动物为试验对象的科学试验,包括
2、以试验动物整体水平或试验动物局部器官及以试验动物整体水平或试验动物局部器官及系统(离体)的试验。系统(离体)的试验。n影响动物试验结果精确性的因素?影响动物试验结果精确性的因素?n与试验动物的选择、试验条件、试验技术及与试验动物的选择、试验条件、试验技术及方法有干脆的关系方法有干脆的关系-娴熟的技术是试验成娴熟的技术是试验成功的基础功的基础 试验动物的种类试验动物的种类n常用的有青蛙(常用的有青蛙(frogfrog)和蟾蜍()和蟾蜍(toadtoad)n鸟类(鸟类(birdsbirds)n小白鼠(小白鼠(mousemouse)n大白鼠(大白鼠(ratrat)n豚鼠(豚鼠(guinea pigg
3、uinea pig)n家兔(家兔(rabbitrabbit)n猫(猫(catcat)和犬()和犬(dogdog),等。),等。青蛙与蟾蜍(青蛙与蟾蜍(Frog and ToadFrog and Toad)青蛙与蟾蜍属两栖动物,青蛙与蟾蜍属两栖动物,其一些基本生命活动与其一些基本生命活动与哺乳动物近似,其离体哺乳动物近似,其离体组织和器官所需的生理组织和器官所需的生理环境比较简洁环境比较简洁(无须供氧无须供氧和恒温和恒温)。青蛙与蟾蜍常用于神青蛙与蟾蜍常用于神经生理、肌肉生理、心经生理、肌肉生理、心脏生理,微循环等试验。脏生理,微循环等试验。n特点和应用:特点和应用:n离体心脏能较长久地有节律地
4、搏动,常用于离体心脏能较长久地有节律地搏动,常用于视察药物对心脏的作用;视察药物对心脏的作用;n坐骨神经和腓肠肌标本可用来视察药物对四坐骨神经和腓肠肌标本可用来视察药物对四周神经、神经肌肉或横纹肌的作用;周神经、神经肌肉或横纹肌的作用;n肠系膜血管微循环试验等。肠系膜血管微循环试验等。鸟类鸟类n鸡:如离体心脏试验、肺炎试验、心鸡:如离体心脏试验、肺炎试验、心血管动脉粥样硬化试验等。血管动脉粥样硬化试验等。n鸭:乙型肝炎试验。鸭:乙型肝炎试验。n鸽:心血管动脉粥样硬化试验、呕吐鸽:心血管动脉粥样硬化试验、呕吐试验。试验。n鹌鹑(鹌鹑(quailquail):):小白鼠小白鼠(Mouse)Mous
5、e)是医学试验中用是医学试验中用途最广泛和最常用途最广泛和最常用动物。有多种品种。动物。有多种品种。n习性?习性?n易大量繁殖,广泛用于医学科学试验。易大量繁殖,广泛用于医学科学试验。n适用须要大量动物的试验,被广泛用于生物学、医适用须要大量动物的试验,被广泛用于生物学、医学、兽医学、生理学、遗传学、药理、毒理、肿瘤、学、兽医学、生理学、遗传学、药理、毒理、肿瘤、放射性、食品、生物制品等的科研、生产和教学。放射性、食品、生物制品等的科研、生产和教学。如药物筛选、半数致死量测定、抗感染、抗肿瘤药如药物筛选、半数致死量测定、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的探讨等,以及镇咳药试验、免疫学物及避孕药物的
6、探讨等,以及镇咳药试验、免疫学试验,等。试验,等。大鼠(大鼠(Rat)Rat)n有多种品种。有多种品种。n习性:宠爱啃咬,攻击性强、群居,昼伏夜习性:宠爱啃咬,攻击性强、群居,昼伏夜动。动。n对新环境适宜性强,行为表现多样,易接受对新环境适宜性强,行为表现多样,易接受通过强化进行的多种感觉指令的训练。通过强化进行的多种感觉指令的训练。n体积较小鼠大,易于复制多种病理学模型。体积较小鼠大,易于复制多种病理学模型。n大鼠应用于生理学、药理学、免疫学,内分大鼠应用于生理学、药理学、免疫学,内分泌学、神经生理、养分学、传染病、肿瘤和泌学、神经生理、养分学、传染病、肿瘤和肝外科等的探讨。肝外科等的探讨。
7、n也是医学及药学试验中常用的动物,如血压也是医学及药学试验中常用的动物,如血压试验(抗高血压药物试验)、胆管插管,或试验(抗高血压药物试验)、胆管插管,或用大白鼠视察药物的长期毒性、用大白鼠视察药物的长期毒性、行为学、消行为学、消化系统等方面的试验。一些在小白鼠身上不化系统等方面的试验。一些在小白鼠身上不便进行的试验可选用大白鼠,如抗炎试验中便进行的试验可选用大白鼠,如抗炎试验中关节炎模型的制备。关节炎模型的制备。豚鼠豚鼠(Guinea pig)n 习性:和顺胆小,宠爱群居和干燥清洁,好习性:和顺胆小,宠爱群居和干燥清洁,好动但不善跳动,草食性,听觉敏感喜叫。动但不善跳动,草食性,听觉敏感喜叫
8、。n主要特点和应用:对组胺敏感,常用于平喘主要特点和应用:对组胺敏感,常用于平喘药、抗组胺药的试验和皮肤毒理学的试验药、抗组胺药的试验和皮肤毒理学的试验,亦亦常用语急性高钾血症模型的试验。常用语急性高钾血症模型的试验。n免疫学中血液可供应补体。免疫学中血液可供应补体。家兔家兔(Rabbit)Rabbit)n习性:和顺胆小,宠爱独居和干燥清洁,习性:和顺胆小,宠爱独居和干燥清洁,草食性草食性n主要特点:体温调整稳定主要特点:体温调整稳定n家兔也是试验生理科学教学试验中最家兔也是试验生理科学教学试验中最常用的动物。常用的动物。n发热试验及热原试验、免疫学试验、发热试验及热原试验、免疫学试验、心血管
9、试验、生殖试验、眼科试验、心血管试验、生殖试验、眼科试验、皮肤试验等。皮肤试验等。犬犬(Dog)Dog)在以犬为试验动在以犬为试验动物的探讨成果中,物的探讨成果中,只有应用只有应用Beagle Beagle 才能被国际公认。才能被国际公认。n常用于视察药物对心脏泵功能和血流淌力常用于视察药物对心脏泵功能和血流淌力学的影响,心肌细胞电生理探讨,降压药学的影响,心肌细胞电生理探讨,降压药及抗休克药的探讨等。犬还可以通过训练,及抗休克药的探讨等。犬还可以通过训练,用于慢性试验探讨,如条件反射、高血压用于慢性试验探讨,如条件反射、高血压的试验治疗、胃肠蠕动和分泌试验、慢性的试验治疗、胃肠蠕动和分泌试验
10、、慢性毒性试验。毒性试验。非人灵长类动物,如非人灵长类动物,如猴猴(Monkey)Monkey)n主要用于药理学和毒理学、生殖生理、口主要用于药理学和毒理学、生殖生理、口腔医学)养分、代谢、行为学和高级神经腔医学)养分、代谢、行为学和高级神经活动探讨及老年病、器官移植、眼科、内活动探讨及老年病、器官移植、眼科、内分泌病和畸胎学、肿瘤学。分泌病和畸胎学、肿瘤学。n也用于传染病探讨,猴可感染人类特有的也用于传染病探讨,猴可感染人类特有的传染病。如制造和鉴定脊髓灰质炎疫苗恒传染病。如制造和鉴定脊髓灰质炎疫苗恒河猴是唯一的试验动物。河猴是唯一的试验动物。猫(猫(CatCat)猫猫的的神神经经系系统统和
11、和循循环环系系统统较较发发达达,与与人人很很相相像像。常常用用于于神神经、循环和呼吸方面的试验。经、循环和呼吸方面的试验。猪猪(Pig)常常应应用用于于皮皮肤肤烧烧伤伤、肿肿瘤瘤学学、免免疫疫学学、心心血血管管及及糖糖尿尿病病、遗遗传性和养分性疾病、移植、外科手术等方面的探讨传性和养分性疾病、移植、外科手术等方面的探讨 其次节其次节 试验动物的分类试验动物的分类近交系 近交系一般是指接受20代以上全同胞兄弟妹妹或亲子(子女与年青的父母)进行交配,而培育出来的遗传基因纯化的品系。(F98.6%)杂交一代 由两个近交系杂交产生的子一代称为杂交一代。它既有近交系动物的特点,又获得了杂交优势。封闭群
12、在同一血缘品系内,不以近交方式,而进行随机交配繁衍,经五年以上育成的相对维持同一血缘关系的种群。1.按遗传学特征分类突变品系 在育种过程中,由于单个基因的突变,或将某个基因导入,或通过多次回交“留种”,而建立一个同类突变品系,此类个体中有具同样遗传缺陷或病态。非纯系 即一般随意交配繁殖的杂种动物。杂种动物具有旺盛的生命力,适应性强,繁殖率高,生长快,易于饲养管理。个体差异大,反应性不规则,试验结果的重复性差。但其中包含有最敏感的与最不敏感的两种极端的个体。(二)试验动物的分类(二)试验动物的分类一般动物(Conventional animals,CV)又称一级动物,是微生物限制要求中最低的一个
13、级别的动物,要求不带有动物烈性传染病和人畜共患病原体。清洁动物(Clean animals,CL)又称二级动物,除不带有一般动物应解除的病原体外,还不应携带对动物危害大和对科学试验干扰大的病原体。2.按微生物学分类无特殊病原体动物(Specific pathogens free animal,SPF动物)SPF动物又称三级动物,除不带有一般动物、清洁动物应解除的病原体外,还应解除有潜在感染或条件性致病的病原体,以及对试验干扰大的病原。无菌动物(Germfree animals,GF)和悉生动物(Gnotobiotic animals,GN)四级动物。无菌动物是指接受当前的技术手段无法在动物体表
14、、体内检出一切其他生物体。第三节第三节 试验动物的选择试验动物的选择n由于动物对外界刺激的反应存在个体差由于动物对外界刺激的反应存在个体差异,在选择试验动物时,还应留意动物异,在选择试验动物时,还应留意动物的年龄、体重、性别、生理状态、健康的年龄、体重、性别、生理状态、健康状况及其品系、等级等因素对试验的影状况及其品系、等级等因素对试验的影响。响。例如,过敏反应或变态反应的探讨宜选用豚鼠,因为豚鼠易于致敏。因家兔体温变更灵敏,故常用于发热、热原检定、解热药和过热的试验。狗、大鼠、家兔常用于高血压的探讨。试验动物的种属选择 应留意影响动物试验效果的各种因素。尽可能选择其结构、功能和代谢特点接近于
15、人类的动物,不同种属的动物对于同一刺激的反应也不同。试试验验动动物物品品系系的的选选择择 同同一一种种属属动动物物的的不不同同品品系系,对同一刺激的反应也有很大差异。对同一刺激的反应也有很大差异。例如:DBA2小鼠100的可发生听源性癫痫发作;而C57BL小鼠根本不出现这种反应 n选用的动物应能较好地反映试验的目的,并符合选用的动物应能较好地反映试验的目的,并符合节约的原则。节约的原则。n例如:例如:n半数致死量和半数有效量:小白鼠;半数致死量和半数有效量:小白鼠;n抗过敏试验:豚鼠抗过敏试验:豚鼠n在体心脏试验:蛙、大白鼠、豚鼠、猫、犬;在体心脏试验:蛙、大白鼠、豚鼠、猫、犬;n离体心脏试验
16、:蛙、大白鼠、豚鼠、家兔;离体心脏试验:蛙、大白鼠、豚鼠、家兔;n离体血管试验:蛙的后肢血管、大白鼠和家兔的离体血管试验:蛙的后肢血管、大白鼠和家兔的主动脉等。主动脉等。第四节第四节 试验动物的性别鉴别、编号、捉拿试验动物的性别鉴别、编号、捉拿与固定与固定n1.1.试验动物的性别鉴别试验动物的性别鉴别n 在常用的动物中,较大的动物在常用的动物中,较大的动物(如家兔、如家兔、猫、犬等猫、犬等)可以从生殖器辨别其性别,而较小可以从生殖器辨别其性别,而较小的动物的动物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性别鉴的性别鉴别,通常以肛门与生殖孔之间的距离来推断,别,通常以肛门与生殖孔之间
17、的距离来推断,距离近者为雌性,距离远者为雄性。距离近者为雌性,距离远者为雄性。雄 雌图3-2-7 小鼠性别的特征n蛙和蟾蜍蛙和蟾蜍 n毁脑和毁脊髓:左手食指和中指夹持蛙或蟾毁脑和毁脊髓:左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部,无名指和小指握持双下肢,右手蜍的头部,无名指和小指握持双下肢,右手持刺针进行操作。持刺针进行操作。n淋巴囊注射:左手握持蛙或蟾蜍,食指和中淋巴囊注射:左手握持蛙或蟾蜍,食指和中指夹住左前肢,拇指压住右前肢;右手将双指夹住左前肢,拇指压住右前肢;右手将双下肢拉直,左手无名指及小指将其压住而固下肢拉直,左手无名指及小指将其压住而固定。定。2、动物的捉拿、固定、动物的捉拿、固定蟾蜍A
18、B图3-2-1 青蛙(或蟾蜍)捉拿法 图3-2-2 青蛙(或蟾蜍)固定法n小白鼠小白鼠 可实行双手法和单手法两种形式。可实行双手法和单手法两种形式。右手提起鼠尾,放在鼠笼盖或其他粗糙右手提起鼠尾,放在鼠笼盖或其他粗糙面上,向后方轻拉,小白鼠则将前肢固定于面上,向后方轻拉,小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。此时快速用左手拇指和食指捏粗糙面上。此时快速用左手拇指和食指捏n 住小白鼠颈背部皮肤住小白鼠颈背部皮肤n (见图见图),并以小指与手,并以小指与手n 掌尺侧夹持其尾根部,掌尺侧夹持其尾根部,n 固定于手中。固定于手中。小鼠图3-2-2小白鼠的捉拿法n大白鼠大白鼠n简洁激怒咬人,捉持时左手应戴防护手
19、套或简洁激怒咬人,捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠,先用右手抓住鼠尾,再用用厚布盖住大鼠,先用右手抓住鼠尾,再用左手拇指和食指握住头部,其余手指与手驾左手拇指和食指握住头部,其余手指与手驾驭住背部和腹部驭住背部和腹部(见图见图)。n 不要用力过大,切勿捏不要用力过大,切勿捏n 其颈部,以免窒息致死。其颈部,以免窒息致死。n豚鼠豚鼠 性情和顺不咬人,可用左手干脆从背性情和顺不咬人,可用左手干脆从背侧握持前部躯干,体重小者用一只手捉持,侧握持前部躯干,体重小者用一只手捉持,体重大者宜用双手,右手托住臀部体重大者宜用双手,右手托住臀部(见图见图)。家兔n猫猫较为和顺,可用一只手捉住猫的颈部猫猫
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